Бактериологические исследования: лабораторная диагностика дифтерии

376

Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции проводится специалистами  бактериологических лабораторий лечебно-профилактических организаций на основе специально разработанных методических указаний МУ  4.2.3065-13.

В статье рассмотрены особенности возбудителя дифтерии, его основные формы и методы идентификации.

Общие положения указаний

Исследование проводится с целью  выявления дифтерийной инфекции, а также источников этой инфекции, наблюдения за распространением токсигенных коринебактерий дифтерии.

Лабораторная диагностика проводится с помощью минимального количества тестов в сжатые сроки:

  • До трех суток – получение отрицательного ответа.
  • От трех до четырех суток – получение ответа о выделении возбудителя дифтерии.
  • От четырех до пяти суток – получение ответа о выделении нетоксигенных бактерий дифтерии.

Возбудитель дифтерийной инфекции

Коринебактерии дифтерии (Corynebacterium diphtheriae) являются возбудителем инфекции, они продуцируют дифтерийный токсин.

Нетоксигенные коринебактерии не способствуют развитию дифтерийной инфекции, при выявлении этих штаммов  у больных с подозрением на дифтерию, специалистам следует обратить внимание на правильность процедуры исследования и оценку токсигенных свойств бактерий.

Возможно выявление прочих токсигенных штаммов, таких как Corynebacteriumulcerans, Corynebacterium pseudotuberculosis, Corynebacterium pseudodiphtheriticum которые встречаются крайне редко. Критерием качества работы специалистов-бактериологов является их умение выделять и определять наличие этих микроорганизмов.

Источником развития C. diphthereiae являются питательные среды, которые сбалансированы по своему составу. Для создания такой среды понадобится кровь человека или животного в качестве источника питательных веществ.

Кровяные теллуритовые среды (например, Клауберг II, КТА) являются лучшими селективными диагностическими средами, их применение на сутки снижает срок выдачи окончательного ответа.

Стоимость анализа снижается при использовании двух половин емкости с селективной питательной средой  для посева материала из носа зева от одного обследуемого. Использование же четверти емкости для посева подобных образцов  на плотной питательной среде неэффективно, так  как в большинстве случаев не позволяет провести исследование в установленные сроки.

Комплекс идентификационных тестов

Для идентификации C. Diphthereiae необходимо провести ряд тестов.

Основной тест -  определение у выявленной культуры способности к производству дифтерийного токсина. Определение продукции токсина происходит в первый день после появления признаков роста изолированных колоний на емкости с питательной плотной средой, исключается этап накопления чистой культуры.

Чтобы избежать ошибок при определении токсигенных свойств коринебактерий, изучить данный признак необходимо у 20 и более выросших колоний первичного посева.

Также необходимо изучить токсигенные свойства отдельных колоний, находящихся в изоляции, чтобы не упустить нетоксигенные штаммы C. Diphthereiae, присутствие которых также возможно.

Существует 2 способа  постановки пробы для определения токсигенности:

  1. Проба Фельдмана с бумажными дисками, утвержденная в 1988 году и применяемая для лабораторной диагностики во многих зарубежных лабораториях.
  2. Модифицированная проба Элека с бумажными полосками, используемая в бактериологической практике с 1961 года.

Обязательно проведение биохимического теста, выявляющего цистиназу, уреазу,  расщепление крахмала, глюкозы и сахарозы.

При положительной реакции на уреазную реакцию проводят тест на нитраты.

Проведение других тестов, используемых в зарубежных странах,   увеличивает продолжительность, стоимость и трудоемкость процесса исследований.

Характеристика возбудителя дифтерии

C.diphtheriae имеют размеры от 0.2-0.6 х 1.0-7.0  микрометров, клеточная стенка  их имеет от 3 до 9 слоев.

Стенка токсигенной клетки хорошо дифференцирована, более тонкая по сравнению с клетками нетоксигенными, что определяет их повышенную чувствительность к антибиотикам (пенициллину, эритромицину, тетрациклину).

Микроорганизмы вида C.diphtheriae лучше растут в аэробных условиях, они являются факультативными анаэробами, вследствие чего лучше генерируют энергию, используя молекулярные и органические соединения О2, что необходимо учитывать при определении их ферментативной активности.

Коринебактерии C.diphtheriae являются мезофилами, их рост активен при температуре 36–37ºС.

Устойчивость к внешней среде

  • Низкая температура не убивает дифтерийные микроорганизмы в течение длительного времени, в условиях  высокой температуры они погибают в течение нескольких дней.
  • Устойчивы во внешней среде, сохраняют жизнеспособность в дифтерийной пленке: на различных предметах дверных ручках – до 15 дней; в частицах пыли на предметах, окружающих больного – до 40 дней, в воде выживают до 6 до 20 дней.
  • Коринебактерии дифтерии не проявляют устойчивости к действию обеззараживающих средств и погибают под действием обычных дезсредств в течение 30 минут, при нагревании в  60ºС – в течение 10 минут, кипячение убивает их моментально.

Морфологические свойства культуры C.diphtheriae

Колонии данных микроорганизмов на плотных питательных средах имеют желтую  или серо-белую окраску непрозрачную окраску, приподнятые, округлой формы  в диаметре 1-3 мм.

Консистенция – мягкие, маслянистые, иногда шероховатые, крошатся при прикосновении.

В условиях питательной среды, соответствующей требованиям культивирования, через 24-48 часов колонии C.diphtheriae принимают следующие варианты:

  • Вариант Mitis S-вида  - внешне приподнятые, гладкие, диаметром 1-2 мм.
  • Вариант Gravis S-R-вида – с приподнятым центром, выпуклые, диаметром 2-3 мм.
  • Вариант Intermedius S-вида – мелкие, гладкие, плоские, диаметром 0.5-1 мм.                                               

В условиях дифференциально-диагностических сред, например КТА, эти варианты имеют серо-черную или черную окраску и имеют разные внешние характеристики в зависимости от подвида.

Помимо этого, существуют и другие признаки, позволяющие отличить биологические варианты Mitis, Gravis и Intermedius, например, по росту на бульоне в пробирке:

  • Для  Mitis характерно образование осадка и диффузное помутнение среды.
  • Для Gravis характерен прозрачный бульон с образованием пленки и осадка через 24 часа.
  • Для Intermedius характерно образование гранулярного помутнения, впоследствии гранулы оседают на дне пробирки.

Морфологическое строение клетки

Клетки C.diphtheriae характеризуются разнообразием размеров и форм клетки, чаще всего, ракетки, палочки, булавы и др.

Овоидную форму приобретают токсигенные C.diphtheriae, аналогичную форму чаще всего имеют C. ulcerans и C. Pseudotuberculosis.

По взаимному расположению клетки часто напоминают буквы «X» и «V», они могут располагаться параллельно.

Наличие в клетках зерен волютина определяет внутреннюю исчерченность клеток.

Изучение ферментативной активности

Изучается ферментативная активность коринебактерий путем определения ферментов уреазы, цистиназы, а также по способности расщепления сахарозы, глюкозы и крахмала.

C.diphtheriae образуют фермент цистиназу, не продуцируют уреазу, не разлагают сахарозу, разлагают глюкозу и крахмал.

Клетки способны восстановить соли азотной кислоты в соли азотистой кислоты.

Токсигенность

Микроорганизмы, вызывающие дифтерию, обладают определенными токсигенными свойствами.

За образование токсинов в C.diphtheriae отвечает ген дифтерийного токсина TOX, а также регуляторный ген DtxR. Большинство токсигенных  C.diphtheriae, которые циркулируют в период заболевания дифтерией, имеют мутации в этих генах.

Образование токсинов в варианте  Gravis вызывает тяжелое клиническое проявление дифтерии.

Распространению носителей токсигенных C.diphtheriae и скрытому распространению возбудителя дифтерии, а также образованию новых очагов инфекции способствует несвоевременное выявление токсигенных носителей.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль