Иммунохемилюминесцентный анализ с помощью автоматизированных платформ LIAISON® (DiaSorin)

718

В настоящее время лабораторная диагностика инфекций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), в зависимости от природы возбудителя, преимущественно основывается на его идентификации в кале культуральным методом или путем обнаружения его генетического материала методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) или антигенов различными вариантами иммунохимических методов (иммуноферментный анализ (ИФА), иммунохроматография и т. д.). Для некоторых видов микроорганизмов доступны и другие, специфические методы диагностики.

Среди иммунохимических методов иммунохроматографические экспресс-методы, несмотря на свою дешевизну, характеризуются низкой специфичностью. Внедрение ИФА-тестов в лабораторную практику позволило существенно повысить аналитические характеристики выявления антигенов возбудителей инфекций. На смену ИФА-диагностике многих инфекционных и неинфекционных показателей давно пришел иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), как более чувствительный и точный, и при этом более удобный в работе. Однако ИХЛА-диагностика кала на наличие инфекционных антигенов до недавнего времени была представлена единичными тестами.

В 2012 г. итальянская компания DiaSorin, специализирующаяся на разработке и производстве иммунохимических реагентов, в первую очередь для серологической диагностики инфекционных заболеваний (в портфеле компании более 40 наименований инфекционных маркеров), выпустила свой первый ИХЛА-тест для обнаружения антигенов Helicobacter pylori в кале с помощью анализаторов линейки LIAISON®. Рекомендуемыми методами диагностики инфекции H. pylori являются дыхательный тест с мочевиной, меченной 13С, и иммуноферментный анализ антигенов H. pylori в кале. Тем не менее, наряду с ними используются и другие инвазивные (бактериологический посев или молекулярно-генетический анализ биоптата, гистология) и неинвазивные (обнаружение антител в крови, ПЦР-исследование кала) методы. К наиболее достоверным методам обнаружения возбудителя традиционно относят бактериологический, гистологический и молекулярно-генетический методы, однако все они требуют назначения фиброгастродуоденоскопии. Из неинвазивных методов наибольшей диагностической чувствительностью и специфичностью обладает мочевинный дыхательный тест (95 и 96%, соответственно), но и его выполнение требует наличия специального оборудования и обученного персонала.

Новый ИХЛА-тест компании DiaSorin, обладая сравнимыми аналитическими характеристиками (диагностическая чувствительность по сравнению с мочевинным тестом – 100%, специфичность – 99%), более простой в выполнении, даже по сравнению с коммерческими методиками ИФА. В первую очередь облегчается преаналитическая стадия обработки такого специфического объекта, как кал: тест-система снабжена одноразовыми устройствами и растворами для экстракции. Для получения экстракта достаточно поместить пробу (750 мкл жидкого или 5 мм твердого кала) в устройство, добавить 750 мкл раствора для экстракции, тщательно перемешать содержимое с помощью вихревой мешалки типа Vortex и дважды центрифугировать его для отделения жидкого экстракта от твердых частиц кала. Часть устройства с экстрактом устанавливается непосредственно в анализатор, подобно обычной пробирке, тогда как часть с остатками кала должна быть утилизирована.

Вся процедура пробоподготовки занимает не более 15 мин. Сама аналитическая стадия, благодаря выполнению исследования с помощью анализатора LIAISON® или LIAISON® XL, полностью автоматизирована. Результат полуколичественного определения калового антигена доступен всего через 30 мин от начала анализа. При этом тест-система позволяет обнаружить антиген H. pylori в концентрации до 2 нг/мл экстракта, приготовленного по описанной выше схеме.

После успешного эксперимента с первой тест-системой для ИХЛА-исследования кала, компания разработала и выпустила тест-системы для обнаружения глутаматдегидрогеназы (ГДГ), а также токсинов А и В Clostridium difficile. Эти тест-системы также содержат устройства и специфические растворы для экстракции.

C. difficile – бактерия, преимущественно вызывающая нозокомиальную диарею и псевдомембранозные колиты. По статистике, 10–30% госпитализированных больных инфицируются уже после 2 дней пребывания в больнице. У трети инфицированных развиваются специфические симптомы. Заражение вне стационаров происходит очень редко. Сам по себе возбудитель не обладает инвазивными свойствами, повреждающее действие на слизистую кишечника оказывают белковые токсины А и В, которые выделяют около 75% штаммов C. difficile, что в свою очередь приводит к развитию клинических симптомов. Универсальным маркером всех штаммов C. difficile является фермент ГДГ, катализирующий превращение глутамата в альфа-кетоглутарат.

В настоящее время для диагностики инфекции клостридий используют культуральный метод, обнаружение ГДГ иммунохимическим методом, обнаружение токсинов иммунохимическим методом или тестом на цитотоксичность, а также молекулярно-генетические исследования. Объектом анализа с помощью всех этих методов служит проба кала больного. Из-за недостаточно высокой диагностической чувствительности всех имеющихся на рынке тест-систем для обнаружения токсинов клостридий и, как следствие, вероятности ложноотрицательных результатов, не рекомендуется использовать их по-отдельности. Поэтому диагностика инфекции C. difficile с помощью анализаторов линейки LIAISON® выполняется в рамках двухступенчатого или трехступенчатого алгоритмов.

На первом этапе в обоих случаях необходимо осуществить первичный скрининг проб на наличие бактерий, используя тест-систему для определения ГДГ, т. к. этот показатель обладает очень высокой отрицательной прогностической значимостью (по разным данным, от 95 до 99%). На втором этапе все положительные пробы анализируются с помощью второй тест-системы для определения токсинов клостридий, что позволяет отсеять нетоксические формы бактерий. Трехступенчатый алгоритм подразумевает дополнительный анализ проб, отрицательных во втором тесте, методом ПЦР для окончательного исключения инфекции клостридий. Каждое исследование занимает 40 мин и, как в случае с каловым антигеном H. pilory, полностью автоматизировано. От персонала лаборатории требуется только однократная подготовка пробы с использованием устройства для экстракции: один и тот же экстракт используется для скрининга и обнаружения токсинов. Минимальная концентрация ГДГ, обнаруживаемая тест-системами в экстрактах, – 220 пг/мл, токсина А – 1,2 нг/мл, токсина В – 1,5 нг/мл.

Вслед за тест-системами для диагностики инфекции H. pylori и C. difficile компания DiaSorin выпустила наборы для выявления ротавируса (продолжительность анализа 35 мин) и токсинов энтерогеморрагической Escherichia coli (продолжительность анализа – 45 мин, минимальная выявляемая концентрация шига-подобного токсина 1 – 5 нг/мл, шига-подобного токсина 2 – 0,5 нг/мл).

Сегодня анализаторы LIAISON® и LIAISON® XL – единственные среди автоматических иммунохемилюминесцентных платформ, в меню тестов которых входят тест-системы для диагностики четырех различных инфекций ЖКТ в кале. В настоящий момент выполняется сбор документов для регистрации тест-систем в Минздраве России. Стоит также отметить, что компания DiaSorin планирует расширить панель иммунохемилюминесцентных тестов в кале и до конца 2014 г. к выпуску заявлены тест-системы для определения аденовируса и кальпротектина, а в дальнейшем и Campylobacter, диагностики паразитарных инфекций, на скрытую кровь в кале и др.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль