Лабораторная диагностика дифтерии

593

В статье мы продолжим рассматривать особенности лабораторной диагностики дифтерии.

Здесь рассматриваются этапы проведения исследования, в частности, мероприятия по взятию и транспортировке материала, основные обязанности сотрудников, осуществляющих проведение исследования, а также последовательность и содержание непосредственно диагностических мероприятий.

Взятие и транспортировка материалов для лабораторной диагностики дифтерии

Взятие материала проходит со следующими особенностями:

  • Для взятия материла необходимо использовать сухие ватные тампоны, имеющие форму капли;
  • Материал из носа и полости ротоглотки берут отдельным тампонами, натощак, через 2 часа после еды.
  • Взятие материала происходит при ярком освещении,  необходимо использовать шпатель, не касаясь тампоном языка и внутренней поверхности щек и зубов.
  • Одним тампоном забирают материал с миндалин, неба и задней полости глотки, при наличии налетов материал нужно брать с границы пораженных и здоровых тканей, слегка надавливая на них тампоном.
  • Другим тампоном, который вводится сначала в один, потом в другой носовой ход, собирают материал из носа. Материал собирается со стенок и перегородки, не касаясь наружной части носа.
  • При прямой ларингоскопии материал необходимо взять непосредственно из гортани.
  • При взятии материала с пораженного участка необходимо предварительно обработать его поверхность стерильной салфеткой, смоченной физраствором, осторожно отодвинув корочки и струпы. После этого с пораженного участка можно взять секрет.

Доставка тампонов в лабораторию должна быть осуществлена в течение 3 часов после сбора материала. В холодное время года исследуемый материал необходимо доставлять в лабораторию в специальных сумах-термосах.

Если материал невозможно доставить в лабораторию в положенные сроки, при проведении исследования в медучреждении полученный материал засевают площадкой, с последующим рассевом на одну чашку Петри с питательной средой, разделенной пополам. После этого материалы необходимо поместить в термостат при температуре в 37°C до следующего утра, после чего они доставляются в лабораторию.

При отсутствии возможности организации посева материала чашечным методом можно засевать материал в пробирки  с транспортной средой  для сохранности и подращивания возбудителей дифтерии. Материал, собранный сухими тампонами и помещенный в пробирки, материал, засеянный в пробирки с транспортной средой, или материал, засеянный чашечным методом, должен иметь маркировку с нумерацией материала, иметь пояснительную документацию.

В сопроводительном письме необходимо указать данные обследуемого лица (ФИО, возраст, адрес), название медучреждения, локализацию взятого материала, а также дату, время и цель исследования.

Организационная работа

  • Работники медицинских учреждений, ответственные за транспортировку и взятие материала при проведении обследования на дифтерию, должны согласовать методику взятия материала, условия его транспортирования, а также возможности применения транспортной среды с врачами-бактериологами.
  • Медработники, осуществляющие сбор и посев материала, должны не реже одного раза в год проходить инструктаж в лаборатории, проводящей исследования на дифтерию.
  • Врачи-бактериологи должны повышать свою квалификацию на специальных курсах профессионального усовершенствования не реже одного раза в три года.

Проведение бактериологического исследования

Исследование проводится последовательно, в течение 4-5 дней.

Первый день исследования

В первый день проходит посев материала. Материал, полученный из зева, носа или других пораженных мест, засевают раздельно на поверхность питательной среды (КТА или Клауберг II), разлитой в чашки Петри (чашечный метод, рисунок 1).

Лабораторная диагностика дифтерии

Посев  от одного больного осуществляется на одну чашку, половина поверхности чашки  используется для посева материала из носа, вторая часть – для посева материала из ротоглотки.

Засеянный материал помещают в термостат для его инкубации при температуре в 37°C.

Второй день исследования

Через 24 часа после посева материала колонии, выросшие на чашках, просматривают визуально или с помощью микроскопа. После этого отбирают чашки с колониями, похожими на дифтерийные, для дальнейшей идентификации их по всем тестам.

Из подозрительных или сомнительных колоний готовят препараты-мазки. Оценка морфологии не позволяет определить видовую принадлежность микроорганизмов, однако позволяет при обнаружении коринеформных клеток предположительно отнести их к роду Corynebacterium, чтобы в дальнейшем проверить их по всем тестам. В случае обнаружения других форм микроорганизмов, например, дрожжей, споровых палочек и кокков, дальнейшее исследование этих колоний прекращается.

В случае обнаружения подозрительных колоний, по морфологическим свойствам похожих на коринебактерии, необходимо через 24 часа  их роста провести изучение их токсигенных свойств. Токсигенные свойства проверяются не менее, чем в двух изолированных колониях, путем посева половины каждой колонии на среду для выявления токсигенности  и среду Пизу, другую – в пробирку с сывороточным агаром для сохранения и роста чистой культуры.

Если невозможно снять половину колонии через 24 часа ее роста для проверки токсигенности и на среду Пизу, то необходимо использовать материал целой колонии. В случае недостаточного количества и маленького размера колоний, которые выросли через 24 часа, необходимо смешать однотипные колонии по типу и размеру в нескольких бляшках и произвести посев в среду Пизу. После этого чашку с пробой на токсигенность и Пизу необходимо поместить в термостат.

Емкости с первичным посевом материала вновь помещаются в термостат на 24 часа, просматривают их на третьи сутки после начала роста (через 48 часов).

Предварительные сведения о наличии C. Diphtheriae могут быть выданы при наличии в материале большого количества однотипных подозрительных колоний на чашке первичного посева.

Третий день исследований

Учитывается результат проб на токсигенность и цистиназу. В случае нахождения линий преципитации, а также при положительной пробе Пизу дается ответ о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии. Чистая культура проверяется с целью изучения биохимических свойств.

Через 48 часов повторно просматриваются чашки первичного посева в микроскопе, ставятся пробы на токсигенность, цистиназу и отсев колоний на скошенный сывороточный агар. Выдается ответ об отсутствии коринебактерий дифтерии.

При обнаружении фермента цистиназы и отсутствии уреазы дается предварительный ответ о выделении микроба дифтерии.

Четвертый день исследования

Проверяются токсигенные свойства культуры, выделенной на третий день исследования, при обнаружении преципитации дается ответ о выделении коринебактерий дифтерии. Определяются и учитываются биохимические свойства культуры, выделенной на второй день исследования. Выдается бактериологический ответ о выделении нетоксигенных бактерий дифтерии.

Пятый день исследования

Выдается бактериологический ответ на наличие токсигенных или нетоксигенных бактерий дифтерии с указанием биологического варианта.

Бактериологическое заключение

Заключить, что выделенная культура является токсигенной C. diphtheriae варианта Gravis или Mitis, позволяют следующие выявленные признаки: наличие линий преципитации, положительный ответ на цистиназу и отрицательный – на уреазу, характерные биохимические, культуральные и морфологические свойства культуры.

Заключить, что выделенная культура является нетоксигенной C. diphtheriae варианта Gravis или Mitis, позволяют следующие признаки: отсутствие линий преципитации, положительный ответ на цистиназу и отрицательный – на уреазу, характерные биохимические, культуральные и морфологические свойства культуры.

Бактериологический ответ бывает отрицательным при выделении ложнодифтерийной палочки Гофмана или других псевдо-культур.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

Обновить руководящий состав медорганизаций

Есть задача – обновить руководящий состав медорганизаций

Федот ТУМУСОВ: журналу «Здравоохранение». «Есть задача – обновить руководящий состав медорганизаций»





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль