Т spot тест на туберкулез для in vitro диагностики инфекции

1238

Латентная форма туберкулеза (ЛТБИ) характеризуется стойким иммунным ответом на антигены туберкулезной палочки (Mycobacterium tuberculosis) при отсутствии симптомов активной формы заболевания.

ЛТБИ способна перейти в активную легочную или внелегочную форму туберкулеза при некоторых неблагоприятных условиях, коими являются:

  • нарушения иммунитета;
  • сахарный диабет;
  • недоедание и истощение организма;
  • алкоголизм, и др.

Методы диагностики туберкулеза

Примерно треть общемировой популяции имеют латентную форму туберкулеза, и у 9 миллионов из них ежегодно случается переход заболевания в активную форму. На данный момент Россия входит в число стран с высоким уровнем туберкулеза.

Традиционными на сегодняшний день методиками исследования на наличие туберкулеза являются:

  • внутрикожная проба Манту;
  • накожный диаскин-тест;
  • методика IGRA (Interferon-gamma release assay), которая основана на высвобождении Т-лимфоцитами in vitro гамма-интерферона (ИФН-γ).

К последней методике относятся квантифероновый тест и t spot тест на туберкулез.

Читайте также в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Стоит отметить, что вакцинация БЦЖ снижает специфичность диагностических тестов с использованием туберкулина и делает наиболее эффективной стратегию с использованием методики IGRA. Применение специально подобранных антигенов антигенов CFP-10 (белок культурального фильтрата-10) и ESAT-6 (ранний секреторный антиген-6) делает более высокой его специфичность и эффективность. Эти антигены являются компонентами микобактерий комплекса М. tuberculosis (М. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. microti, M. africanum,M. mungi, и др.), и наличие иммунного ответа на них является доказательством присутствия в организме туберкулезной инфекции.

Т spot тест на туберкулез: понятие и суть

Одним из методов IGRA является t spot тест на туберкулез. Он позволяет обнаружить в крови человека Т-лимфоциты, активированные антигенами туберкулезной палочки. Основа данного анализа – метод ELISPOT, или метод иммуноферментных пятен или зон.

Т-лимфоциты в человеческом организме активируются под воздействием антигенов CFP-10 и ESAT-6, специфических для М. tuberculosis. Ответом этих клеток на повторную специфическую антигенную стимуляцию является повышенная секреция цитокинов.

Суть данной диагностики такова: из образца крови выделяют мононуклеарные клетки периферической крови, на которые воздействуют специфическими антигенами CFP-10 и ESAT-6. Если мононуклеарные клетки периферической крови пациента уже встречались с антигенами М. tuberculosis, то они начинают выделять гамма-интерферон, вступающий в реакцию с нанесенными на мембрану плашки антителами к нему. Каждый выявленный иммунный комплекс антител определяется под микроскопом в виде округлого темного пятна, называемого спотом.  

t spot тест на туберкулез для in vitro диагностики инфекции

Рис. 1. Визуализация иммунных комплексов антител гамма-интерферона

Один спот указывает на один активированный Т-лимфоцит. Таким образом, данная методика исследования дает и количественную, и качественную информацию о присутствии в образце крови пациента активированных микобактерий туберкулеза.

Надо сказать о том, что антигены CFP-10 и ESAT-6 не обнаруживаются во всех штаммах БЦЖ и у большинства представителей нетуберкулезных микобактерий, за исключением М. marinum, M. kansasii, M. szulgai. Специфичность t spot теста на туберкулез, по данным разработавших ее авторов, составляет порядка 99%, а чувствительность – около 95%.

Данная методика позволяет выявить все активированные Т-лимфоциты (CD4 и CD8), что особенно актуально при нарушении соотношений этих субпопуляций. В процессе исследования может быть выявлена одна 1 клетка-цитокин из 250 тысяч мононуклеарных клеток периферической крови. Время получения результата не превышает 2 суток.

Особенности проведения исследования на примере КДЛ Московского областного противотуберкулезного диспансера «Сукманиха»

В КДЛ Московского областного противотуберкулезного диспансера «Сукманиха» в период с ноября 2015 года по апрель 2016 года при помощи t spot теста на туберкулез было проанализировано 290 образцов венозной крови пациентов. Пробы взяты у медицинского персонала туберкулезных учреждений, пациентов стационара «Сукманиха», больных с ВИЧ-инфекцией и пациентов детских туберкулезных учреждений. В процессе работы обнаружены особенности, с которыми могут столкнуться сотрудники КДЛ при проведении данного исследования.

При проведении анализа строго соблюдалась инструкция. Забор крови производился в пробирки с гепарином, которые были доставлены в лабораторию не позднее 5 часов с момента сбора биологического материала. Строго соблюдался температурный режим транспортировки.

Стоит отметить, что кроме забора крови в пробирки с гепарином целесообразно производить дополнительный забор материала в пробирки с ЭДТА для подсчета количества лейкоцитов в общем клиническом анализе. Низкий уровень лейкоцитов (менее 3,5 ×109/л) не дает возможности получить нужное количество мононуклеарных клеток периферической крови для приготовления суспензии с заданной концентрацией (2,5 × 105 МКПК/100 мкл). При низком уровне лейкоцитов разделение клеток крови необходимо производить в двух пробирках с фиколлом. Это позволит увеличить количество выделенных мононуклеарных клеток периферической крови для дальнейшего исследования. Это особенно важно учитывать при исследовании материала, полученного от пациента с иммуносупрессией, например, больного ВИЧ.  

Между количеством лимфоцитов в периферической крови и адекватными результатами t spot теста на туберкулез существует определенная взаимосвязь, поскольку у лиц, в крови которых было менее 5 % лимфоцитов (менее 0,45 × 109 /л) от общего количества лейкоцитов) не всегда удавалось выделить количество мононуклеарных клеток периферической крови, необходимое для проведения анализа.

У части проб на этапе выделения мононуклеарных клеток периферической крови не произошло чистого разделения эритроцитов и лейкоцитов, и фиколл после центрифугирования содержал красные кровяные клетки, которые давали неспецифический фон на заключительном этапе учета результатов. Результат исследования в этом случае может быть сомнительным и может не подлежать учету. Однако дополнительная отмывка мононуклеарных частиц периферической крови от эритроцитов может привести к потере значительного количества первых.

Т spot тест на туберкулез не может быть полностью достоверным без соблюдения условий преаналитического этапа. Забор крови сначала производится в пробирку с гепарином, а затем в пробирку с ЭДТА. Кровь и наполнитель аккуратно перемешивают, встряхивая пробирку не менее 4-5 раз. Поскольку работа осуществляется с живыми клетками, крайне важно соблюдение температурного режима и времени доставки биологического материала в клинико-диагностическую лабораторию.

Т spot тест на туберкулез является дорогостоящим, однако имеет ряд преимуществ.

  • доступность забора материала для проведения анализа;
  • взятие крови в любое время суток;
  • выявление латентной формы туберкулезной инфекции;
  • выявление инфекции вне зависимости от расположения патологического процесса;
  • быстрое получение результатов теста;
  • отсутствие влияния индивидуальных особенностей организма (аллергических реакций, обострения хронических заболеваний, кожных патологий, переносимости туберкулина и др.) на результат анализа.   
Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...






      Наши продукты




















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль