Метод линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M

354

Технология иммуноблоттинга набирает широкое распространение, поскольку данный метод показывает точную и высокую клиническую информативность по сравнению с иммуноферментным анализом (ИФА).

В статье рассмотрены основные положения авторской методики определения антител к основным возбудителям инфекций  TORCH-группы, являющихся частыми причинами младенческой смертности с помощью линейного иммуноблоттинга.

Опасность инфекций TORCH-группы

В стране проводится целый комплекс мер, направленных на снижение показателей младенческой смертности. Так, данные Росстата свидетельствуют о том, что показатели смертности младенцев  в 2014 составили 7,4 на 1000 новорожденных, тогда как в 2013 данные показатели составили 8,2 на 1000 новорожденных детей, что свидетельствует об уменьшении младенческой смертности на 9,8 %.

Существенную роль в причинах младенческой смертности играют так называемые внутриутробные или врожденные инфекции, которые развиваются в результате интранатального заражения плода при вертикальном пути передачи инфекционного возбудителя от матери.

Изучение проблемы внутриутробных инфекций связано не только с такими потерями, но и с тем, что проникновение возбудителей таких инфекций в организм еще не рожденного ребенка приводит к нарушениям образования тканей и органов, формированию в поврежденных тканях фиброзных трансформаций.

Развитие внутриутробных инфекций не всегда проявляется при рождении или в неонатальный период, а проявляющиеся симптомы не имеют специфических признаков, поэтому диагностика инфекций вызывает больную трудность.

Самые распространенные у плодов инфекции были объединены в одну группу и названы термином «TORCH-инфекции», по первым буквам названий основных заболеваний: Тoxoplasmоsis  - токсоплазмоз, Rubella -краснуха, Cytomegalia - Цитомегаловирус, Herpes - Герпес и Оtherinfections – другие инфекции.

К другим инфекциям относятся: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, хламидиоз и другие.

Скудность симптоматики данных заболевания обуславливают необходимость проведения специфичных лабораторных методов, которые направлены на выявление в крови маркеров иммунного ответа и оценку их концентрации.

Чаще всего для выявления инфекций TORCH-группы используют иммуноферментный анализ (ИФА), а также линейный иммуноблоттинг (ЛИБ).

Размещение антигенных линий на стрипах:

Метод линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M

Описание проведения методики

Читайте также в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Технология иммуноблоттинга позволяет оценить присутствие специфичных антител одного или нескольких возбудителей инфекции при проведении одного лабораторного анализа.

Для проведения анализа ЛИБ с целью выявления возбудителей TORCH-инфекций в качестве твердой фазы иммуносорбента используются нитроцеллюлозные мембраны, на которых размещены антигены возбудителей соответствующих инфекций.

Учитывая изученную литературу об иммуногенности и специфичности для человека, были подобраны и очищены естественные (нативные) и рекомбинантные антигены возбудителейTORCH-группы:

  • Естественный антиген токсоплазмоза Гонди и аналог антигена р30;
  • Естественный антиген краснухи;
  • Аналог мозаичного антигена цитомегаловируса, который содержит последовательности белков рр150, рр28, рр52 и gВ.
  • Аналогиантигена вируса простого герпеса

Затем эти антигены были размещены на иммуносорбенте.

Также на иммуносорбенте были помещены антитела к вирусу краснухи согласно стандартам ВОЗ (Anti-RubellaImmunoglobulin, Human NIBSC), иммуноглобулины класса G, а также контрольные линии, на которых содержатся иммуноглобулины человека класса Gи М, для калибровки результатов, а также антигены к данным иммуноглобулинам.

Для оценивания чувствительности методики были изучены контрольные сыворотки, которые содержали (в количестве 94) и не содержали (в количестве 47) антитела к антигенам TORCH-инфекций.

К этим контрольным сывороткам относились: контрольная панель сывороток «Рубелла», «ЦМВ-IGM», стандарт «АТ-G(+/-) T. Gondii», стандарт «АТ-G(+/-) ВПГ-1,2» и другие.

Исследование показало, что на панелях контрольных сывороток получено полное совпадение результатов выявления специфичных антител с характеристиками каждой панели. Это доказывает 100% чувствительность и эффективность данной методики.

Данные клинических исследований

Новая методика была изучена при исследовании более 1000 сывороток крови, которые были получены у беременных женщин и других людей, которые проходили обычное обследование в диагностическом  исследовании.

В качестве реагента использовались соответствующие наборы для выявления антител к антигенам всех возбудителей TORCH-инфекций методом ИФА и методом линейного иммуноблоттинга, затем было проведено сравнение по показателям обоих методов.

Сначала были определены специфичные G-антитела к антигенам возбудителей TORCH-группы. Данные продемонстрировали наличие расхождений в определении антител Gкласса при выявлении разными методами по 16 образцам крови (токсоплазмоз - 1,19 % случаев, краснуха -1,16 % случаев, ЦМВ 0,31 % случаев, ВПГ – 2,22 % случаев). Было решено провести дополнительное исследование с использованием реагентов немецкого происхождения (Recomline TORCH ScreeningIgG). В результате в 93,75 % случаев  результаты метода линейного иммоноблоттинга и немецкого реагента совпали, что доказывает преимущественную точность метода ЛИБ перед методом ИФА.

В процессе определения антител класса М было получено большее число расхождений в методах. Так, к возбудителю токсоплазмоза расхождение составило 24 случая из 247, ЦМВ – 24 из 220,краснухи – 5 из 236, ВПГ  -  8 из 187 случаев. По всем спорным результатам были проведены повторные исследования при использовании немецких реагентов  Recomline TORCH ScreeningIgG. Результаты показали, что более, чем в 80% случаев полное совпадение было у метода линейного иммуноблоттинга.

Итоговые результаты исследований

По методу ЛИБ результаты показали диагностическую эффективность в 99.4-100 % случаев, тогда как метод ИФА показал точность в 99.1-100 % случаев  выявления антител класса G.

Разночтения в результатах скриннинга специфических антител класса Gпозволяют говорить о более высокой эффективности  метода линейного иммуноблоттинга.

Данные по обнаружению специфических антител класса М к антигенам возбудителей инфекций TORCH-группывыявили также,более высокую эффективность метода ЛИБ (от 98.6% до 100 %) по сравнению с наборами ИФА (от 75 % до 98 %), что доказывает их более точную клиническую информативность.

Таким образом, мы можем сделать вывод о  том, что применение метода линейного иммуноблоттинга для выявлений антител класса Gи М к возбудителям TORCH-группы доказал свою клиническую эффективность и качество исследования, не уступающее зарубежным реагентам.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль