Волчаночный антикоагулянт: реагенты для определения

715

На сегодняшний день в клинических исследованиях одну из серьезных проблем представляет поиск стандартизированных способов, которые позволяют провести качественное определение волчаночного антикоагулянта.

В связи с этим, международными сообществами исследователей было принято обновленное руководство по изучению волчаночного антикоагулянта, в котором содержится анализ популярных реагентов и их характеристик, а также протоколов проведения исследований.

Также было установлено, что большинство реагентов для определения волчаночного антикоагулянта не соответствуют международным требованиям.

Проблема определения волчаночного антикоагулянта

Одной из частых причин возникновения венозных и артериальных тромбозов является антифосфолипидный синдром. Данное отклонение может быть выявлено по клиническим симптомам (не вынашивание плода, тромбозы) или  по лабораторным критериям:

  • наличие антител к кардиолипину;
  • наличие антител к β2-гликопротеину I;
  • наличие волчаночного антикоагулянта.

Волчаночный антикоагулянт является клоттинговым феноменом и его уровень нельзя определить по концентрации конкретных антител. Поэтому выявление феномена представляет серьезную проблему.

Многие исследователи отмечают, что ни один из тестов, который используется в лабораториях на сегодняшний день, не имеет достаточную аналитическую чувствительность для выявления всех видов антител, характеризующих присутствие волчаночного антикоагулянта.

Читайте также в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Исследование соответствия реагентов международным требованиям

Международное сообщество, изучающее гемостаз и тромбозы (ISTH) разработало новое руководство для определения волчаночного антикоагулянта, целью которого стало обновление критериев выявления волчаночного антикоагулянта.

Далее представлен анализ характеристик основных реагентов, используемых в  отечественных исследованиях, а также протоколов исследования волчаночного антикоагулянта, которые предложены международными исследователями.

В начала исследования были выявлены наиболее популярные наборы реагентов для выявления волчаночного антикоагулянта, были изучены инструкции к ним.

В исследовании приняли участие следующие реагенты отечественных и зарубежных производителей:

  • Instrumentation Laboratory, США;
  • Siemens, Германия;
  • Helena Biosciences Europe, Великобритания;
  • Stago, Франция;
  • Technoclot, Австрия;
  • Trinity Biotech, Ирландия;
  • «Технология-Стандарт», Россия;
  • «Ренам», Россия.

Для того чтобы оценить, насколько соблюдены требования к проведению предварительного, аналитического и постаналитического этапа исследования по руководству ISTH, была рассмотрена информация о проведении исследования, изложенная в инструкциях к указанным наборам реагентов.

В таблице приведена итоговая информация, которая говорит о том, что ни один из изученных материалов производителей не соответствует в полной мере руководству ISTH в плане обеспечения преаналитического этапа.

Актуальные рекомендации ISTH по определению волчаночного антикоагулянта

Распределение технологий фирм-производителей в зависимости от их соответствия рекомендациям ISTH по определению волчаночного антикоагулянта

соответствуют

не соответствуют

Преаналитический этап

Концентрация цитрата натрия: 0,109 М (3,2%); в соотношении 9: 1

3

5

Центрифугирование: первичное — 2000 g, 15 мин; повторное — 2500 g, 10 мин

2

6

Замораживание плазмы (-70 °С), если ее исследование проводится не сразу

2

6

Получение пула нормальной плазмы с количеством тромбоцитов <10⁷/мл и с активностью всех факторов свертывания, практически равной 100% (двойное центрифугирование плазмы здоровых доноров)

3

5

Аналитический этап

Используемые тесты: АЧТВ, чувствительный к ВА, с кварцевым активатором; время свертывания с ядом гадюки Рассела (dRVVT)

2

6

Количество скрининговых тестов — 2

2

6

Количество подтверждающих тестов — 2

2

6

Использование фосфолипидов в двуслойной или гексагональной (II) фазах

2

6

Использование кварцевого активатора свертывания в тесте АЧТВ

2

6

Проведение теста со смешением без предварительной инкубации при 37 °С

3

5

Наличие адаптации для автоматического коагулометра

7

1

Постаналитический этап

Рекомендации расчета нормализованного отношения (НО): НО = скрининговое отношение / подтверждающее отношение

7

1

Границы положительных и отрицательных значений: НО >2,0 — ВА резко положительный; НО 1,5–2,0 — ВА положительный; НО 1,2–1,5 — ВА слабоположительный; НО < 1,2 — ВА отсутствует

7

1

Рекомендации расчета индекса циркулирующего антикоагулянта (ИЦА): ИЦА = ВСсмеси — ВСпнп /ВСб x 100%

0

8

Выделим подробности полученных результатов.

  • Требование об использовании пробирок с концентрацией 3,2% цитрата натрия содержалось в инструкциях лишь трех производителей.

Инструкции других производителей позволяли использовать в ходе исследования цитрат натрия иной концентрации, либо вообще не предусматривали его использование.

Это является грубым нарушением рекомендаций, поскольку использование пробирок для взятия крови с неверной концентрацией цитрата натрия может привести к увеличению продолжительности теста АЧТВ, который является основой для определения волчаночного антикоагулянта.

  • Лишь два производителя набора реагентов говорили в инструкциях о режиме центрифуги, который ISTH считается наиболее подходящим для получения плазмы, бедной тромбоцитами. Другие производители рекомендовали проведение однократное центрифугирование либо двойное центрифугирование в иным временем и ускорением.

Несоблюдение требований о режиме центрифугирования может стать причиной повышенного содержания тромбоцитов в  биоматериале. Именно тромбоциты являются источником фосфолипидов и могут маскировать реальный эффект проявления волчаночного антикоагулянта.

Если при режиме центрифугирования применить ускорение свыше 2500 g, тромбоциты разрушатся в большой вероятностью, в результате результаты тесты будут ложноотрицательными.

  • Международные рекомендации ISTH говорят о том, что материал после проведения центрифугирования должен быть сразу же исследования. Если же исследование плазмы откладывается, биоматериал нужно немедленно заморозить при температуре -70 °С. Об этом сказано в инструкциях лишь двух производителей, в остальных наборах сказано о заморозке материала при температуре -20 °С.

Несоблюдение температурного режима хранения плазмы опасно тем, что результаты анализа будут гарантированно искажены из-за разрушения факторов свертывания и из-за холодовой активации.

  • Четыре производителя рекомендуют использовать один активатор свертывания, более двух – два производителя. В частности, предлагается использовать такие активаторы, не указанные в руководстве ISTH, как: лебетокс (коагулазу яда гюрзы) в качестве аналога яда гадюки Рассела, каолин, эллаговую кислоту и тромбопластин.

Определение волчаночного антикоагулянтаВ то же время, ISTH рекомендует использовать два исследования с использованием активаторов свертывания: определение АЧТВ с использованием кварцевого активаторов, который чувствителен к волчаночному антикоагулянту  и время свертывания плазмы крови с использованием яда гадюки Рассела.

Другие активаторы нежелательны для  использования по той причине, что чувствительность волчаночного антикоагулянта исследована еще недостаточно, многие активаторы показали свою недостаточную чувствительность.

  • После проведения скрининговых тестов, международные рекомендации предписывают проводить тест со смешением. Для этого в плазму больного добавляют донорскую плазму, которая бедна тромбоцитами в соотношении 1:1, после чего повторно проводится скрининг.

Смешение является необходимым  этапом, который определяет причины повышения значения клоттинговых тестов – связаны ли они с присутствием волчаночного антикоагулянта или с дефицитом факторов свертывания.

Если время не укорочено – в материале присутствует волчаночный антикоагулянт.

Однако, не все производители реагентов предусматривают проведение тестов со смешением – лишь 7 из 8.

  • Рекомендации ISTH не предусматривают использование фосфолипидов, которые получены из лизата тромбоцитов при их оттаивании или замораживании из-за того, что ы итоге будут видны различия в содержании фосфолипидов между партиями реагента. Однако, шесть производителей реагентов предусматривают использование тромбоцитина или лизата тромбоцитов.

Кроме того, была установлена следующая значимая информация :

  1. на российской рынке представлены наборы реагентов для определения волчаночного антикоагулянта разной степени соответствия требованиям ISTH;
  2. наборы лишь двух производителей соответствуют протоколу рекомендаций по проведению лабораторного этапа;
  3. часто реагенты выпускаются не в составе единого набора, а  представлены отдельными компонентами, поэтому исследователь вынужден самостоятельно формировать набор для определения волчаночного антикоагулянта. Такой подход не гарантирует достаточную информированность исследования и соблюдение лабораторно-технологических рекомендаций.

Существуют реагенты, которые производятся в соответствии со стандартами ISTH, но поставляются для закрытых лабораторных систем, которые практически не применяются в России. Поэтому большая часть лабораторий существенно сдержана в возможностях качественной и своевременной диагностики волчаночного антикоагулянта.

Отступление от международных стандартов может стать причиной ложных результатов исследования, по которым будет назначена нецелесообразная терапия.

Это повышает риск развития сосудистых отклонений, из-за которых проявляется антифосфолипидный синдром.



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль