text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Волчаночный антикоагулянт: реагенты для определения

  • 24 августа 2016
  • 869

На сегодняшний день в клинических исследованиях одну из серьезных проблем представляет поиск стандартизированных способов, которые позволяют провести качественное определение волчаночного антикоагулянта.

В связи с этим, международными сообществами исследователей было принято обновленное руководство по изучению волчаночного антикоагулянта, в котором содержится анализ популярных реагентов и их характеристик, а также протоколов проведения исследований.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Также было установлено, что большинство реагентов для определения волчаночного антикоагулянта не соответствуют международным требованиям.

Проблема определения волчаночного антикоагулянта

Одной из частых причин возникновения венозных и артериальных тромбозов является антифосфолипидный синдром. Данное отклонение может быть выявлено по клиническим симптомам (не вынашивание плода, тромбозы) или  по лабораторным критериям:

  • наличие антител к кардиолипину;
  • наличие антител к β2-гликопротеину I;
  • наличие волчаночного антикоагулянта.

Волчаночный антикоагулянт является клоттинговым феноменом и его уровень нельзя определить по концентрации конкретных антител. Поэтому выявление феномена представляет серьезную проблему.

Многие исследователи отмечают, что ни один из тестов, который используется в лабораториях на сегодняшний день, не имеет достаточную аналитическую чувствительность для выявления всех видов антител, характеризующих присутствие волчаночного антикоагулянта.


Исследование соответствия реагентов международным требованиям

Международное сообщество, изучающее гемостаз и тромбозы (ISTH) разработало новое руководство для определения волчаночного антикоагулянта, целью которого стало обновление критериев выявления волчаночного антикоагулянта.

Далее представлен анализ характеристик основных реагентов, используемых в  отечественных исследованиях, а также протоколов исследования волчаночного антикоагулянта, которые предложены международными исследователями.

В начала исследования были выявлены наиболее популярные наборы реагентов для выявления волчаночного антикоагулянта, были изучены инструкции к ним.

В исследовании приняли участие следующие реагенты отечественных и зарубежных производителей:

  • Instrumentation Laboratory, США;
  • Siemens, Германия;
  • Helena Biosciences Europe, Великобритания;
  • Stago, Франция;
  • Technoclot, Австрия;
  • Trinity Biotech, Ирландия;
  • «Технология-Стандарт», Россия;
  • «Ренам», Россия.

Для того чтобы оценить, насколько соблюдены требования к проведению предварительного, аналитического и постаналитического этапа исследования по руководству ISTH, была рассмотрена информация о проведении исследования, изложенная в инструкциях к указанным наборам реагентов.

В таблице приведена итоговая информация, которая говорит о том, что ни один из изученных материалов производителей не соответствует в полной мере руководству ISTH в плане обеспечения преаналитического этапа.

Актуальные рекомендации ISTH по определению волчаночного антикоагулянта

Распределение технологий фирм-производителей в зависимости от их соответствия рекомендациям ISTH по определению волчаночного антикоагулянта

соответствуют

не соответствуют

Преаналитический этап

Концентрация цитрата натрия: 0,109 М (3,2%); в соотношении 9: 1

3

5

Центрифугирование: первичное — 2000 g, 15 мин; повторное — 2500 g, 10 мин

2

6

Замораживание плазмы (-70 °С), если ее исследование проводится не сразу

2

6

Получение пула нормальной плазмы с количеством тромбоцитов <10⁷/мл и с активностью всех факторов свертывания, практически равной 100% (двойное центрифугирование плазмы здоровых доноров)

3

5

Аналитический этап

Используемые тесты: АЧТВ, чувствительный к ВА, с кварцевым активатором; время свертывания с ядом гадюки Рассела (dRVVT)

2

6

Количество скрининговых тестов — 2

2

6

Количество подтверждающих тестов — 2

2

6

Использование фосфолипидов в двуслойной или гексагональной (II) фазах

2

6

Использование кварцевого активатора свертывания в тесте АЧТВ

2

6

Проведение теста со смешением без предварительной инкубации при 37 °С

3

5

Наличие адаптации для автоматического коагулометра

7

1

Постаналитический этап

Рекомендации расчета нормализованного отношения (НО): НО = скрининговое отношение / подтверждающее отношение

7

1

Границы положительных и отрицательных значений: НО >2,0 — ВА резко положительный; НО 1,5–2,0 — ВА положительный; НО 1,2–1,5 — ВА слабоположительный; НО < 1,2 — ВА отсутствует

7

1

Рекомендации расчета индекса циркулирующего антикоагулянта (ИЦА): ИЦА = ВСсмеси — ВСпнп /ВСб x 100%

0

8

Выделим подробности полученных результатов.

  • Требование об использовании пробирок с концентрацией 3,2% цитрата натрия содержалось в инструкциях лишь трех производителей.

Инструкции других производителей позволяли использовать в ходе исследования цитрат натрия иной концентрации, либо вообще не предусматривали его использование.

Это является грубым нарушением рекомендаций, поскольку использование пробирок для взятия крови с неверной концентрацией цитрата натрия может привести к увеличению продолжительности теста АЧТВ, который является основой для определения волчаночного антикоагулянта.

  • Лишь два производителя набора реагентов говорили в инструкциях о режиме центрифуги, который ISTH считается наиболее подходящим для получения плазмы, бедной тромбоцитами. Другие производители рекомендовали проведение однократное центрифугирование либо двойное центрифугирование в иным временем и ускорением.

Несоблюдение требований о режиме центрифугирования может стать причиной повышенного содержания тромбоцитов в  биоматериале. Именно тромбоциты являются источником фосфолипидов и могут маскировать реальный эффект проявления волчаночного антикоагулянта.

Если при режиме центрифугирования применить ускорение свыше 2500 g, тромбоциты разрушатся в большой вероятностью, в результате результаты тесты будут ложноотрицательными.

  • Международные рекомендации ISTH говорят о том, что материал после проведения центрифугирования должен быть сразу же исследования. Если же исследование плазмы откладывается, биоматериал нужно немедленно заморозить при температуре -70 °С. Об этом сказано в инструкциях лишь двух производителей, в остальных наборах сказано о заморозке материала при температуре -20 °С.

Несоблюдение температурного режима хранения плазмы опасно тем, что результаты анализа будут гарантированно искажены из-за разрушения факторов свертывания и из-за холодовой активации.

  • Четыре производителя рекомендуют использовать один активатор свертывания, более двух – два производителя. В частности, предлагается использовать такие активаторы, не указанные в руководстве ISTH, как: лебетокс (коагулазу яда гюрзы) в качестве аналога яда гадюки Рассела, каолин, эллаговую кислоту и тромбопластин.

Определение волчаночного антикоагулянтаВ то же время, ISTH рекомендует использовать два исследования с использованием активаторов свертывания: определение АЧТВ с использованием кварцевого активаторов, который чувствителен к волчаночному антикоагулянту  и время свертывания плазмы крови с использованием яда гадюки Рассела.

Другие активаторы нежелательны для  использования по той причине, что чувствительность волчаночного антикоагулянта исследована еще недостаточно, многие активаторы показали свою недостаточную чувствительность.

  • После проведения скрининговых тестов, международные рекомендации предписывают проводить тест со смешением. Для этого в плазму больного добавляют донорскую плазму, которая бедна тромбоцитами в соотношении 1:1, после чего повторно проводится скрининг.

Смешение является необходимым  этапом, который определяет причины повышения значения клоттинговых тестов – связаны ли они с присутствием волчаночного антикоагулянта или с дефицитом факторов свертывания.

Если время не укорочено – в материале присутствует волчаночный антикоагулянт.

Однако, не все производители реагентов предусматривают проведение тестов со смешением – лишь 7 из 8.

  • Рекомендации ISTH не предусматривают использование фосфолипидов, которые получены из лизата тромбоцитов при их оттаивании или замораживании из-за того, что ы итоге будут видны различия в содержании фосфолипидов между партиями реагента. Однако, шесть производителей реагентов предусматривают использование тромбоцитина или лизата тромбоцитов.

Кроме того, была установлена следующая значимая информация :

  1. на российской рынке представлены наборы реагентов для определения волчаночного антикоагулянта разной степени соответствия требованиям ISTH;
  2. наборы лишь двух производителей соответствуют протоколу рекомендаций по проведению лабораторного этапа;
  3. часто реагенты выпускаются не в составе единого набора, а  представлены отдельными компонентами, поэтому исследователь вынужден самостоятельно формировать набор для определения волчаночного антикоагулянта. Такой подход не гарантирует достаточную информированность исследования и соблюдение лабораторно-технологических рекомендаций.

Существуют реагенты, которые производятся в соответствии со стандартами ISTH, но поставляются для закрытых лабораторных систем, которые практически не применяются в России. Поэтому большая часть лабораторий существенно сдержана в возможностях качественной и своевременной диагностики волчаночного антикоагулянта.

Отступление от международных стандартов может стать причиной ложных результатов исследования, по которым будет назначена нецелесообразная терапия.

Это повышает риск развития сосудистых отклонений, из-за которых проявляется антифосфолипидный синдром.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
×
Гость, Вы выиграли доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»!

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.