Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса

328

Актуальной на сегодняшний день остается проблема поиска специфических и быстрых методов для диагностики сепсиса и бактериальных инфекций.

Наиболее ранним показателем развития иммунного ответа на бактериальную инфекцию является увеличение относительного числа нейтрофилов и плотности экспрессии маркера.

Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса представляет для клиницистов значительную сложность, т.к. проявление клинических симптомов и большинство используемых лабораторных показателей является неспецифичным.

В статье приведены результаты исследования основных показателей инфекций и сепсиса у здоровых людей, у лиц, которые заражены вирусной и тяжелой инфекцией, а также людей, у которых присутствует сепсис, вызванный разными бактериями и грибами.

Большое значение в материале придается использованию маркера nCD64, который обладает значительной быстротой и специфичностью реакции.

Определение экспрессии нейтрофилами CD64

Основными клетками, которые реализуют ответ на инфекцию, являются моноциты, нейтрофилы, макрофаги и эндотелиоциты. Они принимают активное участие в распознавании антигена,  синтезируют очаги воспаления для локализации очага заражения и запуска адаптивного иммунного ответа, фазой которого является продукция антител.

Реакция рецепторов к иммуноглобулинам позволяет моноцитам и макрофагам участвовать в фагоцитозе опсонизированных иммунноглобулинами бактериальных антигенов.

CD64 является высокоаффинным рецептором к IgG, который легко задерживается на поверхности эозинофилов и моноцитов периферической крови. Нейтрофилы периферической крови практически не выявляют CD64, тогда как в костном мозге он является одним из самых ранних маркеров клеток грануло-моноцитарного ростка.

По мере созревания клеток-нейтрофилов, экспрессия CD64 снижается, что показано на рисунке ниже.

Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса

Далее показано, каким образом происходить распределение клеток гранулоцитарного ростка, который получен в результате многоцветного анализа лейкоцитов в периферической крови больного с выявленным сепсисом.

Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса

В течение 15 минут после взаимодействия CD64, нейтрофилов и активированного эндотелия, а также продуктов расщепления компонентов комплемента происходит повышение их экспрессии. Некоторые цитокины (IFNgamma, GM-CSF, IL-8, IL-12) также провоцируют экспрессию.

В ряде научных работ предложен метод экспрессии нейтрофилами CD64 для раннего выявления сепсиса и бактериальной инфекции. Установлено, что чувствительность метода составляет 76%, специфичность – 85%.

Ряд авторов считает, что существенно улучшит раннюю диагностику сепсиса включение в единую панель nCD64, триггерного рецептора и прокальцитонина, которые в комплексе покажут наиболее точный и специфичный результат.

 Варианты использования методики

В лабораторных условиях возможно определить относительное количество CD64 нейтрофилов, а также плотность экспрессии маркера.

Определение величины средней интенсивности флуоресценции положительного пика является не самым удобным методом оценки плотности экспрессии маркера, поскольку на практике стандартизация межлабораторных результатов может стать невыполнимой задачей для специалистов.

Чтобы стандартизировать метод, был создан набор реагентов, который включает в себя специальные частицы с определенным числом молекул флуорохромов. Такой набор позволяет оценить плотность экспрессии маркера по расчетному индексу, который учитывает среднюю интенсивность флуоресценции пика клеток, связавшихся с антителами к CD64, и среднюю интенсивность флуоресценции частиц.

Такой подход приводит к повышению себестоимость исследования, что не позволит использовать его для отслеживания состояния больных с сепсисом и тяжелыми бактериальными инфекциями.

В приведенном в статье исследовании предложено оценивать плотность экспрессии CD64 по индексу, который учитывает среднюю интенсивность флуоресценции пика клеток, связанных с антителами к CD64, а также среднюю интенсивность пика негативного контроля.

Следует отметить, что способ определения nCD64 влияет на специфичность и чувствительность теста, что связывается также с различной природой возбудителей бактериальных инфекций.

Вводные данные исследования

Далее приведено исследование крови больных отделения реанимации и интенсивной терапии, взятие которой осуществлялось от 1 до 15 раз в зависимости от того, как долго больной пребывал в отделении.

У больных с сепсисом и тяжелыми бактериальными инфекциями кровь отбиралась каждый день, у больных с другими формами бактериальных инфекций – один раз в 3 дня.

Однократно были взяты образцы крови у здоровых лиц и у пациентов с хроническим гепатитом Б.

В таблице 1 представлены начальные показатели: количество обследуемых пациентов, а также число наблюдений за пациентами.

Заболевание/Состояние

Число пациентов

Число наблюдений

Сепсис

25

81

Бактериальная инфекция

27

78

Хронический гепатит С

7

7

Условно здоровые лица

10

10

Всего

69

176

Таблица 1

Приведем подробности исследования:

  • всего было обследовано 69 человек, средний возраст которых составил 58 ± 14 лет;
  • 25 человек вошли в группу больных сепсисом;
  • у 27 пациентов диагностирована бактериальная инфекция, среди которых у 11  человек – пневмония, у 8 человек – выявлен бактериальный перитонит, у 3 человек - тяжелые травмы после ДТП, у 5 человек – инфекция почек и мочевого пузыря;
  • для формирования группы сравнения были обследованы 7 человек с  хроническим активным гепатитом С, для определения нормальных значений nCD64 - обследовано 10 условно здоровых людей.

Ход исследования

Далее у пациентов с сепсисом и бактериальными инфекциями был проведен посев материала с использованием стандартных методов: кровь засевали в две пары флаконов анализатора Bact/Alert 3D (БиоМерье, Франция), инкубировали в анализаторе; биологический материал из других локусов засевали на питательные среды. Все процедуры соответствовали стандартным операционным процедурам, утвержденным приказом Минздрава СССР № 535 от 22.04.1985 года, а также инструкциям к питательным средам.

Выявленные микроорганизмы были затем идентифицированы с использованием бактериологического анализатора VITEK2, чувствительность к антибактериальным препаратам была определена с использованием специальных карт.

На проточном цитофлуориметре определили относительное количество CD64 нейтрофилов с использованием антител.

Кровь брали из локтевой зоны, ЭДТА использовался в качестве антикоагулянта.

Далее оценивалась экспрессия CD64 на нейтрофилах с использованием расчетного индекса, который можно определить как частное от деления средней интенсивности флуоресценции (MFI) нейтрофилов после связывания с моноклональными антителами к CD64 на среднюю интенсивность флуоресценции негативного контроля.

Обработка результатов проводилась с помощью специального программного обеспечения, расчет взаимосвязей проводился с использованием непараметрического корреляционного анализа по Спирмену.

Критерий Манна-Уитни был основой для сравнения групп.

В таблице 2 представлены результаты исследования относительного числа CD64 нейтрофилов, а также плотности экспрессии маркера в группах обследуемых пациентов, рассмотренных выше.

Диагноз

CD64 нейтрофилы (%), среднее ± ошибка среднего

Плотность экспрессии CD64 (расчетный индекс), среднее ± ошибка среднего

Сепсис

82,9 ± 17,8 1,2

6,3 ± 3,3 1,2

Бактериальная инфекция

67,0 ± 19,2 3,4

3,8 ± 1,8 3,4

Вирусный гепатит С

19,9 ± 15,1 2,3,5

1,4 ± 0,3 2,3

Условно здоровые лица

8,0 ± 0,95 1,4,5

1,1 ± 0,04 1,4

Таблица 2

В таблице 3 представлены результаты исследования экспрессии маркера и больных с сепсисом, который вызван грамотрицательными, грамположительными бактериями и грибами рода Candida.

Диагноз

CD64 нейтрофилы (%) среднее ± ошибка среднего

Плотность экспрессии CD64 (расчетный индекс) среднее ± ошибка среднего

Грамотрицательный сепсис

95,8 ± 0,831

8,5 ± 0,81

Грамположительный сепсис

55,2 ± 4,0 1,2

2,7 ± 0,2 1,2

Кандидозный сепсис

85,1 ± 4,7 2

5,6 ± 0,7 2

Таблица 3

Полученные результаты позволяют нам сделать следующие выводы:

  • определение nCD64 является специфичным и очень чувствительным методом для диагностики бактериальных и вирусных инфекций при пороговом значении CD64 нейтрофилов более 50%;
  • при определении результатов необходимо учитывать сопутствующие факторы (повышенная проницаемость стенок кишечника, воспаления в кишечнике), которые могут вызвать ложные результаты;
  • активация клеток врожденного иммунитета полисахаридами клеточных клеток грибов рода Candida и грамотрицательных бактерий приводит к видимому повышению количества CD64 и плотности экспрессии маркера с соответствующим видом сепсиса. О том, что грамположительные бактерии в наименьшей степени стимулируют повышение nCD64 говорилось неоднократно в других исследованиях;
  • иммунопатогенез грамположительного сепсиса, который связан с белковой природой бактериальных антигенов, делает нецелесообразным использование CD64 на нейтрофилах  и других общепринятых методов, основанных на выявлении    ЛПС-индуцированных реакций. Поэтому поиск соответствующих маркеров необходимо осуществлять среди показателей измененной активности адаптивного иммунитета.


Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль