Автоматизация окраски препаратов для микроскопического исследования

356

Одним из путей оптимизации выполнения микроскопических исследований является разработка средств малой автоматизации, позволяющих облегчить и стандартизировать проведение различных операций, например приготовление мазков крови.

Современной тенденцией развития лабораторных технологий является автоматизация лабораторных исследований [2]. Это проявляется созданием широкого спектра приборов, позволяющих значительно более эффективно использовать рабочее время сотрудников клинико-диагностических лабораторий (КДЛ). Сегодня в лабораториях повсеместно используются автоматические анализаторы для выполнения гематологических, биохимических, коагулологических, иммуноферментных и других видов исследований [4].

Однако внедрение гематологических анализаторов и анализаторов химического состава мочи не избавило сотрудников КДЛ от необходимости выполнять микроскопические исследования этих биологических жидкостей [3, 5, 12]. В практической деятельности современных КДЛ микроскопическое исследование различных биологических объектов (кровь, моча, мокрота, кал, выпотные жидкости, эякулят, мазки из урогенитального тракта и др.) по-прежнему занимает одно из важнейших мест. При этом выполнение микроскопии остается одним из наименее автоматизированных сегментов лабораторных исследований. Одним из путей оптимизации этого вида лабораторных исследований является разработка и широкое внедрение средств малой автоматизации, позволяющих облегчить и стандартизировать проведение различных операций, например приготовление мазков крови [6].

При выполнении микроскопических исследований используется анализ как неокрашенных, так и окрашенных препаратов. В практике КДЛ наиболее часто применяются следующие виды окраски: по Романовскому – Гимзе (Май-Грюнвальду – Гимзе), метиленовым синим, по Цилю – Нильсену, по Граму [4]. Хотя эти методики и не исчерпывают всего спектра используемых в работе лабораторий методик окраски, их доля составляет более 95–97%. На сегодняшний день лаборатории располагают различными автоматическими приборами, которые позволяют выполнять разные методы окраски мазков крови [1, 7].

Одним из новых приборов, недавно появившихся на рынке, стал автоматический стейнер V-Chromer® II (West Medica). Этот прибор за один рабочий цикл проводит качественную окраску 25 стекол по пяти различным протоколам, включающим наиболее востребованные методики окраски.

В автоматическом стейнере реализованы четыре традиционно применяющихся в практике КДЛ протокола окраски (по Романовскому – Гимзе, по Цилю – Нильсену, по Граму, метиленовым синим), а также относительно новый для России метод панхромной окраски. Наборы реагентов для V-Chromer® II включают все необходимые компоненты и реактивы для выполнения качественной окраски нескольких сотен препаратов.

Ниже представлен обзор предложенных методов окраски и их сравнение с классическими ручными методиками.

Окраска по Романовскому – Гимзе (по Май-Грюнвальду – Гимзе) (кат. № 190510). В состав набора входят две пластиковых ванны, в которых герметично запаян раствор фиксатора Май-Грюнвальда. Фиксатор используется несколько раз, по рекомендации производителя одна ванна рассчитана на 10 циклов фиксации кассет, содержащих по 25 стекол. В состав набора также входят 20 флаконов, содержащих 20 мл концентрированного раствора краски Романовского – Гимзы, и 20 флаконов с концентрированным раствором фосфатного буфера (рН 7,2). Для приготовления 200 мл рабочего раствора следует развести содержимое флакона с буфером в 160 мл дистиллированной воды, а затем добавить концентрированный раствор краски Романовского – Гимзы. Для улучшения красящих свойств и улучшения стабильности рабочего раствора, после приготовления его следует тщательно перемешать. Рабочий раствор используется однократно для окраски стекол, помещенных в штатив (загрузка в штатив 25 стекол одновременно).

Учитывая данные литературы о возможности выпадения в осадок преципитатов краски Романовского – Гимзы, можно использовать различные подходы к повышению стабильности рабочего раствора, например добавление раствора диметилсульфоксида [10] или этилового спирта [7].

Таким образом, содержимого одного набора достаточно, чтобы окрасить 500 препаратов. 

Окраска мазков по Граму (окраска Gram PVP Kit) (кат. № 190615). Для окраски мазков по Граму с использованием V-Chromer® II применяется готовый набор красителей. Используемые растворы и методика окраски несколько отличаются от принятой в литературе [4].

В состав набора входят: 1 ванночка с готовым раствором Crystal Violet, 1 ванночка с раствором йода в поливинилпироллидоне (Iodine PVP), 1 ванночка с раствором сафранина и 3 ванночки с обесцвечивающим спиртовым раствором. Вместо сафранина может использоваться раствор фуксина. Все растворы готовы к использованию и находятся в герметично запаянных пластиковых ванночках. Протокол окраски и количество циклов окраски записаны на магнитную карточку.

Протокол окраски:

Препарат погрузить в ванночку с раствором Crystal Violet – 60 с;

Промыть водой – 30 с;

Повторно промыть водой – 30 с;

Препарат погрузить в ванночку с раствором йода в поливинилпироллидоне (Iodine PVP) – 60 с;

Промыть водой – 30 с;

Повторно промыть водой – 30 с;

Препарат погрузить в ванночку с обесцвечивающим раствором (Gram Decolorizer) – 60 с;

Промыть водой – 30 с;

Повторно промыть водой – 30 с;

Препарат погрузить в ванночку с раствором сафранина ( Safranin) – 60 с;

Промыть водой – 30 с;

Повторно промыть водой – 30 с;

Препарат оставить сохнуть на воздухе – 3 мин.

Данный способ окраски отличается от традиционного несколькими аспектами. В нем используется жидкий раствор краски Crystal Violet – вместо фильтровальной бумаги, пропитанной раствором генцианвиолета. Вместо раствора Люголя используется раствор йода в поливинилпироллидоне, который, при сохранении всех своих красящих свойств, является менее агрессивным и может длительно храниться в пластиковой упаковке. При автоматической окраске мазков из урогенительного тракта можно легко отличить грамположительные микроорганизмы, окрашенные в черно-фиолетовый цвет, от грамотрицательных микроорганизмов, которые окрашены в красный цвет.

Окраска мазков по Цилю Нильсену (кат. № 190720). Для окраски мазков по Цилю – Нильсену с использованием V-Chromer® II также применяется готовый набор красителей. Растворы и методика окраски несколько отличаются от традиционных [9]. Использование оригинального, содержащего дополнительные компоненты, раствора фуксина позволяет исключить процедуру нагревания стекла над пламенем спиртовой горелки, как это проводится при ручной методике окраски препаратов [8]. Методика позволяет одновременно выполнить окраску 25 препаратов за один цикл работы прибора, который занимает менее 15 мин.

В состав набора входят: 1 ванночка с готовым раствором фуксина, содержащим дополнительные компоненты; 1 ванночка с раствором метиленового синего и 4 ванночки с обесцвечивающим раствором. Все растворы готовы к использованию. Протокол окраски и количество циклов окраски записаны на магнитную карточку.

Протокол окраски:

Препарат погрузить в ванночку с раствором фуксина с поверхностно активными добавками (Carbol Fuchsin Tensoactive) – 300 с;

Промыть водой – 30 с;

Повторно промыть водой – 30 с;

Препарат погрузить в ванночку с раствором обесцвечивающего реагента (TB Decolorizer) – 60 с;

Промыть водой – 30 с;

Препарат погрузить в ванночку с раствором метиленового синего (Methylene Blue) – 30 с;

Промыть водой – 30 с;

Повторно промыть водой – 30 с;

Препарат оставить сохнуть на воздухе – 3 мин.

Данный способ окраски отличается от традиционного отсутствием необходимости нагревать каждый препарат над пламенем спиртовки до появления тяжелых белых паров, как при классическом ручном способе окраски мазков (Ерохин, 2008). Использование раствора фуксина с добавлением поверхностноактивных компонентов обеспечивает хорошее окрашивание кислотоустойчивых микроорганизмов и при комнатной температуре. Отказ от нагревания позволил автоматизировать методику и одновременно добиться качественной окраски.

Паноптическая окраска мазков (окраска Quick Panoptic) (кат. № 190825). Данный способ окрашивания в России мало известен, хотя в странах Европы он широко применяется для окраски самых различных препаратов. В частности, методика с успехом используется для окраски мазков крови, отделяемого урогенитального тракта, спермы и препаратов других биологических жидкостей [9, 11].

В состав набора входят 6 ванночек, содержащих три вида растворов (по две ванночки каждого): раствор триарилметана (Methanolic solution of Triarylmethane) – для фиксации мазков и подготовки их к дальнейшему окрашиванию, раствор ксантена (Xanthene buffered solution) – красного красителя, раствор триазина (Triazine buffered solution) – фиолетового красителя. Растворы красителей имеют стабильные значения рН, позволяющие добиться оптимального окрашивания. Данный способ окраски позволяет получать качественно окрашенные препараты, в которых легко дифференцируются как типы клеток, так и их структура.

Методика позволяет одновременно выполнить окраску 25 препаратов за один цикл работы прибора, который занимает менее 5 мин.

Протокол окраски:

Препарат погрузить в ванночку с раствором 1 (Methanolic solution of Triarylmethane) – 10 с;

Препарат оставить сохнуть на воздухе – 60 с;

Препарат погрузить в ванночку с раствором 2 (Xanthene buffered solution) – 5 с;

Препарат оставить сохнуть на воздухе – 60 с;

Препарат погрузить в ванночку с раствором 3 (Triazine buffered solution) – 5 с;

Промыть водой – 30 с;

Препарат оставить сохнуть на воздухе – 3 мин.

Несомненным достоинством данного способа окраски является быстрота получения качественно окрашенных мазков. Методика может быть использована для окраски мазков из урогенитального тракта и других биологических материалов, в т. ч. и для окраски мазков крови.

Таким образом, прибор для окраски мазков V-Chromer® II позволяет в автоматическом режиме выполнять практически все используемые в практике КДЛ методы окраски, от наиболее простых (раствором метиленового синего) до достаточно сложных (по Романовскому – Гимзе, по Граму и по Цилю – Нильсену). Его применение позволяет четко стандартизировать окраску препаратов и более рационально использовать рабочее время сотрудников лаборатории.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×