text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Метод линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M

  • 29 марта 2016
  • 391

Технология иммуноблоттинга набирает широкое распространение, поскольку данный метод показывает точную и высокую клиническую информативность по сравнению с иммуноферментным анализом (ИФА).

В статье рассмотрены основные положения авторской методики определения антител к основным возбудителям инфекций  TORCH-группы, являющихся частыми причинами младенческой смертности с помощью линейного иммуноблоттинга.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Опасность инфекций TORCH-группы

В стране проводится целый комплекс мер, направленных на снижение показателей младенческой смертности. Так, данные Росстата свидетельствуют о том, что показатели смертности младенцев  в 2014 составили 7,4 на 1000 новорожденных, тогда как в 2013 данные показатели составили 8,2 на 1000 новорожденных детей, что свидетельствует об уменьшении младенческой смертности на 9,8 %.

Существенную роль в причинах младенческой смертности играют так называемые внутриутробные или врожденные инфекции, которые развиваются в результате интранатального заражения плода при вертикальном пути передачи инфекционного возбудителя от матери.

Изучение проблемы внутриутробных инфекций связано не только с такими потерями, но и с тем, что проникновение возбудителей таких инфекций в организм еще не рожденного ребенка приводит к нарушениям образования тканей и органов, формированию в поврежденных тканях фиброзных трансформаций.

Развитие внутриутробных инфекций не всегда проявляется при рождении или в неонатальный период, а проявляющиеся симптомы не имеют специфических признаков, поэтому диагностика инфекций вызывает больную трудность.

Самые распространенные у плодов инфекции были объединены в одну группу и названы термином «TORCH-инфекции», по первым буквам названий основных заболеваний: Тoxoplasmоsis  - токсоплазмоз, Rubella -краснуха, Cytomegalia - Цитомегаловирус, Herpes - Герпес и Оtherinfections – другие инфекции.

К другим инфекциям относятся: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, хламидиоз и другие.

Скудность симптоматики данных заболевания обуславливают необходимость проведения специфичных лабораторных методов, которые направлены на выявление в крови маркеров иммунного ответа и оценку их концентрации.

Чаще всего для выявления инфекций TORCH-группы используют иммуноферментный анализ (ИФА), а также линейный иммуноблоттинг (ЛИБ).

Размещение антигенных линий на стрипах:

Метод линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M

Описание проведения методики


Технология иммуноблоттинга позволяет оценить присутствие специфичных антител одного или нескольких возбудителей инфекции при проведении одного лабораторного анализа.

Для проведения анализа ЛИБ с целью выявления возбудителей TORCH-инфекций в качестве твердой фазы иммуносорбента используются нитроцеллюлозные мембраны, на которых размещены антигены возбудителей соответствующих инфекций.

Учитывая изученную литературу об иммуногенности и специфичности для человека, были подобраны и очищены естественные (нативные) и рекомбинантные антигены возбудителейTORCH-группы:

  • Естественный антиген токсоплазмоза Гонди и аналог антигена р30;
  • Естественный антиген краснухи;
  • Аналог мозаичного антигена цитомегаловируса, который содержит последовательности белков рр150, рр28, рр52 и gВ.
  • Аналогиантигена вируса простого герпеса

Затем эти антигены были размещены на иммуносорбенте.

Также на иммуносорбенте были помещены антитела к вирусу краснухи согласно стандартам ВОЗ (Anti-RubellaImmunoglobulin, Human NIBSC), иммуноглобулины класса G, а также контрольные линии, на которых содержатся иммуноглобулины человека класса Gи М, для калибровки результатов, а также антигены к данным иммуноглобулинам.

Для оценивания чувствительности методики были изучены контрольные сыворотки, которые содержали (в количестве 94) и не содержали (в количестве 47) антитела к антигенам TORCH-инфекций.

К этим контрольным сывороткам относились: контрольная панель сывороток «Рубелла», «ЦМВ-IGM», стандарт «АТ-G(+/-) T. Gondii», стандарт «АТ-G(+/-) ВПГ-1,2» и другие.

Исследование показало, что на панелях контрольных сывороток получено полное совпадение результатов выявления специфичных антител с характеристиками каждой панели. Это доказывает 100% чувствительность и эффективность данной методики.

Данные клинических исследований

Новая методика была изучена при исследовании более 1000 сывороток крови, которые были получены у беременных женщин и других людей, которые проходили обычное обследование в диагностическом  исследовании.

В качестве реагента использовались соответствующие наборы для выявления антител к антигенам всех возбудителей TORCH-инфекций методом ИФА и методом линейного иммуноблоттинга, затем было проведено сравнение по показателям обоих методов.

Сначала были определены специфичные G-антитела к антигенам возбудителей TORCH-группы. Данные продемонстрировали наличие расхождений в определении антител Gкласса при выявлении разными методами по 16 образцам крови (токсоплазмоз - 1,19 % случаев, краснуха -1,16 % случаев, ЦМВ 0,31 % случаев, ВПГ – 2,22 % случаев). Было решено провести дополнительное исследование с использованием реагентов немецкого происхождения (Recomline TORCH ScreeningIgG). В результате в 93,75 % случаев  результаты метода линейного иммоноблоттинга и немецкого реагента совпали, что доказывает преимущественную точность метода ЛИБ перед методом ИФА.

В процессе определения антител класса М было получено большее число расхождений в методах. Так, к возбудителю токсоплазмоза расхождение составило 24 случая из 247, ЦМВ – 24 из 220,краснухи – 5 из 236, ВПГ  -  8 из 187 случаев. По всем спорным результатам были проведены повторные исследования при использовании немецких реагентов  Recomline TORCH ScreeningIgG. Результаты показали, что более, чем в 80% случаев полное совпадение было у метода линейного иммуноблоттинга.

Итоговые результаты исследований

По методу ЛИБ результаты показали диагностическую эффективность в 99.4-100 % случаев, тогда как метод ИФА показал точность в 99.1-100 % случаев  выявления антител класса G.

Разночтения в результатах скриннинга специфических антител класса Gпозволяют говорить о более высокой эффективности  метода линейного иммуноблоттинга.

Данные по обнаружению специфических антител класса М к антигенам возбудителей инфекций TORCH-группывыявили также,более высокую эффективность метода ЛИБ (от 98.6% до 100 %) по сравнению с наборами ИФА (от 75 % до 98 %), что доказывает их более точную клиническую информативность.

Таким образом, мы можем сделать вывод о  том, что применение метода линейного иммуноблоттинга для выявлений антител класса Gи М к возбудителям TORCH-группы доказал свою клиническую эффективность и качество исследования, не уступающее зарубежным реагентам.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.