Применение метода ПЦР в режиме реального времени для оценки биоты в тканях урогенитального тракта

83

Представлены диагностические возможности метода полимеразной цепной реакции в реальном времени. В качестве примера приводятся данные о составе микробиоты в сочетании с профилем экспрессии генов у женщин, страдающих бактериальным вагинозом и вагинитом

Распределение пациенток по группам

Для исследования количественного состава биоты и оценки уровня экспрессии генов, активирующихся при воспалении, были обследованы женщины репродуктивного возраста (от 18 до 45 лет) с инфекционными заболеваниями урогенитального тракта.

Обследование включало анализ жалоб, анамнеза, определение гинекологического статуса, осмотр вульвы, слизистых влагалища и шейки матки в зеркалах, бимануальное гинекологическое исследование, микроскопию влагалищных мазков, окрашенных по Граму.

По результатам обследования были выделены следующие группы:

  • I. Условно-здоровые (n = 141): отсутствие жалоб и признаков воспаления, количество лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения;
  • IA. Контрольная группа (n = 95): преобладание Lactobacillus spp – 80–100% от общей бактериальной массы по результатам полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ);
  • IB. Наличие ДНК Ureaplasma spp >104 ГЭ/мл (n = 19);
  • IС. Наличие ДНК Candida spp > 103 ГЭ/мл (n = 27);
  • II. Вагинит (n = 215): жалобы, воспаленная слизистая, количество лейкоцитов в мазке более 10 в поле зрения;
  • III. Бактериальный вагиноз (n = 55): жалобы, наличие критериев Амсела, отсутствие воспаления, количество лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения.

Выявление ДНК микроорганизмов

Читайте также в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Количественная оценка ДНК микроорганизмов проводилась методом ПЦР-РВ с использованием наборов реагентов «Фемофлор-16» (ЗАО «ДНК-Технология»).

Для оценки уровня экспрессии генов, активирующихся при воспалении, определяли транскрипционный профиль генов иммунной системы: цитокины (IL1β, IL8, IL10, IL12α, IL18, IL23, TNFα, TGFβ1), транскрипционные факторы (GATA3, RORC), толл-подобные рецепторы (TLR2, TLR4) и поверхностные маркеры клеток иммунной системы (CD45, CD68, CD69) – с использованием наборов реагентов производства ЗАО «ДНК-Технология».

Нормировка результатов ПЦР-РВ мРНК генов иммунной системы осуществлялась методом сравнения пороговых циклов (метод ΔΔCq) этих генов по четырем референтным генам (B2M, GUSB, TBP и HPRT1), которые имеют относительно стабильный уровень экспрессии, и значению медианы уровня экспрессии в контрольной группе, которая принималась равной единице.

Определение состава микробиоты

Результаты исследования количественного состава биоты в обследованных группах женщин представлены в таблице.

Состав биоты во влагалище в обследованных группах женщин

Условно-патогенные микроорганизмы

Условно здоровые

Вагинит N=215

Бактериальный вагинит N=55

1A контроль N=95

1В n=19

1с N=27

Факультативно-анаэробные микроорганизмы

Enterobacterium spp

1,1

5,3

 0

14,9*

3,6

Streptococcus spp

5,3

10,5

7,4

20,5*

12,7

Staphylococcus spp

 0

3,7

3,7

3,6

Облигатно-анаэробные микроорганизмы

Gardnerella vaginalis/ Prevotella spp/ Porphyromonas spp

3,2

15,8*

11,1

37,7*

87,3*

Eubacterium spp

8,4

15,8

39,6*

43,7*

85,5*

Sneathia spp/ Leptotrichia spp/ Fusobacterium spp

 0

 0

3,7

6,5*

29,1*

Megasphera spp/ Veilonella spp/ Dialister spp

 0

 0

3,7

22,8*

41,8*

Lachnobacterium spp/ Clostridium spp

2,1

 0

7,4

9,3*

27,3*

Mobiluncus spp/ Corynebacterium spp

 0

 0

3,7

9,3*

12,7*

Peptostreptococcus spp

 0

 0

 0

14,9*

30,9*

Atopobium vaginae

2,1

 0

3,7

14,4*

49,1*

Молликуты

Mycoplasma spp

 0

 0

3,7

1,9

9,1*

Ureaplasma spp

 0

100*

29,6*

27,9*

34,5*

Грибы

Candida spp

 0

100*

43,3*

 0

Сочетанные формы

2,1

10,5

55,6*

61,9*

94,5*


* p < 0,05.

Результаты, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что у женщин с диагнозом вагинита, по сравнению с контрольной группой, увеличена доля энтеробактерий и стрептококков. Доля анаэробных условно-патогенных микроорганизмов увеличена как в группе пациенток с вагинитом, так и в группе пациенток с бактериальным вагинозом. В то же время у пациенток при концентрации Ureaplasma spp > 104 ГЭ/мл достоверно увеличено отношение Gardnerella vaginalis / Prevotella spp / Porphyromonas spp по сравнению с контрольной группой и при этом отсутствуют клинические симптомы воспаления.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

Обновить руководящий состав медорганизаций

Есть задача – обновить руководящий состав медорганизаций

Федот ТУМУСОВ: журналу «Здравоохранение». «Есть задача – обновить руководящий состав медорганизаций»





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль