Исследование переноса клеток при использовании гематологического самплера

106

Одной из тенденций развития современной клинической лабораторной диагностики является автоматизация выполнения анализов. Это привело к созданию и широкому внедрению автоматических анализаторов, выполняющих различные виды лабораторных исследований (гематологические, биохимические, иммуноферментные и др.). Их использование обеспечило резкий рост производительности труда в клинико-диагностических лабораториях.

Наряду с высокопроизводительными автоматическими анализаторами разрабатываются аппараты для «малой автоматизации» определенных этапов выполнения анализа или подготовки к нему (аликвотирование, окраску, термостатирование, перемешивание и др.). Одним из таких приборов является гематологический самплер для автоматической подготовки мазков крови. Его использование позволяет получать качественные и высоко стандартизованные по характеристикам мазки крови [4]. При этом не требуется очищать вручную распределительные пластины прибора после выполнения каждого мазка крови.

В то же время актуальным является вопрос о возможности переноса клеток крови в процессе такой автоматизированной пробоподготовки и его влиянии на достоверность последующего исследования.

Для оценки возможности переноса клеток между образцами биологических жидкостей при подготовке мазков крови на гематологическом самплере был исследован эффект переноса клеток при эксплуатации гематологического самплера V-Sampler ® (West Medica, Австрия). С этой целью использовали биологические жидкости, клеточный состав которых резко отличается от морфологии клеток крови человека, — образцы эякулята человека и кровь курицы. В настоящем исследовании были проведены две серии экспериментов.

В первой серии проанализировали возможность переноса лейкоцитов человека и его влияние на правильность подсчета лейкоцитарной формулы. Для этого на гематологическом самплере поочередно готовили мазки крови и эякулята. Использовали образцы эякулята с нормальными физико-химическими характеристиками [9]; перед началом опытов образцы разводили физиологическим раствором до конечной концентрации сперматозоидов 7, 5×109/л, что соответствует нормальной концентрации лейкоцитов в крови здоровых людей [2, 3]. Выбор эякулята как модельной жидкости был обусловлен резким различием морфологии сперматозоидов и лейкоцитов, что позволяло легко распознавать их при микроскопии тонкой части мазка. Выполнено 20 циклов исследования. В каждом цикле мазки готовили, попеременно чередуя биологические жидкости: эякулят — кровь — эякулят — кровь — эякулят — кровь. При этом распределительные пластины гематологического самплера не очищали в течение всего цикла подготовки мазков. Вероятность переноса клеток оценивали путем анализа присутствия сперматозоидов в мазках крови (n = 60).

Во второй серии исследований оценивали возможность переноса эритроцитов между образцами крови. Для этого использовали образцы крови человека и курицы. Выбор данных биологических жидкостей был обусловлен тем, что содержание эритроцитов в крови человека и крови курицы примерно одинаково, но при этом они легко различаются по морфологическим признакам [7, 8]. Эритроциты курицы имеют ядра, что позволяет легко их идентифицировать и обнаружить присутствие даже единичных куриных эритроцитов в мазке крови человека. Выполнено 20 циклов исследования. В каждом цикле мазки готовили, попеременно чередуя биологические жидкости: кровь курицы — кровь человека — кровь курицы — кровь человека — кровь курицы — кровь человека. При этом распределительные пластины гематологического самплера не очищались в течение всего цикла подготовки мазков. Перенос клеток оценивали по присутствию куриных эритроцитов в мазках крови человека (n = 60).

Для анализа присутствия в мазках крови человека сперматозоидов или куриных эритроцитов использовали систему для автоматического анализа мазков крови человека. Преаналитический этап подготовки стеклопрепаратов стандартизировали с учетом ранее разработанных рекомендаций [5].

Для выявления переноса лейкоцитов систему для автоматического анализа мазков крови настраивали на автоматический сбор изображений 1 тыс. лейкоцитов. После окончания работы комплекса анализировали галереи изображений собранных клеток на присутствие сперматозоидов, которые система расценивала как ядросодержащую клетку, но из-за резких отличий морфологии от лейкоцита помещала в галерею артефактов. Оценивали абсолютное количество собранных сперматозоидов, а также их относительное содержание на 1 тыс. лейкоцитов.

Для оценки переноса эритроцитов между образцами крови анализировали присутствие куриных эритроцитов в мазках крови человека. Для этого систему для автоматического анализа мазков крови настраивали на автоматический сбор изображений 10 тыс. эритроцитов, что примерно соответствует количеству клеток в 50 полей зрения в тонкой части мазка крови под иммерсионным объективом (x 900-1000). После окончания работы системы анализировали галереи собранных клеток ( в т. ч. и галереи эритроцитов с включениями и галереи артефактов) на присутствие ядросодержащих эритроцитов. Оценивали абсолютное количество собранных куриных эритроцитов, а также их относительное содержание на 10 тыс. эритроцитов.

Полученные результаты обрабатывали статистически с расчетом показателей описательной статистики: среднего арифметического и его стандартного отклонения, медианы и диапазона 10-90% процентиль, учитывая отсутствие нормального распределения полученных результатов (оценивалось по критерию Шапиро — Уилкса).

В первой серии экспериментов при оценке переноса лейкоцитов между различными препаратами, изготовленными на гематологическом самплере, нами не обнаружен заметный и клинически значимый перенос сперматозоидов в мазки крови человека. При анализе 60 мазков крови лишь в единственном стеклопрепарате нами был обнаружен единичный сперматозоид. Учитывая общее количество проанализированных лейкоцитов, частота переноса лейкоцитов между препаратами составила 1/60000.

Таким образом, при подсчете лейкоцитарной формулы на 100 клеток частота обнаружения в мазке крови лейкоцита, который мог быть перенесен в процессе использования гематологического самплера, составляет менее 0, 002 и не может исказить результаты подсчета лейкоцитарной формулы.

Частота переноса эритроцитов гематологическим самплером оценивалась во второй серии экспериментов (рис. 1).

Исследование переноса клеток при использовании гематологического самплераРис. 1. Количество куриных эритроцитов в мазках периферической крови человека, приготовленных на автоматическом самплере (куриные эритроциты/10000 эритроцитов человека)

Среднее содержание куриных эритроцитов составило 0, 42 ± 0, 74 на 10 тыс. проанализированных эритроцитов. При этом в 42 препаратах (70% от 60) куриные эритроциты не были обнаружены, в 13 (22% от 60) было выявлено лишь по одному куриному эритроциту, в оставшихся 5 случаях было обнаружено либо 2 (5%), либо 3 (3%) куриных эритроцита. При статистической обработке полученных результатов медиана количества куриных эритроцитов в мазках крови человека составила 0 на 10 тыс., а интервал 10-90% перцентиль составил 0-1 на 10 тыс. эритроцитов. Учитывая общее количество проанализированных клеток и количество среди них куриных эритроцитов, частота переноса эритроцитов между образцами крови составила 32/600000. Таким образом, при анализе 1 тыс. эритроцитов частота обнаружения в мазке крови эритроцита, который мог быть перенесен в процессе использования гематологического самплера, составляет менее 0, 053.

По данным литературы [4, 7], клинически значимым изменением морфологии эритроцитов, позволяющим сделать заключение о наличии анизоцитоза и пойкилоцитоза, является появление в мазке крови не менее 30% эритроцитов с аномальным диаметром и более 10% клеток с измененной формой. Таким образом, присутствие в мазках крови, приготовленных на автоматическом самплере, единичных эритроцитов, которые могут быть перенесены из предыдущего образца крови, не приведет к искажению результатов.

Отсутствие переноса клеток крови на рабочую поверхность предметных стекол обусловлено тем, что, несмотря на наличие на боковых поверхностях распределительных пластин остатков крови (рис. 2), их рабочая поверхность полностью очищается в процессе приготовления мазков. Это подтверждается как визуальной оценкой поверхности распределительной пластины, участвующей в подготовке мазка (рис. 3), так и микроскопией поверхности предметного стекла. В области после окончания метелочки (щеточки) клетки практически не обнаруживаются.

Исследование переноса клеток при использовании гематологического самплераРис. 2. Внешний вид распределительных пластин автоматического самплера после цикла выполнения мазков крови.Исследование переноса клеток при использовании гематологического самплераРис. 3. Внешний вид рабочей поверхности распределительной пластины после цикла выполнения мазков крови (стрелка демонстрирует эффект самоочищения распределительной пластины в процессе подготовки мазка крови)

Таким образом, использование гематологических самплеров не сопровождается переносом клеток между образцами крови и обеспечивает подготовку качественных мазков крови независимо от мануальных навыков сотрудников лаборатории.

Список использованной литературы:

1. Кишкун А. А. Современные технологии повышения качества и эффективности клинической лабораторной диагностики. М.: РАМЛД, 2005. 528 с. 2. Клиническое руководство по лабораторным тестам / Под ред. Н.У. Тица. ЮНИМЕД-пресс, 2003. 960 с. 3. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В. В. Лабораторная гематология. М.: Триада, 2006. 223 с. 4. Соснин Д.Ю., Ненашева О. Ю. Автоматизация преаналитического этапа гематологических исследований // Справочник заведующего КДЛ. 2012. №  12. С. 35-41. 5. Соснин Д.Ю., Ненашева О.Ю., Фалков Б.Ф., Трушева Л. А. Влияние подготовки мазка крови на эффективность цифровой системы аналитического анализа крови Vision Hema // Клиническая лабораторная диагностика. 2013. № 4. С. 17-20. 6. Bain Barbara J. A Beginners Guide to Blood Cells. 2nd ed. 121 p. 7. Haile Y., Chainie M. Comparative Aspects of the Clinical hematology of Birds: A Review // British Journal of Poultry Sciences. 2014. Vol. 3. P. 88-95. 8. Martinho F. Blood transfusion in birds // Revista Lusofona de Ciencia e Medicina Veterinaria. 2012. Vol. 5. P. 21-30. 9. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5th ed. WHO, 2010. P. 286.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×