text
Портал для медицинских работников

Применение метода ПЦР в режиме реального времени для оценки биоты в тканях урогенитального тракта

  • 2 декабря 2015
  • 83

Представлены диагностические возможности метода полимеразной цепной реакции в реальном времени. В качестве примера приводятся данные о составе микробиоты в сочетании с профилем экспрессии генов у женщин, страдающих бактериальным вагинозом и вагинитом

Распределение пациенток по группам

Для исследования количественного состава биоты и оценки уровня экспрессии генов, активирующихся при воспалении, были обследованы женщины репродуктивного возраста (от 18 до 45 лет) с инфекционными заболеваниями урогенитального тракта.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Обследование включало анализ жалоб, анамнеза, определение гинекологического статуса, осмотр вульвы, слизистых влагалища и шейки матки в зеркалах, бимануальное гинекологическое исследование, микроскопию влагалищных мазков, окрашенных по Граму.

По результатам обследования были выделены следующие группы:

  • I. Условно-здоровые (n = 141): отсутствие жалоб и признаков воспаления, количество лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения;
  • IA. Контрольная группа (n = 95): преобладание Lactobacillus spp – 80–100% от общей бактериальной массы по результатам полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ);
  • IB. Наличие ДНК Ureaplasma spp >104 ГЭ/мл (n = 19);
  • IС. Наличие ДНК Candida spp > 103 ГЭ/мл (n = 27);
  • II. Вагинит (n = 215): жалобы, воспаленная слизистая, количество лейкоцитов в мазке более 10 в поле зрения;
  • III. Бактериальный вагиноз (n = 55): жалобы, наличие критериев Амсела, отсутствие воспаления, количество лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения.

Выявление ДНК микроорганизмов


Количественная оценка ДНК микроорганизмов проводилась методом ПЦР-РВ с использованием наборов реагентов «Фемофлор-16» (ЗАО «ДНК-Технология»).

Для оценки уровня экспрессии генов, активирующихся при воспалении, определяли транскрипционный профиль генов иммунной системы: цитокины (IL1β, IL8, IL10, IL12α, IL18, IL23, TNFα, TGFβ1), транскрипционные факторы (GATA3, RORC), толл-подобные рецепторы (TLR2, TLR4) и поверхностные маркеры клеток иммунной системы (CD45, CD68, CD69) – с использованием наборов реагентов производства ЗАО «ДНК-Технология».

Нормировка результатов ПЦР-РВ мРНК генов иммунной системы осуществлялась методом сравнения пороговых циклов (метод ΔΔCq) этих генов по четырем референтным генам (B2M, GUSB, TBP и HPRT1), которые имеют относительно стабильный уровень экспрессии, и значению медианы уровня экспрессии в контрольной группе, которая принималась равной единице.

Определение состава микробиоты

Результаты исследования количественного состава биоты в обследованных группах женщин представлены в таблице.

Состав биоты во влагалище в обследованных группах женщин

Условно-патогенные микроорганизмы

Условно здоровые

Вагинит N=215

Бактериальный вагинит N=55

1A контроль N=95

1В n=19

1с N=27

Факультативно-анаэробные микроорганизмы

Enterobacterium spp

1,1

5,3

 0

14,9*

3,6

Streptococcus spp

5,3

10,5

7,4

20,5*

12,7

Staphylococcus spp

 0

3,7

3,7

3,6

Облигатно-анаэробные микроорганизмы

Gardnerella vaginalis/ Prevotella spp/ Porphyromonas spp

3,2

15,8*

11,1

37,7*

87,3*

Eubacterium spp

8,4

15,8

39,6*

43,7*

85,5*

Sneathia spp/ Leptotrichia spp/ Fusobacterium spp

 0

 0

3,7

6,5*

29,1*

Megasphera spp/ Veilonella spp/ Dialister spp

 0

 0

3,7

22,8*

41,8*

Lachnobacterium spp/ Clostridium spp

2,1

 0

7,4

9,3*

27,3*

Mobiluncus spp/ Corynebacterium spp

 0

 0

3,7

9,3*

12,7*

Peptostreptococcus spp

 0

 0

 0

14,9*

30,9*

Atopobium vaginae

2,1

 0

3,7

14,4*

49,1*

Молликуты

Mycoplasma spp

 0

 0

3,7

1,9

9,1*

Ureaplasma spp

 0

100*

29,6*

27,9*

34,5*

Грибы

Candida spp

 0

100*

43,3*

 0

Сочетанные формы

2,1

10,5

55,6*

61,9*

94,5*


* p < 0,05.

Результаты, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что у женщин с диагнозом вагинита, по сравнению с контрольной группой, увеличена доля энтеробактерий и стрептококков. Доля анаэробных условно-патогенных микроорганизмов увеличена как в группе пациенток с вагинитом, так и в группе пациенток с бактериальным вагинозом. В то же время у пациенток при концентрации Ureaplasma spp > 104 ГЭ/мл достоверно увеличено отношение Gardnerella vaginalis / Prevotella spp / Porphyromonas spp по сравнению с контрольной группой и при этом отсутствуют клинические симптомы воспаления.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×

×

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.