Диагностика аллергий методом проточной цитометрии

417

Диагностика аллергии осуществляется комплексно и преимущественно основывается на описании клинической картины заболевания, а также собранном аллергологическом анамнезе и лабораторных исследованиях.

Лабораторная диагностика аллергии

Лабораторная аллергодиагностика применяется в следующих случаях:

  • в анамнестически сложных случаях;
  • при неоднозначных или сомнительных результатах кожных проб;
  • при имеющихся противопоказаниях к применению кожных проб.

Данный вид диагностики связан с рядом трудностей, которые обусловлены многообразием патогенетических механизмов аллергической реакции.

Большая часть применяемых лабораторных методов позволяет диагностировать заболевания, проявляемые реакциями гиперчувствительности немедленного тип, или реакциями первого типа. Это имеет особое клиническое значение, поскольку эти заболевания протекают особо тяжело.

Реакции аллергии первого типа обусловлены IgR-опосредованным выделением медиаторов из тучных клеток и сенсибилизированных базофилов при контакте с возбудителем (аллергеном) и часто наблюдаются при крапивнице, аллергическом рините, бронхиальной астме и др.

Преимущества и недостатки лабораторной диагностики

Преимущества:

  • объективность результатов исследования;
  • возможность выявления сенсибилизации к значительному числу аллергенов;
  • отсутствие противопоказаний для обследования;
  • отсутствие необходимости для отмены приема антигистаминных препаратов;
  • отсутствие патологических реакций во время обследования.

Недостатки:

  • вероятность получения ложных (отрицательных) результатов в период ремиссии, а также из-за наличия латентной сенсибилизации;
  • высокая стоимость обследования;
  • длительное время получения результата теста.

Тест активации базофилов

Одним из самых перспективных и функциональных клеточных тестов в последнее время признается тест активации базофилов. В его основе определение качества активированных  базофилов после их стимуляции различными аллергенами in vivo (пищевые, инсектные, ингаллякционные и др.). Данный метод позволяет моделировать ситуацию контакта аллергена с базофилами периферической крови пациента.

Основные области применения теста:

  • выявление разных видов аллергенов для подтверждения и диагностики IgE-зависимой аллергии или псевдоаллергии., в случае, если проведение кожных тестов и анализа противоречивых IgE является невозможным;
  • оценка эффективности препаратов против IgE, а также аллерген-специфической иммунотерапии;
  • оценка возможности повторного введения продукта после окончания элиминационной терапии.

Диагностика аллергии методом проточной цитометрии

На сегодняшний день различные производители предлагают наборы для выявления аллергии методом проточной цитометрии (активация базофилов). В таблице ниже представлена характеристика таких тестов.


Клетки/маркеры

Flow-CAST

BASOTEST

Allergenicity kit

Выделение лейкоцитов

Рекомендовано

Не требуется

Не требуется

Маркеры для идентификации базофилов

Рецептор для IgE (FcεRI)

Рецептор для IgE (FcεRI)

CD3-CRTH2 CD203c

Маркер для выявления активации базофилов

CD63

CD63

CD203c

Типы клеток, на которых представлены маркеры активации

Базофилы, тучные клетки, тромбоциты, макрофаги

Базофилы

У метода проточной цитометрии существует ряд преимуществ:

  • для исследования необходимо небольшое количество образца крови  (50-100 мкл);
  • исследование маркеров активации происходит на уровне одной клетки;
  • получение результата анализа в краткие сроки (1-2 часа);
  • идентификация базофилов происходит без их выделения из цельной крови.

Алгоритм проведения теста

В ходе теста происходит:

  • исследование спонтанной активации базофилов при негативном контроле (с буферным раствором);
  • исследование индуцированной активации базофилом при позитивном контроле (стимулирование IgE-антителами);
  • исследование индуцированной реакции базофилов при их стимуляции разными аллергенами (тестовая проба).

При активации базофилов необходимо соблюдать целый ряд условий.

Инкубация крови с потенциальными аллергенами для идентификации и оценки активации базофилов проводится при средней температуре в 37°С в полной темноте при наличии ионов кальция в течение 15 минут.

После лейкоциты фиксируют реагентами, которые входят в набор. Далее, после отмывки буфером и ресуспендирования пробы готовы для дальнейшего исследования методом проточной цитометрии. Данный метод предполагает оценку 500 базофилов.

Для корректного оценивания активации базофилов необходимо знать особенности используемого в наборе маркера активации:

  • при использовании маркера CD63 базальный уровень активации базофилов в большинстве случаев ниже 2%;
  • при использовании маркера CD203 уровень активации базофилов часто значительно выше в случае массового поступления аллергена, к примеру, при обострении астмы, в разгар цветения и т.д.

Противоаллергенные препараты не влияют на оценку результатов теста, однако, например, прием стероидов может снизить чувствительность этого метода.

Правила оценки позитивности теста

На сегодняшний день единых правил оценки позитивности теста активации базофилов, не установлено.

Существует два основных подхода к изучению активации  базофилов: оценка реактивности базофилов по изменению их количества по сравнению с начальным уровнем и оценка чувствительности базофилов исходя из концентрации аллергена, при которой большая часть всех исследованных базофилов становится активированной.

Второй подход является наиболее востребованным при оценке эффективности аллерген-специфической иммунотерапии. У разных исследователей отличается также пороговый уровень позитивности, который определяется по индексу стимуляции.

Под индексом стимуляции понимается отношение числа активированных базофилов в пробе с предполагаемым аллергеном к количеству активированных базофилов, в пробе с буферным раствором.

Специфичность и чувствительность теста

Метод проточной цитометрии позволяет отразить высокую чувствительность и специфичность при изучении влияния широкого спектра аллергенов: лекарственных, пищевых и др.

В таблице ниже представлены результаты чувствительности и специфичности активированных базофилов к разным аллергенам.


Вид аллергена

Специфичность

Чувствительность

Белок молока

90

91

Белок пшеницы

77,2

85

Рентгеноконтрастные вещества

100

62,5

β-лактамные антибиотики

80

55

Пыльца луговых трав

100

92,3

Контрольное исследование теста активации базофилов

Исследование проводилось с использованием специального набора Allergenicity kit в группе, состоящей из 350 детей с атопическим дерматитом.

Средний возраст детей, участвоваших в исследовании, составил от 2 до 3,5 лет.

У 240 детей наблюдалось течение заболевания средней тяжести, у 110 – тяжелое течение.

Уровень спонтанной активации базофилов у этих детей составлял 18,2, тогда как у здоровых детей этот показатель составляет 4,7.

Выяснилось, что активация базофилов  IgE-антителами у здоровых детей была значительно выше (79,1), чем у детей с атомическим дерматитом (29,1).

Чувствительность к белкам коровьего молока с использованием теста активации базофилов в исследовании составила 83%.

При повторном исследовании после проведения специальной диеты, исключающей аллергены, показал, что у 60-80% детей активация базофилов на аллергены исключенных продуктов, не выявляется.

Наибольшее снижение частоты выявления сенсибилизации при соблюдении диеты наблюдалось на аллергены следующих продуктов: говядины, круп рисовой и гречневой, коровьего молока, картофеля.

На рисунке ниже представлены показатели индекса активации базофилов на разные аллергены у детей с атомическим дерматитом и у условно здоровых детей.

Диагностика аллергий методом проточной цитометрии

Таким образом, тест активации базофилов методом проточной цитометрии является перспективным методов исследования гиперчувствительности немедленного типа.

Он рекомендуется в качестве компонента комплексной диагностики при выявлении пищевой и бытовой аллергии, а также в качестве теста-выбора при установлении лекарственной аллергии у пациентов в тяжелых случаях.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Интервью

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Алексей ПИНЧУК: журналу «Здравоохранение». Главные темы беседы – изменение правового поля донорства в России




Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2016. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль