Метод жидкостной цитологии в диагностике опухолей легкого

110

Впервые метод жидкостной цитологии стал применяться для гинекологического скрининга. В дальнейшем метод хорошо зарекомендовал себя и успешно используется не только в скрининге, но и в диагностике опухолей различной локализации.

Рак легкого занимает лидирующие позиции в качестве причины смерти от онкологических заболеваний. В мире от данной патологии ежегодно погибает более 1 млн чел. Поэтому профилактика, своевременная диагностика и хирургическое лечение ранних форм рака легкого во многом помогают в решении этой медицинской и социально значимой проблемы.

Цитологический анализ образца ткани легкого проводится для того, чтобы определить характер процесса и получить ответ на вопрос о наличии или отсутствии злокачественного новообразования, а при его наличии – уточнить гистологическую форму, степень дифференцировки и распространенность опухолевого процесса. Цитологическое исследование мокроты применяется в скрининге и ранней диагностике рака легкого. Предоперационная цитологическая диагностика проводится с использованием биоматериала, полученного в ходе бронхоскопии и трансторакальных тонкоигольных пункций. В процессе срочной интраоперационной диагностики используют мазки-отпечатки и/или соскобы с различных участков опухоли или соскобы с краев резекции бронха .

Эффективность традиционного цитологического метода оценивается по результатам цито-гистологических сопоставлений, зависит от локализации, гистологической формы опухоли, способа получения материала и варьирует, по данным литературы, от 60 до 98%.

Снижение качества цитологической диагностики может быть обусловлено неудачным взятием образца биоматериала, потерей части диагностически значимых клеток в процессе транспортировки и приготовления цитологических препаратов, несвоевременной фиксацией, наличием артефактов, обильного фона в виде эритроцитов, элементов воспаления, детрита и др. Для устранения недостатков, связанных с применением традиционной цитологии, и повышения эффективности цитологической диагностики в целом, был разработан метод жидкостной цитологии, позволяющий длительно хранить и транспортировать образцы биоматериала, автоматизировать технологию приготовления и получать тонкослойные жидкостные цитологические препараты высокого качества с хорошей сохранностью клеточных элементов, чистым фоном и равномерным распределением материала на небольшом участке стекла. Впервые метод жидкостной цитологии стал применяться для гинекологического скрининга. В дальнейшем метод хорошо зарекомендовал себя и успешно используется не только в скрининге, но и в диагностике опухолей различной локализации.

Препараты получают путем переноса клеточного материала из стабилизирующего раствора на стекло после центрифугирования и/или осаждения в градиенте плотности. Клетки в жидкостных препаратах располагаются в виде монослоя на небольшом участке стекла.

Морфологическая картина отличается от традиционных мазков и имеет следующие особенности:

  • более чистый фон;
  • значительно снижены или отсутствуют элементы воспаления, слизь, мезенхимальное вещество, коллоид;
  • клетки уменьшены в размере, приобретают более вытянутую или округлую форму;
  • имеется трехмерный структурный компонент;
  • крупные клеточные комплексы фрагментированы;
  • изменено эпителиально-стромальное соотношение.

Большое значение для выбора лечебной тактики и прогноза имеет правильное определение гистологической формы рака легкого, его принадлежности к мелкоклеточному или немелкоклеточному (плоскоклеточному или аденокарциноме), первичному или метастатическому. Только по морфологической картине установить гистогенез новообразования удается не всегда. В таких случаях необходимо проведение уточняющих методов диагностики. Применение жидкостной цитологии позволяет проводить иммуноцитохимическое и молекулярно-генетические исследования для определения гистологической формы рака легкого.

Применение метода жидкостной цитологии при цитологическом и иммуноцитохимическом исследованиях показало ряд преимуществ перед традиционным способом приготовления препаратов:

  • получение стандартных препаратов высокого качества;
  • возможность получения монослоя клеток;
  • высокая сохранность клеточных структур;
  • уменьшение фона, что позволяет избежать «загрязнения» опухолевых клеток элементами крови и воспаления, облегчая просмотр цитологических препаратов;
  • монослойные препараты хорошего качества позволяют использовать современные компьютерные технологии обработки изображений, проведения морфометрии, иммуноморфологических исследований;
  • клетки сосредоточены в одном месте – окошке, что практически в 6–8 раз уменьшает расход дорогостоящих реактивов, что особенно важно при иммуноцитохимических и молекулярно-биологических исследованиях;
  • сокращается время просмотра мазка;
  • нет опасности пересыхания препарата (при окраске по Папаниколау).

В структуре опухолей легких преобладают карциномы, среди которых 71% составляет немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный рак, аденокарцинома), около 20% – мелкоклеточный рак, и 9% – недифференцированные формы.

Одновременное исследование традиционных цитологических мазков (с окраской по Романовскому или Папаниколау) и жидкостных цитологических мазков проводилось с использованием технологии Tri Path Becton Dickinson в 32 случаях опухолей легкого.

Цитологический препарат мелкоклеточного рака легкого, выполненный по традиционной технологии, характеризуется небольшим размером опухолевых клеток, которые располагаются либо цепочкой, либо в виде гроздьевидных скоплений. Хроматин нежный, оптически пустой при окраске по Романовскому. Соседние клетки соприкасаются друг с другом поверхностями, образуя фасетки (рис 1а).

Препарат, приготовленный методом жидкостной цитологии, отличается чистым фоном (в традиционном препарате присутствуют эритроциты), равномерным распределением и хорошей визуализацией клеточных элементов. Клеточные элементы меньше в размере, расположены преимущественно разрозненно. Хроматин более грубый за счет окраски по Папаниколау (рис. 1б).

Для высокодифференцированного плоскоклеточного рака как в традиционных, так и в жидкостных препаратах характерны крупные полигональные клетки, содержащие кератин, с неровными контурами ядра и цитоплазмы, гиперхромией ядер. При менее дифференцированных формах опухолей легкого возникают трудности в установлении степени дифференцировки плоскоклеточного рака при исследовании мазков, выполненных методом жидкостной цитологии. В традиционном препарате морфологическая картина соответствует малодифференцированному плоскоклеточному раку и совпадает с гистологическим заключением. В жидкостных препаратах имеются крупные полигональные клетки, большая часть из которых имеет вытянутую форму, отмечается гиперхромия ядер. В результате исследования жидкостных препаратов, на основе критериев классической цитологии, поставлен диагноз умеренно-дифференцированного плоскоклеточного рака. В отличие от традиционных препаратов, – относительно широкая, сохранная цитоплазма клеток, однако базофилия цитоплазмы свидетельствует об отсутствии ороговения (рис. 2 а, б).

При высокодифференцированной аденокарциноме легкого (бронхиолоальвеолярном раке) одним из важных классических критериев является расположение клеток в виде сосочкоподобных структур, что лучше представлено в жидкостных препаратах (рис. 3а) в сравнении с традиционными цитологическими мазками (рис. 3б). С другой стороны, клетки бронхиального эпителия, помещенные в жидкость, округляются, и структуры могут напоминать сосочки, что при отсутствии клеточного полиморфизма может стать причиной гипердиагностики бронхиолоальвеолярного рака.

Трудности в установлении гистологической формы опухоли могут возникнуть в результате исследования как жидкостных, так и традиционных препаратов, особенно при цитологической диагностике низкодифференцированных и недифференцированных форм рака. В этом случае требуется проведение иммуноцитохимического исследования.

При крупноклеточном раке легкого в традиционном и жидкостном препаратах выявляются крупные полигональные клетки без признаков железистой или плоскоклеточной дифференцировки, умеренная или обильная цитоплазма, хорошо очерченные клеточные границы, выраженные нуклеолы. Иммуноцитохимическое исследование проведено на жидкостных препаратах. Отмечены положительная экспрессия СК5, ЕМА, Vimentin, отсутствие экспрессии HMB 45 (рис. 4).

В случае высокодифференцированного карциноида легкого, в традиционном и жидкостном препаратах определялись мелкие мономорфные клетки с тенденцией к образованию железистоподобных структур. Проведено иммуноцитохимическое исследование, отмечена положительная экспрессия нейроэндокринных маркеров – хромогранина, синаптофизина, CD 57 и положительная экспрессия эпителиального маркера BerEp4 (рис. 5).

Проведенные исследования показали, что все жидкостные препараты имели более чистый фон, тонкослойное, равномерное распределение материала на стекле в сравнении с традиционными препаратами. Морфология жидкостных препаратов отличается от классической цитоморфологии, т. к. клеточный материал подвергается воздействию консервирующей жидкости и обработке в приборах, что влияет на интенсивность фона, размер и особенности строения клеток и клеточных структур, эпителиально-стромальное соотношение, функциональные признаки в клетках. Изменение морфологии клеток затрудняет дифференциальную диагностику доброкачественного процесса от злокачественного, например высокодифференцированного аденогенного рака от гиперплазии бронхиального эпителия. Возникают трудности в оценке степени дифференцировки клеток при малодифференцированном плоскоклеточном раке. Благодаря более чистому фону, с одной стороны, удается лучше рассмотреть клетки, с другой стороны, утрачивается важная диагностическая информация. Значительное снижение или отсутствие миксоидного фона затрудняет диагностику аденокистозного рака бронхиальных желез.

Применение жидкостной цитологии позволило повысить эффективность цитологической диагностики, проводить иммуноцитохимическое исследование, транспортировать и архивировать клеточный материал. Совместное применение методов жидкостной и традиционной цитологии повышает эффективность цитологической диагностики за счет снижения процента неудачно взятого материала, точность исследования оставалась прежней на нашем материале.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×