text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Т spot тест на туберкулез для in vitro диагностики инфекции

  • 4 декабря 2016
  • 1445

Латентная форма туберкулеза (ЛТБИ) характеризуется стойким иммунным ответом на антигены туберкулезной палочки (Mycobacterium tuberculosis) при отсутствии симптомов активной формы заболевания.

ЛТБИ способна перейти в активную легочную или внелегочную форму туберкулеза при некоторых неблагоприятных условиях, коими являются:

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

  • нарушения иммунитета;
  • сахарный диабет;
  • недоедание и истощение организма;
  • алкоголизм, и др.

Методы диагностики туберкулеза

Примерно треть общемировой популяции имеют латентную форму туберкулеза, и у 9 миллионов из них ежегодно случается переход заболевания в активную форму. На данный момент Россия входит в число стран с высоким уровнем туберкулеза.

Традиционными на сегодняшний день методиками исследования на наличие туберкулеза являются:

  • внутрикожная проба Манту;
  • накожный диаскин-тест;
  • методика IGRA (Interferon-gamma release assay), которая основана на высвобождении Т-лимфоцитами in vitro гамма-интерферона (ИФН-γ).

К последней методике относятся квантифероновый тест и t spot тест на туберкулез.


Стоит отметить, что вакцинация БЦЖ снижает специфичность диагностических тестов с использованием туберкулина и делает наиболее эффективной стратегию с использованием методики IGRA. Применение специально подобранных антигенов антигенов CFP-10 (белок культурального фильтрата-10) и ESAT-6 (ранний секреторный антиген-6) делает более высокой его специфичность и эффективность. Эти антигены являются компонентами микобактерий комплекса М. tuberculosis (М. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. microti, M. africanum,M. mungi, и др.), и наличие иммунного ответа на них является доказательством присутствия в организме туберкулезной инфекции.

Т spot тест на туберкулез: понятие и суть

Одним из методов IGRA является t spot тест на туберкулез. Он позволяет обнаружить в крови человека Т-лимфоциты, активированные антигенами туберкулезной палочки. Основа данного анализа – метод ELISPOT, или метод иммуноферментных пятен или зон.

Т-лимфоциты в человеческом организме активируются под воздействием антигенов CFP-10 и ESAT-6, специфических для М. tuberculosis. Ответом этих клеток на повторную специфическую антигенную стимуляцию является повышенная секреция цитокинов.

Суть данной диагностики такова: из образца крови выделяют мононуклеарные клетки периферической крови, на которые воздействуют специфическими антигенами CFP-10 и ESAT-6. Если мононуклеарные клетки периферической крови пациента уже встречались с антигенами М. tuberculosis, то они начинают выделять гамма-интерферон, вступающий в реакцию с нанесенными на мембрану плашки антителами к нему. Каждый выявленный иммунный комплекс антител определяется под микроскопом в виде округлого темного пятна, называемого спотом.  

t spot тест на туберкулез для in vitro диагностики инфекции

Рис. 1. Визуализация иммунных комплексов антител гамма-интерферона

Один спот указывает на один активированный Т-лимфоцит. Таким образом, данная методика исследования дает и количественную, и качественную информацию о присутствии в образце крови пациента активированных микобактерий туберкулеза.

Надо сказать о том, что антигены CFP-10 и ESAT-6 не обнаруживаются во всех штаммах БЦЖ и у большинства представителей нетуберкулезных микобактерий, за исключением М. marinum, M. kansasii, M. szulgai. Специфичность t spot теста на туберкулез, по данным разработавших ее авторов, составляет порядка 99%, а чувствительность – около 95%.

Данная методика позволяет выявить все активированные Т-лимфоциты (CD4 и CD8), что особенно актуально при нарушении соотношений этих субпопуляций. В процессе исследования может быть выявлена одна 1 клетка-цитокин из 250 тысяч мононуклеарных клеток периферической крови. Время получения результата не превышает 2 суток.

Особенности проведения исследования на примере КДЛ Московского областного противотуберкулезного диспансера «Сукманиха»


В КДЛ Московского областного противотуберкулезного диспансера «Сукманиха» в период с ноября 2015 года по апрель 2016 года при помощи t spot теста на туберкулез было проанализировано 290 образцов венозной крови пациентов. Пробы взяты у медицинского персонала туберкулезных учреждений, пациентов стационара «Сукманиха», больных с ВИЧ-инфекцией и пациентов детских туберкулезных учреждений. В процессе работы обнаружены особенности, с которыми могут столкнуться сотрудники КДЛ при проведении данного исследования.

При проведении анализа строго соблюдалась инструкция. Забор крови производился в пробирки с гепарином, которые были доставлены в лабораторию не позднее 5 часов с момента сбора биологического материала. Строго соблюдался температурный режим транспортировки.

Стоит отметить, что кроме забора крови в пробирки с гепарином целесообразно производить дополнительный забор материала в пробирки с ЭДТА для подсчета количества лейкоцитов в общем клиническом анализе. Низкий уровень лейкоцитов (менее 3,5 ×109/л) не дает возможности получить нужное количество мононуклеарных клеток периферической крови для приготовления суспензии с заданной концентрацией (2,5 × 105 МКПК/100 мкл). При низком уровне лейкоцитов разделение клеток крови необходимо производить в двух пробирках с фиколлом. Это позволит увеличить количество выделенных мононуклеарных клеток периферической крови для дальнейшего исследования. Это особенно важно учитывать при исследовании материала, полученного от пациента с иммуносупрессией, например, больного ВИЧ.  

Между количеством лимфоцитов в периферической крови и адекватными результатами t spot теста на туберкулез существует определенная взаимосвязь, поскольку у лиц, в крови которых было менее 5 % лимфоцитов (менее 0,45 × 109 /л) от общего количества лейкоцитов) не всегда удавалось выделить количество мононуклеарных клеток периферической крови, необходимое для проведения анализа.

У части проб на этапе выделения мононуклеарных клеток периферической крови не произошло чистого разделения эритроцитов и лейкоцитов, и фиколл после центрифугирования содержал красные кровяные клетки, которые давали неспецифический фон на заключительном этапе учета результатов. Результат исследования в этом случае может быть сомнительным и может не подлежать учету. Однако дополнительная отмывка мононуклеарных частиц периферической крови от эритроцитов может привести к потере значительного количества первых.

Т spot тест на туберкулез не может быть полностью достоверным без соблюдения условий преаналитического этапа. Забор крови сначала производится в пробирку с гепарином, а затем в пробирку с ЭДТА. Кровь и наполнитель аккуратно перемешивают, встряхивая пробирку не менее 4-5 раз. Поскольку работа осуществляется с живыми клетками, крайне важно соблюдение температурного режима и времени доставки биологического материала в клинико-диагностическую лабораторию.

Т spot тест на туберкулез является дорогостоящим, однако имеет ряд преимуществ.

  • доступность забора материала для проведения анализа;
  • взятие крови в любое время суток;
  • выявление латентной формы туберкулезной инфекции;
  • выявление инфекции вне зависимости от расположения патологического процесса;
  • быстрое получение результатов теста;
  • отсутствие влияния индивидуальных особенностей организма (аллергических реакций, обострения хронических заболеваний, кожных патологий, переносимости туберкулина и др.) на результат анализа.   
Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.