Метод линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M

388

Технология иммуноблоттинга набирает широкое распространение, поскольку данный метод показывает точную и высокую клиническую информативность по сравнению с иммуноферментным анализом (ИФА).

В статье рассмотрены основные положения авторской методики определения антител к основным возбудителям инфекций  TORCH-группы, являющихся частыми причинами младенческой смертности с помощью линейного иммуноблоттинга.

Опасность инфекций TORCH-группы

В стране проводится целый комплекс мер, направленных на снижение показателей младенческой смертности. Так, данные Росстата свидетельствуют о том, что показатели смертности младенцев  в 2014 составили 7,4 на 1000 новорожденных, тогда как в 2013 данные показатели составили 8,2 на 1000 новорожденных детей, что свидетельствует об уменьшении младенческой смертности на 9,8 %.

Существенную роль в причинах младенческой смертности играют так называемые внутриутробные или врожденные инфекции, которые развиваются в результате интранатального заражения плода при вертикальном пути передачи инфекционного возбудителя от матери.

Изучение проблемы внутриутробных инфекций связано не только с такими потерями, но и с тем, что проникновение возбудителей таких инфекций в организм еще не рожденного ребенка приводит к нарушениям образования тканей и органов, формированию в поврежденных тканях фиброзных трансформаций.

Развитие внутриутробных инфекций не всегда проявляется при рождении или в неонатальный период, а проявляющиеся симптомы не имеют специфических признаков, поэтому диагностика инфекций вызывает больную трудность.

Самые распространенные у плодов инфекции были объединены в одну группу и названы термином «TORCH-инфекции», по первым буквам названий основных заболеваний: Тoxoplasmоsis  - токсоплазмоз, Rubella -краснуха, Cytomegalia - Цитомегаловирус, Herpes - Герпес и Оtherinfections – другие инфекции.

К другим инфекциям относятся: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, хламидиоз и другие.

Скудность симптоматики данных заболевания обуславливают необходимость проведения специфичных лабораторных методов, которые направлены на выявление в крови маркеров иммунного ответа и оценку их концентрации.

Чаще всего для выявления инфекций TORCH-группы используют иммуноферментный анализ (ИФА), а также линейный иммуноблоттинг (ЛИБ).

Размещение антигенных линий на стрипах:

Метод линейного иммуноблоттинга для определения антител классов G и M

Описание проведения методики


Технология иммуноблоттинга позволяет оценить присутствие специфичных антител одного или нескольких возбудителей инфекции при проведении одного лабораторного анализа.

Для проведения анализа ЛИБ с целью выявления возбудителей TORCH-инфекций в качестве твердой фазы иммуносорбента используются нитроцеллюлозные мембраны, на которых размещены антигены возбудителей соответствующих инфекций.

Учитывая изученную литературу об иммуногенности и специфичности для человека, были подобраны и очищены естественные (нативные) и рекомбинантные антигены возбудителейTORCH-группы:

  • Естественный антиген токсоплазмоза Гонди и аналог антигена р30;
  • Естественный антиген краснухи;
  • Аналог мозаичного антигена цитомегаловируса, который содержит последовательности белков рр150, рр28, рр52 и gВ.
  • Аналогиантигена вируса простого герпеса

Затем эти антигены были размещены на иммуносорбенте.

Также на иммуносорбенте были помещены антитела к вирусу краснухи согласно стандартам ВОЗ (Anti-RubellaImmunoglobulin, Human NIBSC), иммуноглобулины класса G, а также контрольные линии, на которых содержатся иммуноглобулины человека класса Gи М, для калибровки результатов, а также антигены к данным иммуноглобулинам.

Для оценивания чувствительности методики были изучены контрольные сыворотки, которые содержали (в количестве 94) и не содержали (в количестве 47) антитела к антигенам TORCH-инфекций.

К этим контрольным сывороткам относились: контрольная панель сывороток «Рубелла», «ЦМВ-IGM», стандарт «АТ-G(+/-) T. Gondii», стандарт «АТ-G(+/-) ВПГ-1,2» и другие.

Исследование показало, что на панелях контрольных сывороток получено полное совпадение результатов выявления специфичных антител с характеристиками каждой панели. Это доказывает 100% чувствительность и эффективность данной методики.

Данные клинических исследований

Новая методика была изучена при исследовании более 1000 сывороток крови, которые были получены у беременных женщин и других людей, которые проходили обычное обследование в диагностическом  исследовании.

В качестве реагента использовались соответствующие наборы для выявления антител к антигенам всех возбудителей TORCH-инфекций методом ИФА и методом линейного иммуноблоттинга, затем было проведено сравнение по показателям обоих методов.

Сначала были определены специфичные G-антитела к антигенам возбудителей TORCH-группы. Данные продемонстрировали наличие расхождений в определении антител Gкласса при выявлении разными методами по 16 образцам крови (токсоплазмоз - 1,19 % случаев, краснуха -1,16 % случаев, ЦМВ 0,31 % случаев, ВПГ – 2,22 % случаев). Было решено провести дополнительное исследование с использованием реагентов немецкого происхождения (Recomline TORCH ScreeningIgG). В результате в 93,75 % случаев  результаты метода линейного иммоноблоттинга и немецкого реагента совпали, что доказывает преимущественную точность метода ЛИБ перед методом ИФА.

В процессе определения антител класса М было получено большее число расхождений в методах. Так, к возбудителю токсоплазмоза расхождение составило 24 случая из 247, ЦМВ – 24 из 220,краснухи – 5 из 236, ВПГ  -  8 из 187 случаев. По всем спорным результатам были проведены повторные исследования при использовании немецких реагентов  Recomline TORCH ScreeningIgG. Результаты показали, что более, чем в 80% случаев полное совпадение было у метода линейного иммуноблоттинга.

Итоговые результаты исследований

По методу ЛИБ результаты показали диагностическую эффективность в 99.4-100 % случаев, тогда как метод ИФА показал точность в 99.1-100 % случаев  выявления антител класса G.

Разночтения в результатах скриннинга специфических антител класса Gпозволяют говорить о более высокой эффективности  метода линейного иммуноблоттинга.

Данные по обнаружению специфических антител класса М к антигенам возбудителей инфекций TORCH-группывыявили также,более высокую эффективность метода ЛИБ (от 98.6% до 100 %) по сравнению с наборами ИФА (от 75 % до 98 %), что доказывает их более точную клиническую информативность.

Таким образом, мы можем сделать вывод о  том, что применение метода линейного иммуноблоттинга для выявлений антител класса Gи М к возбудителям TORCH-группы доказал свою клиническую эффективность и качество исследования, не уступающее зарубежным реагентам.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×