Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

1021
Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

<...> Скудность клинической симптоматики и отсутствие специфицирующих признаков у TORCH-инфекций способствовали привлечению лабораторных методов для их выявления и верификации этиологических факторов. При обследовании беременных и новорожденных приоритет получили косвенные методы лабораторной диагностики TORCH-инфекций, направленные на выявление в крови маркеров специфического иммунного ответа (антител) и оценку динамики их концентрации [6–12, 17]. Для обнаружения и количественной оценки специфических АТ используют преимущественно иммуноферментный анализ (ИФА) и линейный иммуноблоттинг (ЛИБ). <...>

ля дифференцированного определения антител одновременно к нескольким антигенам возбудителей TORCH-инфекций авторами настоящей работы разработана медицинская технология иммунохимического лабораторного исследования в формате ЛИБ, при которой в качестве твердой фазы (иммуносорбента) используются полоски нитроцеллюлозной мембраны (стрипы) с дискретно размещенными на них антигенами возбудителей инфекции.

При изучении литературных данных о специфичности и иммуногенности для человека были отобраны очищенные нативные и рекомбинантные антигены основных возбудителей TORCH-инфекций для последующего их размещения на иммуносорбенте:

  • нативный антиген Toxoplasma gondii и рекомбинантный аналог антигена токсоплазмы р30;
  • нативный антиген вируса краснухи;
  • рекомбинантный аналог мозаичного антигена цитомегаловируса, содержащий иммунодоминантные последовательности белков рр150, рр52, рр28 и gB;
  • рекомбинантные аналоги антигена G1 вируса простого герпеса 1 типа и антигена G2 вируса простого герпеса 2 типа.

Кроме этого, на иммуносорбенте были размещены:

  • международный стандарт ВОЗ Anti-Rubella Immunoglobulin, Human NIBSC code: RUBI-1-94, представляющий собой антитела к вирусу краснухи – иммуноглобулины человека класса G в концентрации 15–20 МЕ/мл (линия «Rub. Cut off»);
  • три контрольные линии, две из которых («0,5+» и «2,0+») содержат иммуноглобулины человека класса G или М в разных концентрациях для калиб­ровки результатов исследования, и одна линия («КВО») содержит антитела к IgG/IgM человека для контроля внесения образца.

Размещение антигенных линий на стрипах представлено на схеме (рисунок).

Для оценки чувствительности и специфичности разработанных методик исследованы контрольные сыворотки, содержавшие (n = 94) и не содержавшие (n = 47) антитела к антигенам возбудителей инфекций TORCH-группы <...>

При исследовании всех перечисленных панелей контрольных сывороток с использованием разработанной методики получено полное совпадение результатов определения специфических антител с паспортными характеристиками каждой панели, и таким образом была показана 100% чувствительность и специфичность новой методики.

Клиническую информативность по ГОСТ Р 53022.3-2008 [16] комплекта № 1 новой методики изучали при исследовании 1115 сывороток крови, полученных у беременных женщин и лиц, проходивших лабораторное обследование в диагностическом центре El Clinic (г. Электрогорск) и в Московской областной станции переливания крови (г. Москва). В качестве реагентов сравнения использовали соответствующие наборы для определения антител к антигенам каждого из возбудителей TORCH-группы методом ИФА, разрешенные к применению в Российской Федерации. Полученные результаты представлены в табл. 1. <...>

Таблица 1. Результаты обнаружения специфических антител класса G к антигенам возбудителей TORCH-инфекций методами ИФА и линейного иммуноблоттинга в 1115 образцах крови

Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

Представленные данные демонстрируют наличие расхождений результатов определения антител класса G разными методами (ИФА и ЛИБ): к возбудителю токсоплазмоза – в 3 (1,19%) случаях из 253, краснухи – в 4 (1,16%) из 344, к ЦМВ – в 1 (0,31%) из 323, к ВПГ-1 – в 4 (2,22%) из 180 и к ВПГ-2 – в 4 (2,16%) из 185 случаев. Эти 16 образцов, в которых при выявлении АТ методами ИФА и ЛИБ были получены дискордантные результаты, дополнительно исследованы при использовании наборов реагентов Recomline TORCH Screening IgG фирмы «Микроген» (Германия) (табл. 2). <...>

Таблица 2. Сопоставление результатов обнаружения специфических антител класса G к антигенам возбудителей TORCH-инфекций при использовании линейного иммуноблоттинга в 16 образцах крови

Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

Как следует из приведенных в табл. 2 данных, результаты выявления АТ при использовании новой методики в подавляющем большинстве случаев – в 75 (93,75%) из 80 – совпадали с таковыми при применении набора реагентов Recomline TORCH Screening IgG.

Детализированный анализ полученных данных позволил установить полное совпадение результатов определения специфических антител к возбудителю токсоплазмоза и ВПГ-1 при применении названных методик, расхождение результатов в отношении определения антител к Rubella virus– по 1 образцу, к ЦМВ – по 3 образцам и к ВПГ-2 – по 1 образцу. При этом из установленных 5 случаев расхождения в 3 – различие заключалось между результатами положительными («+») и неопределенными («+/-»), в 2 случаях – между неопределенными («+/-») и отрицательными («-»).

По совокупности совпадающих результатов исследования биологических образцов методами ИФА и ЛИБ двумя наборами реагентов разных производителей осуществлен расчет и сравнительная оценка показателей клинической информативности (клинической чувствительности, специ­фичности и диагностической эффективности) предложенной методики определения специфических АТ (табл. 3).

Таблица 3. Показатели клинической информативности определения IgG к возбудителям TORCH-инфекций

Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

R – Recomline TORCH Screening IgG (R).

Л – новая методика в формате ЛИБ.

Представленные данные позволили прийти к заключению о достаточно высокой диагностической эффективности разработанной методики и применявшихся наборов реагентов. На основании полученных данных можно полагать, что при выявлении разночтений в результатах скринингового определения специфических IgG методами ИФА и ЛИБ, приоритет имеют данные, полученные методом ЛИБ, так как для них была установлена более высокая диагностическая эффективность (99,4–100%).

Для определения клинической информативности методики, разработанной для определения специфических АТ класса IgM методом ЛИБ, исследовали 860 сывороток крови, полученных от беременных женщин и лиц, проходивших плановое или специализированное обследование в диагностических целях. Наборами реагентов сравнения служили соответствующие наборы реагентов для определения антител IgM к антигенам возбудителей группы TORCH-инфекций, имеющие регистрацию в Российской Федерации. Полученные результаты представлены в табл. 4. <...>

*Статья опубликована с сокращениями, полностью публикацию читайте в бумажной версии



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Интервью

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Алексей ПИНЧУК: журналу «Здравоохранение». Главные темы беседы – изменение правового поля донорства в России




Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2016. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль