Бактериологическая диагностика дифтерийной инфекции

370

Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции проводится при помощи разных питательных сред. Они могут изготавливаться в лаборатории, но существуют и специально разработанные для этих целей коммерческие среды.

В статье приведен бактериологический метод диагностики с использованием питательной среды Коринебакагар. Ее применение позволяет значительно улучить качество диагностики дифтерийной инфекции.

Бактериологический метод диагностики дифтерии

Своевременное выявление дифтерийной инфекции в условиях современной лаборатории позволяет установить точный диагноз и провести специфическую терапию, а также провести прогноз развития эпидемиологической ситуации.

Бактериологический метод является широко распространенным в лабораторной диагностике и  полной мере соответствует профилактическим, диагностическим и эпидемиологическим целям, стоящим перед исследователями.

Основная задача исследования – получить информацию о наличии возбудителя дифтерии в сжатые сроки при исползовании минимального числа лабораторных тестов. При этом средние сроки получения ответа составляют:

  • до трех суток – получение отрицательного ответа;
  • до четырех суток – получение ответа о выделении токсикогенного возбудителя дифтерии;
  • до пяти суток – получение ответа о наличии нетоксикогенного возбудителя болезни или других представителей рода коринебактерий.

Бактериологическая диагностика с использованием питательных сред

Все вновь создаваемые серии питательных сред в обязательном порядке подлежат бактериологическому контролю.

Актуальной проблемой бактериологической диагностики дифтерийной инфекции является применение тех питательных сред, которые могут обеспечить оптимальные условия для выделения и накопления бактерий дифтерии при их минимальном содержании в аналите.

Большое значение имеет качество питательной среды. Оно должно позволять добиться максимального высевания коринебактерий дифтерии из материала, рост колоний должен наблюдаться исследователей уже через сутки после начала исследования.

Для этого условия развития и роста бактерий должны быть подходящими. Качественная питательная среда сохраняет основные биологические и морфологические свойства бактерий, способствует росту подходящей микрофлоры.


Виды питательных сред

Для диагностики дифтерии в клинико-диагностических лабораториях часто используют среды лабораторного приготовления.  Часто это селективные кровяные теллуритовые среды – КлаубергIIи кровяно-теллуритовый агар (КТА).

В основе этих сред – сухой питательный агар или агар на основе панкреатическогогидролизата рыбной муки (ГРМ), АГВ. Также в них добавляют кровь или кровяные добавки, смесь глицерина, теллурит калия.

Для того, чтобы качественно выделить коринебактерии дифтерии, в современной лабораторной практике широко используется питательная среда Коринебакагар от российского производителя. В нее не требуется добавлять кровь или ее заменитель.

Далее мы приведем данные контрольного исследования эффективности питательной среды Коринебакагар (КБА).


Ход контрольного исследования

Для проведения контрольных мероприятий в отношении сред КБА, сывороточного агара и КТА, было использовано несколько штаммов микроорганизмов:

  • C.diphtheriae gravis 665;
  • C.diphtheriae mitis 6765;
  • C.ulcerans 675;
  • C.xerosis 1911;
  • S. aureus Wood-46;
  • S. pyogenes Dick I;
  • тест-штамм C.diphtheriae биовара gravis токсигенный № 665;
  •  тест–штамм St.aureus № 25923.

Результаты проведенного исследования были учтены по определению специфической активности микроорганизмов, в частности, определена чувствительность среды, скорость их роста, выявлены  ингибирующие свойства питательной среды.

После помещения микроорганизмов в питательную среду КБА, первые результаты были получены уже через 20-24 часов.

В частности, при визуальном осмотре чашек, а также под микроскопом, колонии помещенных микроорганизмов выглядели следующим образом:

1. С.diphtheriaegravis 665:

  • на КБА - диаметр колоний около 1,5 мм, круглые, темно-серые, с шероховатой поверхностью и неровными краями;
  • на сывороточном агаре – бесцветные и круглые частицы, диаметр от 1,2 до 1,5 мм;
  • на среде КТА – диаметром 1,5 мм, радиальная исчерченность, шероховатые, плоские, темно-серые.

2.  С.diphtheriaemitis 6765:

  • на КБА – диаметр до 1,6 мм, блестящие, ровные крвая, кркглые, темно-серые;
  • на сывороточном агаре – диаметр колонии до 1,8 мм, бесцветные, круглые, гладкие;
  • на КТА - диаметр колоний до 1,6 мм, серовато-черные, гладкие.

3. С.ulcerans 675:

  • на КБА – диаметр колоний до 0,4 мм, темно-серые, блестящие, выпуклые с сересристым ободком по краю;
  • на сывороточном агаре – круглые, бесцветные, в диаметре 0,2-0,4 мм;
  • на КТА – рост колоний не зафиксирован.

4.  С. xerosis 1911:

  • на КБА - колонии в диаметре до 1,00 мм, блестящие, выпуклые, темно-серые;
  • на сывороточном агаре – колонии до 1,2 мм, гладкие, круглые, бесцветные;
  • на КТА – колонии в диаметре до 1,2 мм, гладкие, сероватые.

Далее, через 48 часов после инкубации микроорганизмов колонии выглядели уже следующим образом:

1. С.diphtheriae gravis 665:

  • на КБА – диаметр до 3,5 мм, складчатая поверхность, изрезанные края (тип «маргаритки»);
  • на сывороточном агаре – до 4,0 мм в диаметре, колонии круглые и бесцветные, с неровными краями;
  • на среде КТА – диаметр до 2,5-3,5 мм, неровные края, уплощенные, исчерченность;

2.  С.diphtheriaemitis 6765:

  • на КБА – до 3,0 мм в диаметре, гладкие, круглые, темно-серые, ровные края;
  • на сывороточном агаре – до 4,0 мм в диаметре, гладкие, слегка выпуклые бесцветные колонии;
  • на КТА –колонии в диаметре до 2,8 мм, черные, гладкие, блестящие;

3. С.ulcerans 675:

  • на КБА – круглые, выпуклые, блестящие колонии, в диаметре от 0,5 мм до 1,5 мм;
  • на сывороточном агаре – в диаметре колонии до 2,5 мм, блестящие, бесцветные, круглые, гладкие;
  • на КТА – рост колоний зафиксирован не был;

4.  С. xerosis 1911:

  • на КБА – до 2,0 мм в диаметре, блестящие, выпуклые, круглые колонии;
  • на сывороточном агаре – бесцветные, круглые, выпуклые колонии в диаметре до 2,8 мм;
  • на КТА – в диаметре до 2,2 мм, серовато-черные, блестящие, выпуклые.

Сравнительный анализ трех сред показал, что среда КБА (Коринебакагар) в ряде случаев по своим характеристикам существенно превосходит среду КТА. В таблице ниже отражены данные по числу колоний, вырастающих на разных питательных средах.

Наименование

Разведение

Количество колоний на Коринебакагаре

Количество колоний на КТА

С.diphtheriaegravis 665

10-7

16-20

20

10-6

55-73

44

C.diphtheriae mitis 6765,

10-7

11-17

18

10-6

50-61

42

C.ulcerans 675

10-7

7-14

роста  нет

10-6

12-22

роста нет

C.xerosis 1911

10-7

5-13

5

10-6

46-51

Нет данных

На рисунке 1 отображен рост тестового штамма С.diphtheriaegravis 665 через 48 часов после начала инкубации .

Бактериологическая диагностика дифтерийной инфекции

Рисунок 1

На рисунке 2 отображен рост тестового штамма С.diphtheriaemitis 6765 через 48 часов после начала инкубации.

Бактериологическая диагностика дифтерийной инфекции

Рисунок 2

Бактериологическая диагностика дифтерийной инфекции с применением питательной среды Конинебакагар

По результатам проведенного исследования, мы можем сделать несколько важных выводов:

  • питательная среда Коринебакагар рекомендуется для бактериологической диагностики дифтерии (для выделения токсигенных коринебактерий),   а также для выявления других представителей этого рода при условии, что в аналите присутствует их минимальное количество;
  • использование питательной среды Коринебакагар позволяет подавить рост стрептококков и стафилококков;
  • лабораторная диагностика дифтерийной инфекции с применением Коринебакагара позволяет обнаружить рост коринебактерий визуально уже через сутки после засевания. Это проявляется в виде роста колоний на поверхности питательной среды и обеспечивает внутривидовую дифференциацию по морфологии выросших колоний;
  • приготовление питательной среды отличается простотой. Она приготавливается в лабораторных условиях быстро и не требует внесения в последующем кровяных добавок.

Учитывая вышеизложенное, мы приходим к выводам  о том, что применение питательной среды Коринебакагар имеет характеристики, улучшенные по сравнению с КТА, в частности, улучшенными являются ростовые свойства среды.

Поэтому лабораторная диагностика дифтерийной инфекции может быть качественно улучшена, если в ходе диагностики исследователь будет использовать питательную среду Коринебакагар.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×