Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса

372

Актуальной на сегодняшний день остается проблема поиска специфических и быстрых методов для диагностики сепсиса и бактериальных инфекций.

Наиболее ранним показателем развития иммунного ответа на бактериальную инфекцию является увеличение относительного числа нейтрофилов и плотности экспрессии маркера.

Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса представляет для клиницистов значительную сложность, т.к. проявление клинических симптомов и большинство используемых лабораторных показателей является неспецифичным.

В статье приведены результаты исследования основных показателей инфекций и сепсиса у здоровых людей, у лиц, которые заражены вирусной и тяжелой инфекцией, а также людей, у которых присутствует сепсис, вызванный разными бактериями и грибами.

Большое значение в материале придается использованию маркера nCD64, который обладает значительной быстротой и специфичностью реакции.

Определение экспрессии нейтрофилами CD64

Основными клетками, которые реализуют ответ на инфекцию, являются моноциты, нейтрофилы, макрофаги и эндотелиоциты. Они принимают активное участие в распознавании антигена,  синтезируют очаги воспаления для локализации очага заражения и запуска адаптивного иммунного ответа, фазой которого является продукция антител.

Реакция рецепторов к иммуноглобулинам позволяет моноцитам и макрофагам участвовать в фагоцитозе опсонизированных иммунноглобулинами бактериальных антигенов.

CD64 является высокоаффинным рецептором к IgG, который легко задерживается на поверхности эозинофилов и моноцитов периферической крови. Нейтрофилы периферической крови практически не выявляют CD64, тогда как в костном мозге он является одним из самых ранних маркеров клеток грануло-моноцитарного ростка.

По мере созревания клеток-нейтрофилов, экспрессия CD64 снижается, что показано на рисунке ниже.

Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса

Далее показано, каким образом происходить распределение клеток гранулоцитарного ростка, который получен в результате многоцветного анализа лейкоцитов в периферической крови больного с выявленным сепсисом.

Диагностика бактериальных инфекций и сепсиса

В течение 15 минут после взаимодействия CD64, нейтрофилов и активированного эндотелия, а также продуктов расщепления компонентов комплемента происходит повышение их экспрессии. Некоторые цитокины (IFNgamma, GM-CSF, IL-8, IL-12) также провоцируют экспрессию.

В ряде научных работ предложен метод экспрессии нейтрофилами CD64 для раннего выявления сепсиса и бактериальной инфекции. Установлено, что чувствительность метода составляет 76%, специфичность – 85%.

Ряд авторов считает, что существенно улучшит раннюю диагностику сепсиса включение в единую панель nCD64, триггерного рецептора и прокальцитонина, которые в комплексе покажут наиболее точный и специфичный результат.

 Варианты использования методики

В лабораторных условиях возможно определить относительное количество CD64 нейтрофилов, а также плотность экспрессии маркера.

Определение величины средней интенсивности флуоресценции положительного пика является не самым удобным методом оценки плотности экспрессии маркера, поскольку на практике стандартизация межлабораторных результатов может стать невыполнимой задачей для специалистов.

Чтобы стандартизировать метод, был создан набор реагентов, который включает в себя специальные частицы с определенным числом молекул флуорохромов. Такой набор позволяет оценить плотность экспрессии маркера по расчетному индексу, который учитывает среднюю интенсивность флуоресценции пика клеток, связавшихся с антителами к CD64, и среднюю интенсивность флуоресценции частиц.

Такой подход приводит к повышению себестоимость исследования, что не позволит использовать его для отслеживания состояния больных с сепсисом и тяжелыми бактериальными инфекциями.

В приведенном в статье исследовании предложено оценивать плотность экспрессии CD64 по индексу, который учитывает среднюю интенсивность флуоресценции пика клеток, связанных с антителами к CD64, а также среднюю интенсивность пика негативного контроля.

Следует отметить, что способ определения nCD64 влияет на специфичность и чувствительность теста, что связывается также с различной природой возбудителей бактериальных инфекций.

Вводные данные исследования

Далее приведено исследование крови больных отделения реанимации и интенсивной терапии, взятие которой осуществлялось от 1 до 15 раз в зависимости от того, как долго больной пребывал в отделении.

У больных с сепсисом и тяжелыми бактериальными инфекциями кровь отбиралась каждый день, у больных с другими формами бактериальных инфекций – один раз в 3 дня.

Однократно были взяты образцы крови у здоровых лиц и у пациентов с хроническим гепатитом Б.

В таблице 1 представлены начальные показатели: количество обследуемых пациентов, а также число наблюдений за пациентами.

Заболевание/Состояние

Число пациентов

Число наблюдений

Сепсис

25

81

Бактериальная инфекция

27

78

Хронический гепатит С

7

7

Условно здоровые лица

10

10

Всего

69

176

Таблица 1

Приведем подробности исследования:

  • всего было обследовано 69 человек, средний возраст которых составил 58 ± 14 лет;
  • 25 человек вошли в группу больных сепсисом;
  • у 27 пациентов диагностирована бактериальная инфекция, среди которых у 11  человек – пневмония, у 8 человек – выявлен бактериальный перитонит, у 3 человек - тяжелые травмы после ДТП, у 5 человек – инфекция почек и мочевого пузыря;
  • для формирования группы сравнения были обследованы 7 человек с  хроническим активным гепатитом С, для определения нормальных значений nCD64 - обследовано 10 условно здоровых людей.

Ход исследования

Далее у пациентов с сепсисом и бактериальными инфекциями был проведен посев материала с использованием стандартных методов: кровь засевали в две пары флаконов анализатора Bact/Alert 3D (БиоМерье, Франция), инкубировали в анализаторе; биологический материал из других локусов засевали на питательные среды. Все процедуры соответствовали стандартным операционным процедурам, утвержденным приказом Минздрава СССР № 535 от 22.04.1985 года, а также инструкциям к питательным средам.

Выявленные микроорганизмы были затем идентифицированы с использованием бактериологического анализатора VITEK2, чувствительность к антибактериальным препаратам была определена с использованием специальных карт.

На проточном цитофлуориметре определили относительное количество CD64 нейтрофилов с использованием антител.

Кровь брали из локтевой зоны, ЭДТА использовался в качестве антикоагулянта.

Далее оценивалась экспрессия CD64 на нейтрофилах с использованием расчетного индекса, который можно определить как частное от деления средней интенсивности флуоресценции (MFI) нейтрофилов после связывания с моноклональными антителами к CD64 на среднюю интенсивность флуоресценции негативного контроля.

Обработка результатов проводилась с помощью специального программного обеспечения, расчет взаимосвязей проводился с использованием непараметрического корреляционного анализа по Спирмену.

Критерий Манна-Уитни был основой для сравнения групп.

В таблице 2 представлены результаты исследования относительного числа CD64 нейтрофилов, а также плотности экспрессии маркера в группах обследуемых пациентов, рассмотренных выше.

Диагноз

CD64 нейтрофилы (%), среднее ± ошибка среднего

Плотность экспрессии CD64 (расчетный индекс), среднее ± ошибка среднего

Сепсис

82,9 ± 17,8 1,2

6,3 ± 3,3 1,2

Бактериальная инфекция

67,0 ± 19,2 3,4

3,8 ± 1,8 3,4

Вирусный гепатит С

19,9 ± 15,1 2,3,5

1,4 ± 0,3 2,3

Условно здоровые лица

8,0 ± 0,95 1,4,5

1,1 ± 0,04 1,4

Таблица 2

В таблице 3 представлены результаты исследования экспрессии маркера и больных с сепсисом, который вызван грамотрицательными, грамположительными бактериями и грибами рода Candida.

Диагноз

CD64 нейтрофилы (%) среднее ± ошибка среднего

Плотность экспрессии CD64 (расчетный индекс) среднее ± ошибка среднего

Грамотрицательный сепсис

95,8 ± 0,831

8,5 ± 0,81

Грамположительный сепсис

55,2 ± 4,0 1,2

2,7 ± 0,2 1,2

Кандидозный сепсис

85,1 ± 4,7 2

5,6 ± 0,7 2

Таблица 3

Полученные результаты позволяют нам сделать следующие выводы:

  • определение nCD64 является специфичным и очень чувствительным методом для диагностики бактериальных и вирусных инфекций при пороговом значении CD64 нейтрофилов более 50%;
  • при определении результатов необходимо учитывать сопутствующие факторы (повышенная проницаемость стенок кишечника, воспаления в кишечнике), которые могут вызвать ложные результаты;
  • активация клеток врожденного иммунитета полисахаридами клеточных клеток грибов рода Candida и грамотрицательных бактерий приводит к видимому повышению количества CD64 и плотности экспрессии маркера с соответствующим видом сепсиса. О том, что грамположительные бактерии в наименьшей степени стимулируют повышение nCD64 говорилось неоднократно в других исследованиях;
  • иммунопатогенез грамположительного сепсиса, который связан с белковой природой бактериальных антигенов, делает нецелесообразным использование CD64 на нейтрофилах  и других общепринятых методов, основанных на выявлении    ЛПС-индуцированных реакций. Поэтому поиск соответствующих маркеров необходимо осуществлять среди показателей измененной активности адаптивного иммунитета.
Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×