Обзор литературы по современным методам лабораторной диагностики сальмонеллеза

2457
Обзор литературы по современным методам лабораторной диагностики сальмонеллеза

(по материалам, предоставленным компанией ГЕМ  http://www.hemltd.ru/publications)

Шуляк Б.Ф. Традиционные и новые подходы к лабораторной диагностике сальмонеллеза (ж. «Справочник заведующего КДЛ», 2009, № 12, 21—26)Сальмонеллез — одна из наиболее распространенных и опасных токсикоинфекций человека, сельскохозяйственных, домашних и диких животных. Его возбудитель, S. enterica, обитает преимущественно в кишечнике, но, выделяясь с фекалиями, он контаминирует почву и объекты внешней среды, через которые может передаваться животным и человеку. Однако чаще заражение сальмонеллами происходит при непосредственном контакте с источником инфекции или потреблении в пищу продуктов питания, контаминированных S. enterica. Согласно современной классификации S. enterica делится на 6 подвидов enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae и indica, которые дифференцируют по биохимической активности и обозначают цифрами I, II, IIIa, IIIb, IV и VI соответственно. Обзор посвящен традиционным и новым средствам и методам лабораторной диагностики сальмонеллеза.Лаупланд K.Б., Шенхейдер Х.К., Кеннеди К.Дж. и соавт. Бактериемия Salmonella enterica: результаты мультинационального масштабного обследования

(Laupland K.B., Schǿnheyder H.C., Kennedy K.J. et al. Salmonella enterica bacteraemia: a multinational population-based cohort study. BMC Inf Dis, 2010, 10:95)

На протяжении 8 лет (2000-2007 гг.) проводили массовое обследование пациентов в 6 регионах Финляндии, Австралии, Дании и Канады, в которых общее количество людей, подвергающихся риску заражения сальмонеллами, составляет 7,7 млн. Идентифицировали 622 случая сальмонеллезной бактериемии, а ее средняя ежегодная инцидентность в указанный период составила 1,02 на 100 000 чел. Инцидентность инфекций тифоидных (серотипов Typhi и Paratyphi) и нетифоидных (других серотипов) сальмонелл определена как 0,21 и 0,81 на 100 000 чел./год. Выявлены различия инцидентности сальмонеллезных инфекций как в разных регионах, так в разные сезоны и годы. Например, в последние годы эксперимента проявилась тенденция относительного повышения частоты нетифоидных сальмонеллезов, а инцидентность выявления у пациентов тифоидных серотипов сальмонелл, напротив, снизилась. При нетифоидных сальмонеллезах факторами риска признаны возраст пациентов и принадлежность к мужскому полу. При тифоидных инфекциях влияние пола не проявлялось, а между возрастом и заболеваемостью отмечена обратно-пропорциональная зависимость.Чи Л.-Х., Чи Ч.-Х., Хорн Я.-М. и соавт. Характеристика 13 мультирезистентных штаммов сальмонелл, выделенных от разных бройлеров и их сравнение с изолятами, полученными от людей

(Chiu L.-H., Chiu Cю-H., Horn Y.-M. et al. Characterization of 13 multi-drug resistant Salmonella serovars from different broiler chickens associated with those of human isolates. BMC Microbiol, 2010, 10:86)

Проведено бактериологическое обследование смывов из клоаки 1595 бройлеров на наличие сальмонелл. Определяли серогрупповую и сероваровую принадлежность изолятов последних, а также их генотип и чувствительность к антибиотикам. Частота изоляции бактерии от птицы разных линий и возраста была неодинаковой. Сравнили свойства штаммов сальмонелл, выделенных от 164 цыплят и 5314 заболевших сальмонеллезом людей того же региона. Изоляты «птичьего» и «человеческого» происхождений в большинстве случаев относились к серогруппам B, C1, C2-C3, D и E. От бройлеров и пациентов выделили изоляты сальмонелл, относящиеся к 13 и 66 сероварам, соответственно. Чаще всего обе группы изолятов относились к сероварам typhimurium, enteritidis, albany, derby и anatum; они обладали общими жгутиковыми антигенами Н1 (комплекс g , i; e,h; z4,z24) и H2 (комплекс 1 и —). У выделенных от людей изолятов всех серогрупп антигены H1i и H2– встречались чаще других. Отмечены различия чувствительности к антибиотикам «птичьих» изолятов, относящихся к разным серогруппам, сероварам, а также выделенным в разных регионах. Все они оказались чувствительными к цефазолину и цефтриаксону, но были высоко резистентны к ампициллину, хлорамфениколу, флумеквину, стрептомицину, сульфаметоксазол-триметоприму и тетрациклину. За исключением изолятов серогруппы C1, выделенных от бройлеров, и всех сероваров группы G, все остальные штаммы проявили мультирезистентность к антимикробным препаратам. Резистентными к ципрофлоксацину и/или энрофлоксацину оказались только изоляты, отнесенные к сероварам kubacha, typhimurium, grampian и mons.Чуй K.K.H., Вебб П., Рассель Р.М., Наумова Е.Н. Географическая вариабельность сальмонеллеза и тенденции частоты госпитализации заболевших им взрослых пациентов в США в 1991-2004 гг.

(Chui K.K.H., Webb P., Russell R.M., Naumova E.N. Geographic variations and temporal trends of Salmonella associated hospitalization in the U.S. elderly, 1991-2004: A time series analysis of the impact of HACCP regulation. BMC Public Health 2009, 9:447 doi: 10.1186/1471-2458-9-447)

Ежегодно у населения США регистрируют около 1,4 млн. случаев сальмонеллезной инфекции, причем чаще заболевают люди в возрасте 65 лет и старше. В 1997 г. USDA начала проводить программу PR/HACCP, предусматривающую регулярное исследование на сальмонеллез различных мясных продуктов, в т.ч. получаемых от бройлеров. В результате ее осуществления в большинстве регионов страны, за исключением южной части атлантического побережья, юго-восточных и юго-западных районов центрального региона, начала снижаться заболеваемость населения сальмонеллезом. Авторы публикации отмечают необходимость проведения дополнительных исследований, которые позволили бы повысить эффективность программы профилактики заражения людей сальмонеллами.Де Лаппе Н., Коннор Дж.О., Доран Г., Деван Г, Кормикан M. Применение субтипирования сальмонелл для выявления перекрестной контаминации в лаборатории.

(de Lappe N., Connor J.O., Doran G., Devane G., Cormican M. Role of subtyping in detecting Salmonella cross contamination in the Laboratory. BMC Microbiology 2009, 9:155 doi:10.1186/1471-2180-9-155)

В лабораториях довольно часто происходит перекрестная контмаминация материалов бактериями, но данная проблема, если судить по данным литературы, ранее волновала только специалистов, работающих с M. tuberculosis. Авторами проведен ретроспективный анализ данных субтипирования культур сальмонелл Национальной референтной лаборатории в Ирландии за 2000–2007 гг. Каждый изолят серотипировали и определяли его чувствительность к антимикробным препаратам. Культуры S. enteritidis и S. typhimurium дополнительно фаготипировали, а часть последних также подвергали мультилокусному анализу. Некоторые изоляты разных серотипов также исследовали в гель-электрофорезе в пульсирующем поле. За указанный выше период отметили перекрестную контаминацию 56 изолятов сальмонелл: в 13 случаях контаминантами оказались лабораторные референс-штаммы, в 10 — полевые изоляты. Таким образом, перекрестная контаминация культур сальмонелл происходит довольно часто. Необходимо предпринимать меры к ее предотвращению, в т.ч. регулярно проводить мониторинг культур с посредством их субтипирования.Покхрел Б.M., Кармахариа Р., Мишра С.K., Койрала Дж. Титр антител к Salmonella enterica у здоровых жителей Непала.

(Pokhrel B.M., Karmacharya R., Mishra S.K., Koirala J. Distribution of antibody titer against Salmonella enterica among healthy individuals in Nepal)

В Непале сальмонеллез относят к эндемичным инфекционным заболеваниям. Для его диагностики обычно пользуются тестом Видаля. Однако интерпретировать результаты этой реакции бывает трудно, поскольку не известен базовый титр сывороточных антител у здоровой части населения Непала. Для внесения ясности в данный вопрос провели исследование сыворотке крови клинически здоровых доноров крови.в реакции агглютинации с применением О и Н антигенов серовара typhi и H антигенов сероваров paratyphi A и B. Тест Видаля проводили по стандартной методике в пробирках. Из 100 обследованных доноров у 62 выявили специфические антитела к 1 из 4 антигенов S. enterica в титре ≥ 1:20. Из 54 сывороток с диагностическим титром антител к О антигенам серовара typhi, 15 и 36 проб имели титр ≥ 1:60 и ≥ 1:40, соответственно. Значительная часть этих сывороток (12%) имела титр к О антигену ≥ 1:80. Аналогично из 59 сывороток крови с диагностическим титром (≥ 1:20) к Н антигену серовара typhi 29 имели титр ≥ 1:80 и 12 — 1:160. Антитела к сероварам paratyphi A и B в титре ≥ 1:20 обнаружили в 12% и 3% исследованных проб, соответственно. Авторы пришли к заключению относительно того, что необходимо скорректировать диагностические титры антител, выявляемых в тесте Видаля: при инфекции серовара typhi он выше 1:80 и 1:160 для антигенов О и Н, соответственно.Хонг И., Лиу T., Ли M.Д., Хофакр Ц. et al. Быстрый скрининг сероваров Enteritidis, Hadar, Heidelberg и Typhimurium Salmonella enterica посредством серологически-коррелятивной ПЦР, предназначенной для типирования аллелей O и H антигенов.

(Hong Y., Liu T., Lee M.D. et al. Rapid screening of Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg and Typhimurium using a serologically-correlative allelotyping PCR targeting the O and H antigen alleles. BMC Microbiology 2008, 8:178 doi:10.1186/1471-2180-8-178).

Классическое серотипирование сальмонелл проводят в реакции агглютинации с применением набора антисывороток к О и Н антигенам S. enteric, что требует значительных затрат времени и средств. Тем не менее, с его помощью в настоящее время удается идентифицировать 2541 серовар бактерии. В качестве альтернативы разрабатывали мультиплекс-ПЦР. Тест проводили с праймерами к генам О антигена, включая оперон wba, и центральными вариабельными участками генов флагелинов H1 и H2 сальмонеллы. По комбинации аллелей антигенов О и Н идентифицировали 42 серовара. Анализ аллелей антигенов H1 (i, g, m, r or z10) позволил быстро типировать , серовары enteritidis, hadar, heidelberg и typhimurium. Праймеры к комплексам антигенов H2 (I: 1,2; 1,5; 1,6; 1,7 и II: e,n,x; e,n,z15) дифференциально-диагностического значения не имели.Зу Л., Поллард A.Дж. Быстрый и высокочувствительный вариант ПЦР с гемокультурой для обнаружения серовара typhi Salmonella enterica. Annals Clin Microbiol Antimicrob, 2010, 9:14 doi:10.1186/1476-0711-9-14

(Zhou L., Pollard A.J. A fast and highly sensitive blood culture PCR method for clinical detection of Salmonella enterica serovar Typhi. Annals Clin Microbiol Antimicrob, 2010, 9:14 doi:10.1186/1476-0711-9-14)

Ежегодно на планете регистрируют 21 млн. случаев тифа, из которых около 216 тыс. летальные. Золотым стандартом диагностики болезни служит метод гемокультур. Однако на изоляцию S. typhi из крови и ее идентификацию затрачивается несколько дней — такая потеря времени часто не позволяет своевременно провести антибиотикотерапию. Серологические тесты при этой инфекции недостаточно чувствительны и эффективны. Ранее сообщалось, что ПЦР позволяет быстро ее диагностировать и проявляет высокую чувствительность, но низкую специфичность. В Оксфордском университете разработана методика тестирования на тиф гемокультур в ПЦР, которая лишена такового недостатка. Она предусматривает выращивание гемокультур на триптозно-соевом бульоне с 2,4% бычьей желчи — в такой среде из клеток крови высвобождается максимальное количество внутриклеточных бактерий и не ингибируется их рост. Возбудителя обнаруживают в ПЦР, проводимой с праймером к гену fliC-d S.typhi. Для постановки диагноза этим методом требуется всего 8 ч.Бейкер S., Харди Дж., Сандерсон K.E. и соавт. Новая линейная плазмида, с которой связаны изменения жгутиков Salmonella typhi.

(Baker S., Hardy J., Sanderson K.E. et al. A novel linear plasmid mediates flagellar variation in Salmonella Typhi. PLoS Pathog, 2007, 3(5): e59. doi:10.1371/journal.ppat.0030059)

Жгутики жизненно необходимы многим бактериям. Идентификация жгутиковых антигенов является важнейшим этапом серотипирования сальмонелл. Большая часть сероваров S.enteric двухфазные, т.е. у них чередуется экспрессия разных жгутиковых антигенов (фаз). Это обусловлено возможностью нахождения в активном состоянии только 1 из 2 генов флагеллина (fliC и fljB), локализующихся в разных локусах хромосомы. До недавнего времени считали, что исключением из данного правила является возбудитель тифа (S. typhi), у которого имеется только ген fliC, кодирующий жгутиковый антиген d. Недавно у ряда штаммов агента, выделенных в Индонезии, обнаружили жгутиковый антиген z66, кодируемый геном fljBz66. Этот ген локализуется на линейной плазмиде pBSSB1, состоящей из 33 кодонов. До настоящего времени у бактерий сем. Enterobacteriaceae никогда не обнаруживали неассоциированных с бактериофагами линейных плазмид.Вестби Л.K., Моретро T., Лангсрад S. et al. Способность сальмонелл формировать биопленку коррелирует с продолжительностью ее сохранения в рыбной муке и на кормозаводах.

(Vestby L.K., Møretrø T., Langsrud S. et al. Biofilm forming abilities of Salmonella are correlated with persistence in fish meal- and feed factories BMC Vet Res, 2009, 5:20 doi:10.1186/1746-6148-5-20)

Контаминированные сальмонеллами корма представляют опасность заражения животных. Сообщалось о контаминации сальмонеллами оборудования и помещений кормоцехов, которая в ряде случаев сохранялась на протяжении нескольких лет. Для объяснения длительной персистенции сальмонелл в таких условиях была предложена гипотеза образования бактерией биопленки. Настоящее исследование провели для подтверждения данной гипотезы с использованием 111 штаммов сальмонелл, выделенных в 1991–2006 гг. в Норвегии из кормов и в кормоцехах. Тестированные штаммы относились к сероварам agona, montevideo, senftenberg и typhimurium. Они проявили неодинаковую способность образовывать биопленку на полистироловой поверхности чашек Петри и на границе жидких питательных сред с воздухом. Серовары agona и montevideo оказались отличными продуцентами биопленки. Именно эти серовары выделяли в кормоцехах на протяжении нескольких лет. Большая часть штаммов сероваров senftenberg и typhimurium очень редко образовывали биопленку и сохранялись во внешней среде непродолжительное время. Таким образом, результаты эксперимента подтвердили верность упомянутой выше гипотезы.Коюнку С., Хеггблом П. Сравнительная оценка методов бактериологического анализа, применяемых для выявления сальмонелл в кормах и их ингредиентах.

(Koyuncu S., Haggblom P. A comparative study of cultural methods for the detection of Salmonella in feed and feed ingredients. BMC Veterinary Research 2009, 5:6 doi:10.1186/1746-6148-5-6)

Стандартный международный метод изоляции сальмонелл EN ISO 6579:2002 предусматривает неселективное предварительное обогащение тестируемых проб в забуференной пептонной воде, селективное обогащение в среде Раппапорта-Василиадиса, приготовленной на соевом бульоне, и тетратионат-новобиоциновом бульоне Мюллера-Кауффманна (в Скандинавских странах этой средой не пользуются), пересев на ксилозо-лизиновый дезоксихолятный агар и вторую селективную среду (например, агар с бриллиантовым зеленым). На завершающем этапе изоляты серотипируют и подтверждают их видовую принадлежность биохимическими тестами. Использование вместо обычной среды Раппапорта- Василиадиса ее полужидкого варианта, по мнению ряда авторов, повышает эффективность изоляции сальмонелл за счет их миграции. Для проверки такой точки зрения провели сравнительную оценку этих вариантов среды при исследовании 5 типов кормов с различной степенью контаминации сальмонеллами сероваров typhimurium, cubana и yoruba. Существенных различий эффективности применения модификаций среды не отметили: специфичность и чувствительность в обоих случаях составили 65% и 56%, соответственно. Применение агара с бриллиантовым зеленым в описанной выше схеме изоляции сальмонелл из кормов часто вело к недовыявлению контаминированных бактерией проб. Отмечена вариабельность изоляции одних и тех же штаммов сальмонелл из разных ингредиентов рациона (например, из муки и пальмового масла).Вигли П., Халм С., Пауэрс Ц. и соавт. Использование перорального заражения цыплят аттенуированным вакцинным штаммом 9R серовара gallinarum Salmonella enterica в качестве модели для изучения иммунитета при тифе птиц

(Wigley P., Hulme S., Powers C. et al. Oral infection with the Salmonella enterica serovar Gallinarum 9R attenuated live vaccine as a model to characterise immunity to fowl typhoid in the chicken. BMC Vet Res, 2005, 1:2 doi:10.1186/1746-6148-1-2)

Серовар gallinarum S. enterica вызывает у кур и индеек высоколетальное системное заболевание. Высокая вирулентность этого серовара затрудняет изучение иммунного ответа на него птиц. Для внесения ясности в данный вопрос инбредных цыплят заразили живым аттенуированным штаммом 9R S. gallinarum. У зараженной птицы развилась легкая системная реакция. Через 3 нед. отметили элиминацию бактерии из организма цыплят на фоне повышения титров специфических антител и γ-интерферона в сыворотке крови, а также пролиферации Т-лимфоцитов. Такой иммунный ответ достигал пика через 4 нед. после заражения, а затем его интенсивность снижалась. Только в первые дни после введения вакцинного штамма у цыплят наблюдали умеренное повышение экспрессии провоспалительного цитокина интерлейкина-1β.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Статьи по теме в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Новые документы

Закупки по 44-ФЗ
Квалификация
Платные услуги
Популярное у экономистов медучреждений
Популярное у главных медсестер

Мероприятия





Интервью

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Алексей ПИНЧУК: журналу «Здравоохранение». Главные темы беседы – изменение правового поля донорства в России





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2016. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×