text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Применение метода ПЦР в режиме реального времени для оценки биоты в тканях урогенитального тракта

  • 2 декабря 2015
  • 83

Представлены диагностические возможности метода полимеразной цепной реакции в реальном времени. В качестве примера приводятся данные о составе микробиоты в сочетании с профилем экспрессии генов у женщин, страдающих бактериальным вагинозом и вагинитом

Распределение пациенток по группам

Для исследования количественного состава биоты и оценки уровня экспрессии генов, активирующихся при воспалении, были обследованы женщины репродуктивного возраста (от 18 до 45 лет) с инфекционными заболеваниями урогенитального тракта.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Обследование включало анализ жалоб, анамнеза, определение гинекологического статуса, осмотр вульвы, слизистых влагалища и шейки матки в зеркалах, бимануальное гинекологическое исследование, микроскопию влагалищных мазков, окрашенных по Граму.

По результатам обследования были выделены следующие группы:

  • I. Условно-здоровые (n = 141): отсутствие жалоб и признаков воспаления, количество лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения;
  • IA. Контрольная группа (n = 95): преобладание Lactobacillus spp – 80–100% от общей бактериальной массы по результатам полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ);
  • IB. Наличие ДНК Ureaplasma spp >104 ГЭ/мл (n = 19);
  • IС. Наличие ДНК Candida spp > 103 ГЭ/мл (n = 27);
  • II. Вагинит (n = 215): жалобы, воспаленная слизистая, количество лейкоцитов в мазке более 10 в поле зрения;
  • III. Бактериальный вагиноз (n = 55): жалобы, наличие критериев Амсела, отсутствие воспаления, количество лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения.

Выявление ДНК микроорганизмов


Количественная оценка ДНК микроорганизмов проводилась методом ПЦР-РВ с использованием наборов реагентов «Фемофлор-16» (ЗАО «ДНК-Технология»).

Для оценки уровня экспрессии генов, активирующихся при воспалении, определяли транскрипционный профиль генов иммунной системы: цитокины (IL1β, IL8, IL10, IL12α, IL18, IL23, TNFα, TGFβ1), транскрипционные факторы (GATA3, RORC), толл-подобные рецепторы (TLR2, TLR4) и поверхностные маркеры клеток иммунной системы (CD45, CD68, CD69) – с использованием наборов реагентов производства ЗАО «ДНК-Технология».

Нормировка результатов ПЦР-РВ мРНК генов иммунной системы осуществлялась методом сравнения пороговых циклов (метод ΔΔCq) этих генов по четырем референтным генам (B2M, GUSB, TBP и HPRT1), которые имеют относительно стабильный уровень экспрессии, и значению медианы уровня экспрессии в контрольной группе, которая принималась равной единице.

Определение состава микробиоты

Результаты исследования количественного состава биоты в обследованных группах женщин представлены в таблице.

Состав биоты во влагалище в обследованных группах женщин

Условно-патогенные микроорганизмы

Условно здоровые

Вагинит N=215

Бактериальный вагинит N=55

1A контроль N=95

1В n=19

1с N=27

Факультативно-анаэробные микроорганизмы

Enterobacterium spp

1,1

5,3

 0

14,9*

3,6

Streptococcus spp

5,3

10,5

7,4

20,5*

12,7

Staphylococcus spp

 0

3,7

3,7

3,6

Облигатно-анаэробные микроорганизмы

Gardnerella vaginalis/ Prevotella spp/ Porphyromonas spp

3,2

15,8*

11,1

37,7*

87,3*

Eubacterium spp

8,4

15,8

39,6*

43,7*

85,5*

Sneathia spp/ Leptotrichia spp/ Fusobacterium spp

 0

 0

3,7

6,5*

29,1*

Megasphera spp/ Veilonella spp/ Dialister spp

 0

 0

3,7

22,8*

41,8*

Lachnobacterium spp/ Clostridium spp

2,1

 0

7,4

9,3*

27,3*

Mobiluncus spp/ Corynebacterium spp

 0

 0

3,7

9,3*

12,7*

Peptostreptococcus spp

 0

 0

 0

14,9*

30,9*

Atopobium vaginae

2,1

 0

3,7

14,4*

49,1*

Молликуты

Mycoplasma spp

 0

 0

3,7

1,9

9,1*

Ureaplasma spp

 0

100*

29,6*

27,9*

34,5*

Грибы

Candida spp

 0

100*

43,3*

 0

Сочетанные формы

2,1

10,5

55,6*

61,9*

94,5*


* p < 0,05.

Результаты, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что у женщин с диагнозом вагинита, по сравнению с контрольной группой, увеличена доля энтеробактерий и стрептококков. Доля анаэробных условно-патогенных микроорганизмов увеличена как в группе пациенток с вагинитом, так и в группе пациенток с бактериальным вагинозом. В то же время у пациенток при концентрации Ureaplasma spp > 104 ГЭ/мл достоверно увеличено отношение Gardnerella vaginalis / Prevotella spp / Porphyromonas spp по сравнению с контрольной группой и при этом отсутствуют клинические симптомы воспаления.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.