Лабораторная диагностика сепсиса: биологические маркеры и тест-системы

614

Иммунная система способна быстро реагировать на внедрение инфекционного агента с помощью toll-рецепторов. Например, TLR-2 «распознает» пептидогликаны грамположительных бактерий, а TLR-4 – липополисахариды грамотрицательных бактерий. 

Сепсис – патологический процесс, в основе которого лежит реакция организма в виде системного воспаления на инфекцию различной природы (бактериальную, вирусную, грибковую).

Критерии диагностики и классификация сепсиса были предложены согласительной конференцией Американского колледжа пульмонологов и Общества специалистов критической медицины ACCP/SCCM в 1992 г. (табл. 1).

Таблица 1

Классификация и критерии диагностики сепсиса

Патологический синдром

Клинико-лабораторные признаки

Синдром системной воспалительной реакции

Наличие двух или более признаков:

температура тела выше 38 оС или ниже 36 оС;

пульс выше 90 ударов в минуту;

одышка свыше 20 в минуту или гипервентиляция РаСО2 артериальной крови менее 32 мм рт. ст.;

лейкоциты в периферической крови более 12×109/л или менее 4×109/л, или наличие незрелых форм более 10,0%

Сепсис

Наличие очага инфекции и двух или более признаков синдрома системной воспалительной реакции

Тяжелый сепсис

Сепсис, сочетающийся с органной дисфункцией, гипотензией, нарушением тканевой перфузии: олигурия, лактатемия, острое нарушение сознания

Септический шок

Сепсис с признаками тканевой и органной гипоперфузии и артериальной гипотонией, требующей введения катехоламинов

Синдром полиорганной дисфункции

Дисфункция двух или более систем органов

Рефрактерный септический шок

Сохраняющаяся артериальная гипотония, несмотря на адекватную инфузионную, инотропную и вазопрессорную терапию

По наличию входных ворот выделяют сепсис гинекологический, урогенный, одонтогенный, тонзиллярный, пупочный, раневой и другие формы. В Международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ-10) сепсис классифицируется по этиологическому принципу. Выделены формы септицемии в период после абортов, родов, а также постпроцедурная форма, после иммунизации, инфузий, трансфузий, сепсис пупочный и новорожденного, которые классифицируют в соответствующих рубриках. Кроме того, септицемия выделена при различных инфекционных болезнях (актиномикозная, сибиреязвенная, кандидозная, при туберкулезе, брюшном тифе и др.). В зависимости от остроты и длительности течения выделяют следующие формы сепсиса:

  • молниеносный (длительностью до суток);
  • острейший (от 1 до 3 суток);
  • острый (до 2–3 недель);
  • затяжной (более 3 недель).

В.Л. Белянин и М.Г. Рыбакова (2004) выделяют сепсис:

  • острейший (молниеносный), длительностью около 1–3 суток;
  • острый, длительностью до 14 суток;
  • подострый, длительностью от 2 до 12 недель;
  • хронический (затяжной, рецидивирующий), длительностью более 3 месяцев.

Проанализировав истории болезни 1051 пациента, которым был поставлен диагноз сепсиса, J.C. Jaramillo-Bustamante и др. установили, что в 48,0% случаев регистрировался септический шок, 25,0% тяжелый сепсис, и только в 27,0% случаев сепсис. У 43,0% пациентов был поставлен диагноз синдрома полиорганной недостаточности. Почти в 50,0% случаев этиологическим фактором развития сепсиса явились грамотрицательные бактерии.

В Санкт-Петербурге в 2000 г., по данным патологоанатомических вскрытий 45 366 умерших, от сепсиса погибло 95 чел. В 2002 г., по результатам 26 220 патологоанатомических вскрытий, сепсис был диагностирован уже у 116 чел. Подсчитано, что в США сепсис ежегодно уносит более 700 тыс. жизней, т. е. около 2 тыс. ежедневно. При этом септический шок наблюдается в 58,0% случаев тяжелого сепсиса. Летальность при сепсисе достигает 40,0%.

Сепсис является результатом сложного взаимодействия между микроорганизмом-возбудителем и системами иммунитета, воспаления и гемокоагуляции. Развитие и прогрессирование сепсиса и органной дисфункции возникает тогда, когда организм хозяина не способен подавить инфекцию.

Иммунная система способна быстро реагировать на внедрение инфекционного агента с помощью toll-рецепторов. Например, TLR-2 «распознает» пептидогликаны грамположительных бактерий, а TLR-4 – липополисахариды грамотрицательных бактерий. Связывание toll-рецепторов с соответствующими эпитопами микроорганизмов стимулирует внутриклеточные сигналы, увеличение транскрипции про- и антивоспалительных цитокинов. Хотя активированные нейтрофилы убивают микроорганизмы, но они также повреждают эндотелий с увеличением проницаемости сосудов, что проявляется отеком тканей. Кроме того, активированные эндотелиальные клетки выделяют окись азота, который действует как ключевой посредник септического шока.

Стимулирование на первых этапах развития сепсиса специфического гуморального и клеточного иммунных ответов приводит к повышению синтеза иммуноглобулинов, которые связываются с микроорганизмами, способствуя их гибели. Также различные виды Т-лимфоцитов секретируют про- (Т-хелперы) или противовоспалительные (Т-супрессоры) цитокины.

Еще одним важным аспектом в патогенезе сепсиса являются увеличение прокоагулянтного звена системы гемостаза и снижение его антикоагулянтной составляющей. Бактериальные липополисахариды, повреждая эндотелий, стимулируют выработку тканевого фактора, который служит пусковым фактором активации гемокоагуляции. Образование тромбов в микроциркуляторном русле усиливает гипоксию органов и тканей, усугубляя тем самым клинические проявления сепсиса. Также образующийся в процессе внутрисосудистого свертывания крови тромбин связывается с тромбомодулином, активируя систему протеина С. Активированный протеин С способен инактивировать факторы Va и VIIIа, угнетать синтез ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), а также уменьшать апоптоз, адгезию лейкоцитов и продукцию цитокинов. При сепсисе отмечается снижение уровней естественных антикоагулянтов – протеинов С и S, антитромбина III, а также ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), уменьшается синтез тромбомодулина, увеличивается образование PAI-1. Важным моментом является то, что при сепсисе провоспалительные и прокоагулянтный ответы организма могут усиливаться за счет вторичных ишемии и гипоксии, связанных с гиперпродукцией тканевого фактора и PAI-1.

Развитие полиорганной дисфункции при сепсисе может быть вызвано апоптозом иммунных, эпителиальных и эндотелиальных клеток. Апоптоз инициируется провоспалительными цитокинами, активированными В- и Т-лимфоцитами и циркулирующими глюкокортикоидами, уровни которых увеличиваются при сепсисе. Повышение уровня ФНО-α и бактериальных липополисахаридов при сепсисе также может индуцировать апоптоз легких и кишечного эпителия.

В настоящее время для применения в клинико-лабораторной практике предложено множество тестов для диагностики септических состояний, среди которых как новые, так и традиционно используемые.

ПРОКАЛЬЦИТОНИН – аминокислотный полипептид с молекулярной массой 13 кДа, синтезируется С-клетками щитовидной железы из препрокальцитонина. Прокальцитонин метаболизируется в щитовидной железе и не поступает в кровоток, поэтому уровень прокальцитонина у здорового человека в крови менее 0,5 нг/мл. В отличие от короткого периода полужизни кальцитонина (10 мин), прокальцитонин имеет более продолжительный период полужизни (22–35 ч) в плазме крови.

Главными и наиболее сильными стимуляторами продукции и выхода прокальцитонина в системный кровоток являются бактериальные тела и эндотоксины. Увеличение концентрации прокальцитонина наступает через короткое время после пика повышения уровня цитокинов. Однако высвобождение цитокинов после воздействия эндотоксина может самостоятельно индуцировать продукцию прокальцитонина.

Для измерения уровня прокальцитонина в плазме используется количественный иммунолюминометрический метод, позволяющий определять этот биомаркер в широком диапазоне концентраций. Для экспресс-диагностики разработан полуколичественный иммунохроматографический метод определения прокальцитонина в плазме или сыворотке крови (тест «BRAHMS PCT-Q»). С помощью тест-полоски можно установить приблизительную концентрацию прокальцитонина (в следующих пределах: менее 0,5 нг/мл; от 0,5 до 2 нг/мл; от 2 до 10 нг/мл; более 10 нг/мл) и сравнить ее со справочными значениями (табл. 2).

Таблица 2

Клиническая интерпретация результатов определения уровня прокальцитонина в крови

Прокальцитонин, нг/мл

Интерпретация

Тактика

Менее 0,5

Сепсис, тяжелый сепсис, септический шок исключены

Исключение наличия очага локализованной инфекции

0,5–2,0

Инфекция и сепсис возможны. Тяжелый сепсис и септической шок маловероятны

Поиск очага инфекции. Проведение исследования в динамике. Рассмотреть необходимость антибиотикотерапии

2,0–10,0

Высокая вероятность синдрома системной воспалительной реакции, связанного с бактериальным инфекционным осложнением

Активный поиск очага инфекции. Антибактериальная терапия необходима

Свыше 10,0

Высокая вероятность тяжелого сепсиса и септического шока. Высокий риск развития полиорганной дисфункции

Активный поиск очага инфекции. Необходимы антибактериальная и интенсивная терапия

Основными показаниями к применению данного исследования являются:

  • диагностика генерализованных форм бактериальных инфекций и сепсиса;
  • дифференциальная диагностика тяжелых бактериальных инфекций и вирусных инфекций, а также других патологических процессов, сопровождающихся сходной клинической картиной (лихорадка неясного генеза, послеоперационный период, множественные травмы и ожоги, острый панкреатит);
  • мониторинг эффективности проводимого лечения и прогноз при тяжелом сепсисе и септическом шоке.

Прокальцитониновый тест обладает широким концентрационным диапазоном (от < 0,5 нг/мл до > 500 нг/мл). Это свойство обусловливает возможность увеличения концентрации прокальцитонина по мере прогрессирования инфекции и полиорганной недостаточности, что подтверждается корреляцией оценки тяжести состояния и выраженности полиорганной дисфункции, определенными с помощью систем-шкал APACHE II и SOFA, и концентрации прокальцитонина . Концентрации прокальцитонина, превышающие 10 нг/мл, наблюдаются почти исключительно у больных с тяжелым сепсисом и септическим шоком.

Однако следует иметь в виду, что применение прокальцитонина в качестве единственного маркера сепсиса имеет определенные ограничения, при некоторых состояниях возможно получение как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. Неспецифическое по отношению к инфекции повышение уровня прокальцитонина наблюдается при массовой гибели клеток – концентрация маркера в крови после тяжелой травмы или хирургического вмешательства быстро повышается и при отсутствии инфекции нормализуется через 3–5 дней, в течение которых уверенно подтвердить или исключить сепсис на основе только определения прокальцитонина проблематично. Концентрация прокальцитонина низкая или повышена незначительно на ранних стадиях развития системной инфекции, пока она еще имеет локальный характер.

С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК (СРБ) принадлежит к семейству пентраксинов. СРБ состоит из пяти одинаковых субъединиц, нековалентно связанных между собой. СРБ имеет много свойств, характерных для иммуноглобулинов: он связывается с бактериальными полисахаридами и гликолипидами, с поврежденными мембранами и с экспонированными ядерными антигенами.

При воспалении концентрация СРБ в плазме крови значительно увеличивается (в 10–100 раз). Выявлена прямая связь между изменением уровня СРБ, тяжестью и динамикой клинических проявлений воспаления. Именно поэтому измерение концентрации СРБ широко применяется для мониторинга и контроля эффективности терапии бактериальных и вирусных инфекций, хронических воспалительных заболеваний, онкологических заболеваний, осложнений в хирургии и гинекологии и др. Секреция СРБ начинает повышаться через 4–6 ч после попадания в организм инфекционного агента, его концентрация удваивается каждые 8 ч и достигает пика через 36–50 ч. После элиминации возбудителя концентрация СРБ быстро снижается, т. к. он имеет период полураспада 19 ч.

При бактериальной инфекции наблюдаются самые высокие уровни СРБ (100 мг/л и выше). При эффективной терапии концентрация СРБ снижается уже на следующий день, а если этого не происходит, с учетом изменений уровней СРБ решается вопрос о выборе другого антибактериального лечения.

При подозрении на сепсис у новорожденных, концентрация СРБ более 12 мг/л является показанием для немедленного начала противомикробной терапии.

При вирусной инфекции СРБ может повышаться лишь незначительно (меньше 20 мг/л), что используется для дифференцирования вирусной и бактериальной инфекции.

Если в течение 4–5 дней после хирургической операции уровень СРБ продолжает оставаться высоким (или увеличивается), это указывает на развитие осложнений (пневмонии, тромбофлебита, раневого абсцесса).

ЭНДОГЕННЫЕ АНТИМИКРОБНЫЕ ПЕПТИДЫ (АМП) и белки играют очень важную роль в защитной системе организма. Относительно крупные антимикробные белки, содержащие более 100 аминокислот, чаще всего представляют собой литические ферменты, белки, связывающие питательные вещества или содержащие сайты, направленные против специфических микробных макромолекул. АМП имеют меньший размер и, как правило, действуют путем нарушения структуры или функции клеточной мембраны микроорганизмов. Некоторые АМП синтезируются постоянно, синтез других индуцируется в ответ на инфекцию или воспаление.

В клинической лабораторной практике определение уровней АМП может быть полезно в качестве маркеров системной активации нейтрофилов, при мониторинге течения инфекционных и воспалительных заболеваний. На сегодняшний день у человека обнаружено три семейства пептидов-антибиотиков – дефензины, кателицидины и гистатины.

ДЕФЕНЗИНЫ – катионные пептиды иммунной системы, активные в отношении бактерий, грибков и многих оболочечных и безоболочечных вирусов. Они состоят из 18–45 аминокислот. Иммунные клетки используют дефензины для уничтожения бактерий, поглощенных при фагоцитозе. Обычно дефензины присоединяются к клеточной мембране микроба и формируют в последней порообразные разрывы.

Описано три вида дефензинов: альфа-, бета- и тета-дефензины. Альфа-дефензины обнаруживаются в основном в нейтрофилах и клетках Панета, бета-дефензины – лейкоцитах и эпителиальных клетках, сердечной и скелетных мышцах. Тета-дефензины у человека не выявлены, они описаны только у некоторых видов приматов.

Альфа-дефензины представлены преимущественно дефензинами HNP 1–3. Они синтезируются только нейтрофилами, поэтому считаются специфическими маркерами этих клетоr. У здоровых лиц в плазме очень низкий уровень дефензинов (от неопределяемых величин до 50–100 нг/мл), однако в условиях сепсиса содержание этих пептидов может возрасти до 10 мг/мл и даже выше. При определении содержания дефензинов очень важно соблюдать правила выполнения преаналитического этапа, т. к. активация нейтрофилов во время свертывания крови или долгое хранение проб с антикоагулянтом приводят к высвобождению АМП.

Экспрессия бета-дефензинов в кишечнике индуцируется провоспалительными цитокинами, а также микроорганизмами (например E. coli, H. pylori или P. aeruginosa). Снижение уровня бета-дефензинов наблюдается у пациентов с болезнью Крона, повышенный уровень – у пациентов с язвенным колитом.

КАТЕЛИЦИДИНЫ – семейство антимикробных белков, которые главным образом обнаружены в пероксидаза-отрицательных гранулах нейтрофилов. Катионный антимикробный белок (hCAP18) является в настоящее время единственным идентифицированным кателицидином у человека. Помимо нейтрофилов, hCAP18 выявлен в лимфоцитах и моноцитах, эпителии рта, языка, пищевода, шейки матки и вагины, легочной ткани, кератиноцитах при воспалительных заболеваниях и эпидидимите.

Антибактериальный С-концевой фрагмент hCAP18 – LL37, проявляет антимикробную активность как против грамотрицательных, так и грамположительных бактерий, грибов, некоторых вирусов и простейших. Этот пептид оказывает синергический антибактериальный эффект с дефензинами. LL37 может связывать липополисахариды и нейтрализовать их способность индуцировать эндотоксический шок. Этот пептид является важным фактором реэпителизации ран, также была показана его ангиогенная активность in vivo и in vitro. Более того, LL37 функционирует в качестве хемотаксического агента для нейтрофилов, моноцитов и Т-клеток.

Установлено, что нормальное содержание LL37 в плазме составляет 1,2–1,8 мкг/мл. Во время инфекционных заболеваний концентрация этого белка повышается.

ЛАКТОФЕРРИН представляет собой железосвязывающий белок семейства трансферринов. Этот гликопротеин в основном локализован в специфических гранулах полиморфноядерных нейтрофилов, также присутствует в эпителии, ряде биологических жидкостей и секретов. Лактоферрин является естественным антибактериальным, антигрибковым и антивирусным пептидом, обладает антиоксидантными и иммуномодулирующими свойствами, поддерживает микробаланс в гастро-интестинальной системе. Концентрация лактоферрина в плазме крови коррелирует с общим количеством нейтрофилов и периодом оборота этих клеток, что позволяет использовать определение данного белка в биологических жидкостях организма в качестве показателя активации нейтрофилов.

При наличии инфекции концентрация лактоферрина в биологических жидкостях может увеличиваться в 10–100 раз. В кале здоровых людей этот белок выявляется в концентрации ~1 мкг/г, в то время как у пациентов с воспалительными (болезнь Крона) или опухолевыми заболеваниями кишечника содержание лактоферрина достигает 75–310 мкг/г. Полагают, что фекальный лактоферрин является очень чувствительным и специфичным маркером при диагностике данных патологий.

БАКТЕРИЦИДНЫЙ БЕЛОК, ПОВЫШАЮЩИЙ ПРОНИЦАЕМОСТЬ КЛЕТОК, BPI (САР57, ВР55) – белок c молекулярной массой 55 кДа, содержится в азурофильных гранулах полиморфоноядерных лейкоцитов и составляет от 0,5 до 1,0% общего белка нейтрофилов человека. BPI способен связываться с бактериальными липополисахаридами и нейтрализовать их активность. Благодаря высокой аффинности BPI к липиду А липополисахаридов, антимикробная активность этого белка в большей степени выражена в отношении грамотрицательных бактерий. Более высокие концентрации BPI обладают микробицидным действием в отношении L-форм грамположительных микроорганизмов, грибов (например Histoplasma capsulatum) и Toxoplasma gondii.

BPI быстро высвобождается из нейтрофилов в ответ на появление бактериальных липополисахаридов. Содержание BPI у взрослых в 3–4 раза выше, чем у новорожденных, однако показано, что в плазме крови новорожденных с ранними клиническими проявлениями сепсиса уровень BPI значительно повышен и сравним с таковым у детей старшего возраста и взрослых с септическим синдромом. Представляется перспективным использование определения BPI в плазме крови в качестве маркера системного воспаления и бактериальной инфекции.

В плазме здоровых индивидуумов концентрация BPI составляет менее 0,5 нг/мл, при воспалении и сепсисе она увеличивается в 10 и более раз.

КАЛЬПРОТЕКТИН представляет собой гетерокомплекс кальций-зависимых белков, составляет до 60,0% цитоплазматических белков циркулирующих полиморфноядерных лейкоцитов; кроме того, он также обнаружен в моноцитах, макрофагах и в илеальных эозинофилах. Кальпротектин высвобождается из нейтрофилов и макрофагов во время их активации или гибели и вовлекается в активный воспалительный процесс. При воспалении кальпротектин экспрессируется также сквамозным эпителием.

Кальпротектин обладает антибактериальным, антигрибковым, а также иммуномодулирующим и антипролиферативным эффектами. Концентрация кальпротектина в плазме крови возрастает при заболеваниях, ассоциированных с повышением активности нейтрофилов. При воспалении желудочно-кишечного тракта гранулоциты мигрируют в стенку кишечника, поэтому кальпротектин можно обнаружить в кале. Известно, что экспрессия кальпротектина сопровождает различные воспалительные заболевания кожи (плоский лишай, красная волчанка, псориаз).

ЭЛАФИН (SKALP, эластаза-специфический ингибитор, ESI) относится к эпителиальным ингибиторам протеиназ. Предполагается, что он играет важную роль в регуляции процессов воспаления и защите от тканевых повреждений в многослойном эпителии. Элафин ингибирует лейкоцитарную эластазу и протеиназу-3 и в дополнение к этому служит субстратом для трансглутаминаз. Элафин конститутивно синтезируется в различных видах эпителия, включая волосяные фолликулы, эпителий пищевода, вагины и полости рта. В нормальных клетках кожи человека элафин отсутствует, однако быстро индуцируется во время воспалительных процессов, таких как псориаз и заживление ран.

В сыворотке/плазме крови здоровых индивидуумов содержится около 10–50 нг/мл элафина. При обострении псориаза наблюдается более чем 10-кратное увеличение концентрации этого белка. Показано, что элафин также обладает антимикробной активностью против широкого спектра бактерий.

ЭЛАСТАЗА НЕЙТРОФИЛОВ – основная сериновая протеиназа человека, присутствует главным образом в азурофильных гранулах нейтрофилов. Этот фермент способен расщеплять широкий спектр субстратов экстрацеллюлярного матрикса, включая эластин, протеогликаны, коллаген и фибронектин. Активность эластазы контролируется ингибиторами сериновых протеиназ, в т. ч. элафином/SKALP и SLPI, которые присутствуют во внеклеточной жидкости. При воспалении высвобождение эластазы из клеток приводит к быстрой инактивации ингибиторными макроглобулинами с образованием комплексов «эластаза – ингибитор». При длительной секреции эластаза, секретируемая в очагах воспаления, может вызывать серьезные повреждения тканей. Считается, что эта протеиназа играет важную роль в развитии разнообразных воспалительных нарушений, включая эмфизему легких, сепсис, артриты, нефриты и некоторые заболевания кожи. Нормальное содержание эластазы в плазме крови – ~55 нг/мл (29–86 нг/мл).

Однако использование нейтрофильной эластазы в качестве единственного маркера сепсиса имеет ряд недостатков. При помощи этого маркера сложно дифференцировать системную воспалительную реакцию и сепсис, изменения концентрации эластазы плохо коррелируют с тяжестью состояния пациента. Также увеличение концентрации эластазы может быть проявлением несептической воспалительной реакции после травм.

ПРЕСЕПСИН – белок с молекулярной массой 13 кДа, содержащий N-терминальный фрагмент CD14 мембранного белка макрофагов, который «распознает» сигнал о наличии бактерий, и не имеющий С-терминального участка, ответственного за связывание с липополисахаридами микроорганизмов. В настоящее время установлено, что пресепсин является гуморальным фактором, специфичным для фагоцитоза. Результаты модельных опытов на животных показали, что при развитии сепсиса уровень пресепсина начинает повышаться уже через 1,5 ч, а синтез провоспалительного интерлейкина ИЛ-6 – через 3 ч.

При локальной инфекции уровень пресепсина выше, чем при синдроме системного воспалительного ответа. Это указывает на отсутствие реакции данного белка на воспалительные процессы, не связанные с инфекциями. При сравнении специфичности пресепсина и других маркеров, применяемых для диагностики сепсиса, были получены следующие значения AUC ROC: для пресепсина – 0,845, СРБ – 0,815, интерлейкина ИЛ-6 – 0,672, прокальцитонина – 0,652.

Таким образом, пресепсин – гуморальный белок, выделяемый в циркуляцию фагоцитами при фагоцитозе. Он может служить новым высокоспецифичным и высокочувствительным маркером сепсиса, поскольку раньше и быстрее, чем другие известные маркеры, отражает его динамику. Определение уровня пресепсина весьма эффективно для ранней диагностики сепсиса, его мониторинга и прогнозирования неблагоприятных исходов.

ЛАЛ-ТЕСТ. Эндотоксин (липополисахарид А) является основной составляющей клеток грамотрицательных бактерий и первичным продуктом грамотрицательных бактерий, ответственным за септический шок.

Реакция лизата амебоцитов с эндотоксином была открыта в США в 1964 г., там же и был налажен выпуск первых готовых наборов. Поскольку первые исследования проводились на мечехвостах вида Limulus polyphemus, препарат, полученный из их крови, был назван Лизат амебоцитов Limulus (ЛАЛ-тест). Для активации ферментной системы реакции и образования геля нужны минимальные концентрации бактериальных эндотоксинов.

В настоящее время существует по меньшей мере 32 метода определения бактериальных эндотоксинов с помощью ЛАЛ-теста. Наиболее распространены следующие:

  • метод гелеобразования ­– бактериальные эндотоксины плазмы активируют в лизате амебоцитов комплекс ферментов, изменяющий физико-химические свойства смеси. Гель-тромб тест –полуколичественный метод гелеобразования;
  • турбидиметрический кинетический метод – основан на свойстве LAL мутнеть в присутствии эндотоксина. Скорость роста оптической плотности используют для количественного определения эндотоксина. Метод относительно быстрый, специфический, простой в выполнении и экономичный. Чувствительность зависит от протокола выполнения и оборудования;
  • метод с использованием хромогенного пептида – основан на применении хромогенного соединения чувствительного индикатора эндотоксина в присутствии LAL. При наличии эндотоксина LAL приобретает желтый цвет. Концентрацию эндотоксина определяют по увеличению оптической плотности (метод кинетический или «по конечной точке»).

Метод гелеобразования имеет целый ряд преимуществ перед остальными перечисленными ЛАЛ-методами:

  • не требует дорогостоящего оборудования;
  • не требует особых навыков выполнения.

Однако чувствительность этого метода значительно ниже, чем турбидиметрического и хромогенного методов определения содержания бактериальных эндотоксинов. Обладая высокой чувствительностью и специфичностью по отношению к эндотоксинам грамотрицательных бактерий, ЛАЛ-тест, хотя и не дает возможности идентифицировать конкретного возбудителя заболевания, позволяет выявить наличие или отсутствие бактерий или их эндотоксинов в биологических жидкостях. Результаты применения ЛАЛ-теста для диагностики бактериемии или септицемии у послеоперационных больных показывают хорошую корреляцию с ростом посевов культуры: 75,0% для положительных и 98,0% для отрицательных тестов.

ЛАЛ-тест может быть использован как быстрый и надежный метод для раннего обнаружения эндотоксинов в крови у пациентов, перенесших хирургические операции. ЛАЛ-тест служит методом мониторинга состояния пациентов с сепсисом, вызванным грамотрицательными патогенами, позволяющим своевременно вносить коррективы в метод лечения.

АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ ЭНДОТОКCИНОВ (ААЭ) предназначен для быстрого обнаружения и анализа относительной степени риска тяжелого сепсиса и исключения грамотрицательных бактериальных инфекций путем хемолюминисцентного биоимунного анализа пробы цельной крови. ААЭ™ дает возможность обеспечить информацию о критическом состоянии больного в отличие от обычного метода выращивания культур крови.

Результаты ААЭ™ ниже 0,40 (0,00–0,39) указывают на отсутствие грамотрицательных инфекций у реанимационных больных с подозрением на инфекцию.

В настоящее время стал применяться также EAA-ТЕСТ (EAA – Endotoxin Activity Assay), разработанный компанией «Spectral Diagnostics Inc», позволяющий выявлять уровень эндотоксинов в крови. Одна эндотоксиновая единица (1 EU) приблизительно соответствует 100 пг эндотоксина. Максимально допустимый уровень эндотоксина при внутривенном введении – 5 EU на кг тела в течение часа.

Таким образом, существующий широкий спектр лабораторных тестов для диагностики септических состояний позволяет специалистам выбрать для применения в практике исследования, наиболее пригодные для конкретных клинических ситуаций.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Интервью

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Алексей ПИНЧУК: журналу «Здравоохранение». Главные темы беседы – изменение правового поля донорства в России




Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2016. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль