Практические рекомендации по оптимизации получения материала, исследования и интерпретации мазков на микрофлору

3862
Практические рекомендации по оптимизации получения материала, исследования и интерпретации мазков на микрофлору

Микроскопическое исследование материала на микрофлору из уретры, отделяемого женских половых органов проводится согласно действующей в настоящее время нормативной документации.

1. ЗАБОР МАТЕРИАЛА

Проводится гинекологом из 1) влагалища, 2) канала шейки матки (не ранее, чем через 24 часа после спринцевания) и 3) уретры (не ранее, чем через 3–4 часа после мочеиспускания) с помощью ложечки Фолькмана, желобковатого зонда, ватного тампона, петли. Применение противомикробных средств должно быть прекращено за 5–7 дней до взятия материала.

Влагалище

Материал для исследования следует брать до мануального исследования, после введения зеркала и подъёмника из заднего свода влагалища или с патологически изменённых участков слизистой оболочки.

Шейка матки

Материал для исследования берут после обнажения шейки матки в зеркалах, тщательно обрабатывают влагалищную часть тампоном, смоченным изотоническим раствором хлорида натрия, после чего тонкий ватный тампон оснорожно вводят в шеечный канал, не касаясь стенок влагалища во избежание контаминации влагалищной микрофлорой.

Уретра

Область уретры протирают сухим стерильным тампоном. Уретру массируют со стороны влагалища, прижимая её со стороны лобковой кости. Ложечку Фолькмана или желобковатый зонд вводят вглубь уретры на 1,5–2 см и лёгким поскабливанием передних и боковых стенок получают отделяемое.

Мазки готовят, равномерно распределяя материал на стекле мягкими движениями, избегая грубого втирания. Это позволяет клеткам располагаться слоями, не повреждает их и сохраняет истинное распределение и количественное соотношение компонентов исследуемого материала, позволяет наблюдать внутриклеточное расположение бактерий.

Материал из уретры распределяют на одной половине предметного стекла в виде продольных(ой) полос(ы), а из шейки матки — в виде круга на второй половине стекла. Готовят два одинаковых мазка (один из них используется для окраски метиленовым синим, второй — для окраски по Граму).

Материал из вагины распределяют продольными штрихами на предметном стекле. Этот мазок красится методом Грама.

Таким образом, для микроскопического исследования одной пациентки необходимо 3 предметных стекла.

После высушивания при комнатной температуре мазки помещают в чашку Петри и отправляют в лабораторию.

2. ОКРАСКА МАТЕРИАЛА

  • Окраска метиленовым синим

Препарат окрашивают 1% водным раствором метиленового синего в течение 3 минут. Мазок промывают, высушивают и микроскопируют с иммерсией.

  • Окраска по Граму

Мазок фиксируют в пламени спиртовки (вносят в пламя 2–3 раза на 2–3 секунды, каждый раз дают препарату остыть). Окрашивают по Граму, используя общепринятую методику, но в качестве дополнительного (контрастного) красителя применяют раствор сафранина. Раствор генцианового фиолетового наносят на мазок на 1–2 минуты, затем краситель сливают. Раствор Люголя наливают на мазок на 1–2 минуты, краску смывают водой. Препарат в наклонном положении промывают этиловым спиртом до отхождения фиолетовых струек (облачков краски) в течении 10–15 секунд. Препарат промывают водой и докрашивают раствором сафранина в течение 2–5 минут.

3. МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ МАЗКОВ

Предварительное исследование препаратов проводится с помощью окуляра х7 (или х10) и суховоздушного объектива х10, затем для детального изучения, используется иммерсионный объектив х100.

Палочки Дедерлейна

Под общим названием палочки Дедерлейна объединены более 6 видов лактобацилл: L. acidofilus, L. plantarum, L. casei, L. fermentus, L. salivarius, L. brevis, L. cellobiiosus и др. Это грамположительные палочки обычно правильной формы, как правило, длинные, но могут быть кокковидными (0,5–1,2×1–10 мкм), располагаются обычно в коротких цепочках, неспорообразующие.

Lactobacillus (типовойвид — L. delbrueckii)

  • Палочки обычно правильной формы, как правило, длинные, но могут быть кокковидными (0,5–1,2×1–10 мкм);
  • Располагаются обычно в коротких цепочках;
  • Редко подвижны за счёт перитрихиальных жгутиков;
  • Неспорообразующие;
  • Грамположительные;
  • Факультативные анаэробы, иногда микроаэрофилы.

Neisseriagonorrhoeae Вмазках, окрашенных метиленовым синим, нейссерии лучше выявляются, а в мазках, окрашенных по Граму, они лучше дифференцируются.

Neisseria gonorrhoeae — это грамотрицательные диплококки (тёмно-синие при окраске метиленовым синим), бобовидной формы, расположенные внутри и вне лейкоцитов, иногда заметны не окрашенные ободки капсул вокруг клеток диплококков. Окончательное положительное заключение выдают только на основании обнаружения типичных нейссерий одновременно в мазках, окрашенных метиленовым синим и по Грамму.

Критерии бактериоскопического метода диагностики гонореи:

  • Обнаружение грамотрицательных диплококков, напоминающих по форме кофейное зерно;
  • При большом количестве диплококки располагаются в мазке во взаимно перпендикулярных плоскостях;
  • Внутриклеточное расположение диплококков.

Положительный бактериоскопический диагноз ставится, в основном, при острой форме гонореи до применения антибиотиков. При хронической гонорее или на фоне лекарственной терапии гонококки могут либо вовсе не обнаруживаться, либо иметь атипичную форму (в виде шаров или, напротив, очень мелких образований). В таких случаях необходимо проводить бактериологическое исследование.

Trichomonasvaginalis

Типичные урогенитальные трихомонады имеют грушевидную форму, по размеру немного крупнее лейкоцитов, располагаются в слизи между клеточными элементами. Чаще, особенно после этиотропной терапии, встречаются округлые, овальные формы трихомонад; могут выявляться отдельные ядра трихомонад. Жгутики и ундулирующая мембрна просматриваются очень редко. Трихомонады окружены чётко видимой оболочкой, ядро овальной формы, расположено эксцентрично, цитоплазма сетчатая (пенистая), возможно наличие включений, бесцветных вакуолей. Тинкториальные свойства при окраске метиленовым синим — цитоплазма бледно-голубая, ядро интенсивно окрашено в синий цвет, при окраске по Граму — цитоплазма бледного оранжевого-розового(красного) цвета, ядро сиреневое (фиолетовое).

При подозрении на трихомонады можно использовать окраску по Романовскому — Гимзе, которая позволяет идентифицировать и дифференцировать трихомонады не только по морфологическим, но и по чётко различным тинкториальным свойствам: ядра трихомонад окрашиваются в фиолетовый или фиолетово-рубиновый цвет, цитоплазма — в голубой, а блефаропласт, жгутики, аксостиль окрашиваются в розовый или красный цвет. Для этого, учитывая собственный опыт, можно использовать мазок, прежде окрашенный по Граму или метиленовым синим, мазок обесцвечивают в спирте, а затем окрашивают по Романовскому-Гимзе общепринятым методом.

Косвенными признаками урогенитального трихомоноза являются, во-первых, наличие большого количества слизи в исследуемом материале, во-вторых, скопления лейкоцитов на поверхности эпителиальных клеток, где следует внимательно распознавать подозрительные на трихомонады клетки.

Положительный ответ нужно давать при обнаружении только типичных форм влагалищных трихомонад. При обнаружении изменённых (округлых, нетипично окрашенных и др.), но похожих на влагалищные трихомонады простейших, надо исследовать повторно взятый материал или использовать культуральный метод.

Дрожжеподобные грибы рода Candida

Чувствительность микроскопического метода выявления грибов рода Candida в вагинальных мазках — 103 КОЕ/мл (г). Диагностически значимый уровень контаминации — 104 КОЕ/мл (г)

Возбудители вагинального микоза

  • Наиболее часто — Candida albicans — 45–80%
  • Часто — С.glabrata — 15–30%
  • Менее часто — С.tropicalis
  • Редко — С.crusei, C.parapsilosis, Saccharomyces cerevisiae
  • Иногда — C.kefyr, C.guilliermondi
  • Очень редко — другие виды кандид.

Показания к проведению культурального исследования:

  • для подтверждения диагноза при отрицательном результате микроскопии и наличии симптомов заболевания;
  • для видовой идентификации при подозрении на нетипичную этиологию кандидоза;
  • для определения чувствительности к лекарственным препаратам.

Gardnerella (типовой и единственный вид — Gardnerella vaginalis)

  • Полиморфные мелкие палочки (0,5×1,5–2,5 мкм);
  • Грамвариабельная (чаще грамотрицательная)
  • Неподвижные, не образующие спор и капсул палочки;
  • Факультативные анаэробы, лучше растут в атмосфере СО2;
  • Найдены в мочеполовых путях человека и считаются основной причиной бактериального «неспецифического» вагиноза.

Mobiluncus (M. curtisii (с двумя подвидами) — типовой, M. mulieris).

Тонкие изогнутые палочки (0,4–0,6×1,2–4 мкм), суженные на концах; располагающиеся одиночно или иногда парами в виде «крыла летящей чайки».

  • Грамвариабельные или грамотрицательные, но клеточная стенка грамположительного типа;
  • Подвижные (имеют многочисленные латеральные или субполярные жгутики);
  • Неспорообразующие;

• Облигатные анаэробы;

  • Выделены из влагалища, могут играть роль в развитии вагинозов

Leptotrichia (типовой и единственный вид — Leptotrichiabuccalis)

  • Прямые или слегка изогнутые неподвижные палочки с закруглёнными или заострёнными концами (1–1,5×5–15 мкм) (по форме сходны с фузобактериями);
  • Грамотрицательные (клеточная стенка нетипично грамотрицательная), клетки очень молодых культур могут окрашиваться по Граму положительно;
  • Неподвижные;
  • Неспорообразующие;
  • Две и более клеток могут объединяться в септированные нити различной длины (до 200 мкм) и формы, где соприкасающиеся концы уплощены;
  • При лизисе клеток в нити появляются крупные кокковидные тела или луковицеобразные вздутия;
  • Вдоль клетки равномерно распределены гранулы;
  • Облигатные анаэробы (оптимально 5% СО2);
  • Обнаружены в зубных бляшках, однако сходные организмы выделены из женских половых путей.

Бактериальный вагиноз

Данная нозологическая форма характеризует одно из состояний биоценоза влагалища — дисбиоз влагалища, который имеет следующие микроскопические признаки:

  • вагинальный эпителий представлен клетками поверхностных слоёв, редко встречаются промежуточные клетки, часто обнаруживаются «ключевые» клетки;
  • лейкоцитарная реакция, как правило, отсутствует;
  • общее количество микроорганизмов «массивное», реже — «большое»;
  • преобладают морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы, палочки Дедерлейна отсутствуют или определяются как единичные не во всех полях зрения.


Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Новые документы

Закупки по 44-ФЗ
Квалификация
Платные услуги
Популярное у экономистов медучреждений
Популярное у главных медсестер

Мероприятия





Интервью

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Врачей обяжут сообщать о потенциальных донорах

Алексей ПИНЧУК: журналу «Здравоохранение». Главные темы беседы – изменение правового поля донорства в России





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2016. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×