Формирование банка сывороток крови больных паразитозами

198

Формирование банка сывороток крови больных паразитозами позволило стандартизировать все этапы сбора, хранения, маркировки и регистрации в компьютерной базе образцов сывороток.

В последние годы в большинстве стран мира были организованы национальные банки сывороток крови, созданные с целью мониторинга, контроля и прогноза социально значимых и опасных инфекционных заболеваний и функционирующие в рамках единой международной сети. Существующие коллекции сывороток крови, полученной от представителей различных популяций населения, постоянно пополняются в Центре по контролю заболеваемости (CDC) в США, Франции, Германии, Дании, Испании, Швейцарии, Италии, Португалии и других странах [1, 4, 6].

По данным Всемирной организации здравоохранения, в России ежегодно регистрируется около 2 млн больных паразитарными болезнями [7]. В связи с чем возникает необходимость в тщательном обследовании больных при подозрении на паразитарную инвазию, а также возрастает потребность в расширении спектра диагностических тестов [8].

В нашей стране большое внимание уделяется определению специфических антител к возбудителям паразитарных болезней (серологической диагностике), что для некоторых паразитозов является одним из основных диагностических критериев. Клиническая картина большинства паразитозов (актуальных для России) достаточно полиморфна и малоспецифична. Выявление специфических антител помогает врачу поставить окончательный клинический диагноз [2, 3].

В России в настоящее время отсутствует официально зарегистрированный банк сывороток крови больных паразитарными болезнями. Между тем создание такого банка позволит решить проблемы мониторинга, контроля и прогноза социально значимых паразитозов. Для этого необходимо организовать адекватное информационное обеспечение, которое определяется наличием паспортизированной системы накопленных сывороток крови [6].

В НИИ Медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского (НИИ МПиТМ им. Е.И. Марциновского) постоянно проводится определение специфических антител иммуноглобулинов классов G и M к антигенам возбудителей ряда паразитозов (эхинококкоз, токсокароз, трихинеллез, описторхоз, токсоплазмоз, цистицеркоз). Таким образом, появляется возможность отследить динамику нарастания или снижения уровня антител у пациентов, которые имеют установленный диагноз определенного паразитоза. Так, например, многие пациенты с диагнозом эхинококкоз длительное время проходят курсы лекарственной химиотерапии, и чтобы оценить эффективность лечения, необходимо на протяжении некоторого времени проводить определение антител к антигенам Echinococcus granulosus. Важно отметить, что определение антител к антигенам Toxocara canis является одним из основных диагностических критериев при постановке диагноза токсокароз. Определение антител является единственным методом лабораторной диагностики описторхоза на ранней фазе заболевания, до начала яйцепродукции паразитом, а при хроническом описторхозе используется как вспомогательный метод [5].

В течение последних лет в лаборатории иммунологии отдела медицинской паразитологии НИИ МПиТМ им. Е.И. Марциновского накапливались сыворотки, в которых были выявлены антитела к антигенам тканевых паразитов. Образцы используются при разработке медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) – как для контроля эффективности уже существующих МИБП, так и для создания контрольных панелей сывороток. Сегодня на рынке представлено большое число фирм, выпускающих наборы реагентов для определения антител к антигенам паразитов, в связи с чем возникает потребность в периодическом контроле уже существующих диагностических наборов.

Идея создания банка сывороток крови больных паразитозами принадлежит ведущему научному сотруднику лаборатории иммунологии отдела медицинской гельминтологии НИИ МПиТМ им. Е.И. Марциновского Татьяне Владимировне Старковой. Основная цель этой работы – формирование основных критериев систематизации, обработки и хранения образцов сывороток, прошедших рутинную диагностику, для создания банка сывороток крови больных паразитозами.

Главная задача создания банка сывороток заключается в правильном сохранении биологического материала, в неизменном качестве, в течение длительного срока (до 10 лет) и легкой доступности образцов.

Создание банка сывороток крови предполагает несколько этапов: оптимизация системы сбора и хранения образцов, разработка системы маркировки образцов, формирование компьютерной базы данных.

Получение и подготовка биологического материала

Система сбора и хранения образцов крови должна отвечать ряду требований.

Подготовка пациента

Взятие крови у пациента для исследований производят в ранние утренние часы, после 12-часового ночного голодания. Оптимальным временем является промежуток с 7.00 до 10.00 утра.

Накануне взятия пробы крови пациент должен соблюдать следующий режим: воздержаться от физических нагрузок, приема алкоголя и лекарственных средств, изменений в питании в течение 24 ч до взятия крови и не принимать пищу после ужина.

Отбор проб крови

Взятие проб крови на исследование проводится в медицинских учреждениях по общепринятым гематологическим методикам. Для проведения исследований берется венозная кровь в объеме 3–5 мл или капиллярная кровь в объеме не менее 1 мл. Используются стеклянные, пластиковые или вакуумные (вакутейнеры) пробирки, без активаторов свертывания крови, объемом 4–5 мл, предназначенные для биохимических и серологических исследований.

Транспортировка проб крови в лабораторию

Кровь доставляется в лабораторию в день взятия, в этот же день из нее отделяют сыворотку. Все пробирки с сыворотками помещают в один пакет.

Первичная подготовка проб крови к транспортировке включает соблюдение необходимого времени инкубации, обеспечение необходимых условий и времени хранения, а также центрифугирование проб.  

Пробирки с кровью для серологических анализов помещают вертикально в штатив, избегая встряхивания, а затем в специальные контейнеры с надписью «Пробы крови для лабораторных исследований». В термоконтейнере должна поддерживаться температура 2–8 ⁰С. Пробирки должны быть плотно закрыты, прочно установлены, чтобы предотвратить их опрокидывание.

При транспортировке контейнеры должны быть защищены от воздействия света (особенно яркого солнечного) и установлены вдали от нагревательных элементов.

 Доставленный в лабораторию биологический материал немедленно передают специалистам лаборатории, в журнале фиксируется время доставки проб.

Пробирки с заведомо инфицированным материалом помещают в дополнительный вторичный контейнер для предотвращения попадания биоматериала во внешнюю среду при каком-либо механическом повреждении, и только затем – в контейнер с температурой 2–8 ⁰С и надписью «Пробы с инфицированным материалом».

Требования к центрифугированию проб крови

Прежде чем центрифугировать пробирки с образцами сыворотки, необходимо дождаться полного свертывания крови. Минимальное время полного свертывания крови – 60 мин при комнатной температуре (20–25 0С), вдали от прямых солнечных лучей и отопительных приборов.

Пробирки центрифугируют в течение 10 мин при 1300 g. После центрифугирования образцы сыворотки переносят в микропробирки. Микропробирки нумеруют согласно приложенному списку обследуемых [9, 10].

Сроки хранения проб крови

Максимально допустимое время хранения проб – период времени, в течение которого обеспечивается требуемая стабильность 95% проб биологического материала.

Сроки хранения пробы: при комнатной температуре (от 20 до 25 °С) – 2 ч; при температуре холодильника (от 4 до 8 °С) и глубоком замораживании (минус 20 °С) – не более 6 дней.

Длительное хранение (от 7 дней до 1 года) сыворотки обеспечивается при температуре не выше минус 18 °С. Для хранения сывороток в серум банке рекомендуется глубокое замораживание до минус 70 0 С, в таких условиях сыворотка может храниться от одного года до 10 лет.

Длительное хранение сывороток приводит к частичной потере активности антител, особенно иммуноглобулинов класса М (IgM). В процессе длительного хранения может происходить агрегация неспецифических иммуноглобулинов, что впоследствии может приводить к получению ложноположительных результатов серологических реакций. С целью предупреждения потери активности антител, необходимо хранить сыворотки в глубоком холоде, при температуре не выше минус 18°С.

Для проведения нескольких исследований сыворотку от одного пациента нужно разлить в несколько полистироловых микропробирок с крышками. Транспортировка замороженных сывороток должна осуществляться в температурных условиях, не допускающих размораживания, с использованием сумки-холодильника, термоконтейнера или термоса со льдом, можно также использовать сухой лед.

Сыворотку перед исследованием необходимо разморозить полностью и тщательно перемешать во избежание неравномерного распределения антител.

База данных сывороток крови больных паразитозами

 В течение многих лет вся информация о сыворотках крови хранилась в рукописных журналах, что составляло определенные трудности в работе. В настоящее время сотрудниками лаборатории создана база данных с использованием стандартной программы Microsoft Excel. Программа является доступной и реализуемой с минимальными материальными, трудовыми и временными затратами.

В базу данных коллекции сывороток вносится следующая информация:

  1. Номер сыворотки
  2. Дата проведения серологических исследований
  3. Серия использованных МИБП
  4. Характеристика образцов сывороток:

4.1. наличие специфических антител к антигенам паразитов, которые определяются в процессе диагностических исследований;

4.2. отсутствие специфических антител к трем и более антигенам паразитов;

4.3. полное отсутствие специфических антител к антигенам.

Формирование банка сывороток крови больных паразитозами позволило стандартизировать все этапы сбора, хранения, маркировки и регистрации в компьютерной базе образцов сывороток.

Предложенная база данных банка сывороток обеспечивает оперативный доступ к результатам исследования, повышает точность и объективность систематизации результатов исследований за счет уменьшения доли ручного труда, снижает количество ошибок при компьютерной обработке данных, расширяет возможности проведения анализа данных в автоматическом режиме.

Данные банка сывороток могут использоваться не только для мониторинга паразитарных болезней, но и для разработки и контроля медицинских иммунобиологических препаратов различных фирм-производителей.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×