Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

1058
Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

<...> Скудность клинической симптоматики и отсутствие специфицирующих признаков у TORCH-инфекций способствовали привлечению лабораторных методов для их выявления и верификации этиологических факторов. При обследовании беременных и новорожденных приоритет получили косвенные методы лабораторной диагностики TORCH-инфекций, направленные на выявление в крови маркеров специфического иммунного ответа (антител) и оценку динамики их концентрации [6–12, 17]. Для обнаружения и количественной оценки специфических АТ используют преимущественно иммуноферментный анализ (ИФА) и линейный иммуноблоттинг (ЛИБ). <...>

ля дифференцированного определения антител одновременно к нескольким антигенам возбудителей TORCH-инфекций авторами настоящей работы разработана медицинская технология иммунохимического лабораторного исследования в формате ЛИБ, при которой в качестве твердой фазы (иммуносорбента) используются полоски нитроцеллюлозной мембраны (стрипы) с дискретно размещенными на них антигенами возбудителей инфекции.

При изучении литературных данных о специфичности и иммуногенности для человека были отобраны очищенные нативные и рекомбинантные антигены основных возбудителей TORCH-инфекций для последующего их размещения на иммуносорбенте:

  • нативный антиген Toxoplasma gondii и рекомбинантный аналог антигена токсоплазмы р30;
  • нативный антиген вируса краснухи;
  • рекомбинантный аналог мозаичного антигена цитомегаловируса, содержащий иммунодоминантные последовательности белков рр150, рр52, рр28 и gB;
  • рекомбинантные аналоги антигена G1 вируса простого герпеса 1 типа и антигена G2 вируса простого герпеса 2 типа.

Кроме этого, на иммуносорбенте были размещены:

  • международный стандарт ВОЗ Anti-Rubella Immunoglobulin, Human NIBSC code: RUBI-1-94, представляющий собой антитела к вирусу краснухи – иммуноглобулины человека класса G в концентрации 15–20 МЕ/мл (линия «Rub. Cut off»);
  • три контрольные линии, две из которых («0,5+» и «2,0+») содержат иммуноглобулины человека класса G или М в разных концентрациях для калиб­ровки результатов исследования, и одна линия («КВО») содержит антитела к IgG/IgM человека для контроля внесения образца.

Размещение антигенных линий на стрипах представлено на схеме (рисунок).

Для оценки чувствительности и специфичности разработанных методик исследованы контрольные сыворотки, содержавшие (n = 94) и не содержавшие (n = 47) антитела к антигенам возбудителей инфекций TORCH-группы <...>

При исследовании всех перечисленных панелей контрольных сывороток с использованием разработанной методики получено полное совпадение результатов определения специфических антител с паспортными характеристиками каждой панели, и таким образом была показана 100% чувствительность и специфичность новой методики.

Клиническую информативность по ГОСТ Р 53022.3-2008 [16] комплекта № 1 новой методики изучали при исследовании 1115 сывороток крови, полученных у беременных женщин и лиц, проходивших лабораторное обследование в диагностическом центре El Clinic (г. Электрогорск) и в Московской областной станции переливания крови (г. Москва). В качестве реагентов сравнения использовали соответствующие наборы для определения антител к антигенам каждого из возбудителей TORCH-группы методом ИФА, разрешенные к применению в Российской Федерации. Полученные результаты представлены в табл. 1. <...>

Таблица 1. Результаты обнаружения специфических антител класса G к антигенам возбудителей TORCH-инфекций методами ИФА и линейного иммуноблоттинга в 1115 образцах крови

Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

Представленные данные демонстрируют наличие расхождений результатов определения антител класса G разными методами (ИФА и ЛИБ): к возбудителю токсоплазмоза – в 3 (1,19%) случаях из 253, краснухи – в 4 (1,16%) из 344, к ЦМВ – в 1 (0,31%) из 323, к ВПГ-1 – в 4 (2,22%) из 180 и к ВПГ-2 – в 4 (2,16%) из 185 случаев. Эти 16 образцов, в которых при выявлении АТ методами ИФА и ЛИБ были получены дискордантные результаты, дополнительно исследованы при использовании наборов реагентов Recomline TORCH Screening IgG фирмы «Микроген» (Германия) (табл. 2). <...>

Таблица 2. Сопоставление результатов обнаружения специфических антител класса G к антигенам возбудителей TORCH-инфекций при использовании линейного иммуноблоттинга в 16 образцах крови

Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

Как следует из приведенных в табл. 2 данных, результаты выявления АТ при использовании новой методики в подавляющем большинстве случаев – в 75 (93,75%) из 80 – совпадали с таковыми при применении набора реагентов Recomline TORCH Screening IgG.

Детализированный анализ полученных данных позволил установить полное совпадение результатов определения специфических антител к возбудителю токсоплазмоза и ВПГ-1 при применении названных методик, расхождение результатов в отношении определения антител к Rubella virus– по 1 образцу, к ЦМВ – по 3 образцам и к ВПГ-2 – по 1 образцу. При этом из установленных 5 случаев расхождения в 3 – различие заключалось между результатами положительными («+») и неопределенными («+/-»), в 2 случаях – между неопределенными («+/-») и отрицательными («-»).

По совокупности совпадающих результатов исследования биологических образцов методами ИФА и ЛИБ двумя наборами реагентов разных производителей осуществлен расчет и сравнительная оценка показателей клинической информативности (клинической чувствительности, специ­фичности и диагностической эффективности) предложенной методики определения специфических АТ (табл. 3).

Таблица 3. Показатели клинической информативности определения IgG к возбудителям TORCH-инфекций

Применение метода линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M к основным возбудителям инфекций TORCH-группы

R – Recomline TORCH Screening IgG (R).

Л – новая методика в формате ЛИБ.

Представленные данные позволили прийти к заключению о достаточно высокой диагностической эффективности разработанной методики и применявшихся наборов реагентов. На основании полученных данных можно полагать, что при выявлении разночтений в результатах скринингового определения специфических IgG методами ИФА и ЛИБ, приоритет имеют данные, полученные методом ЛИБ, так как для них была установлена более высокая диагностическая эффективность (99,4–100%).

Для определения клинической информативности методики, разработанной для определения специфических АТ класса IgM методом ЛИБ, исследовали 860 сывороток крови, полученных от беременных женщин и лиц, проходивших плановое или специализированное обследование в диагностических целях. Наборами реагентов сравнения служили соответствующие наборы реагентов для определения антител IgM к антигенам возбудителей группы TORCH-инфекций, имеющие регистрацию в Российской Федерации. Полученные результаты представлены в табл. 4. <...>

*Статья опубликована с сокращениями, полностью публикацию читайте в бумажной версии

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×