Слайд-планшет для микроскопического исследования осадка мочи

463

Количественные методы определения клеток в единице объема до сих пор широко используются в работе лабораторий разных направлений. Проведено исследование для оценки воспроизводимости результатов подсчета с помощью камеры Горяева и пластиковых слайд планшетов для микроскопического исследования осадка мочи. 

Используя при подсчете клеточных элементов формулы из методического пособия производителя, были достигнуты хорошие результаты. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Количественные методы определения клеток в единице объема образцов биологических жидкостей и сегодня широко используются в работе лабораторий разных направлений — общеклинических, микробиологических и др.

В рамках клинико-лабораторных исследований выполняют подсчет

  • числа сперматозоидов в 1 мл эякулята,
  • числа лейкоцитов в ликворе
  • концентрацию спор возбудителя сибирской язвы В. anthracis в вакцинной культуре [3, 4].

Читайте также в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Камеры для подсчета клеток

В начале прошлого века для подсчета клеток крови применялся аппарат Тома — Цейсса, на смену ему пришла камера Предтеченского и, наконец, с середины прошлого века для подсчета клеток стали использовать сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких [2]. До настоящего времени она является основным инструментом подсчета клеток при проведении анализа мочи по методу Нечипоренко [1].

Принцип формирования сеток во всех камерах один и тот же.

Камеры разделены на некоторое число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объем квадрата, можно произвести расчет и определить количество клеток в единице объема образца.

Контрольных материалов для оценки результатов исследования мочи по методу Нечипоренко не существует. Камеры не подвергаются калибровке, ни одна система внешней оценки качества не имеет в своем арсенале контрольных образцов, в работе с которыми нужно применять камеру Горяева.

Таким образом, оценить правильность полученных результатов — дело непростое.

Слайд-планшеты для микроскопического исследования

Перед началом использования в работе пластиковых слайд-планшетов (Aptaca, Италия) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей мы решили провести исследование, целью которого было оценить точность и воспроизводимость результатов подсчета.

Слайд-планшет для микроскопического исследования осадка мочиВ качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных.

Подсчет проводился тремя врачами клинической лабораторной диагностики, которые определяли количество лейкоцитов при помощи слайд-планшета и для сравнения — с использованием камеры Горяева.

В качестве контрольных использовались данные, полученные на автоматическом гематологическом анализаторе Сисмекс KX-21N.

Для проверочного исследования мы выбрали подсчет форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем что контроль их количества можно осуществить автоматизированным способом.

  • Камера Горяева предназначена для подсчета форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. Площадь камеры — 9 мм², глубина — 0,1 мм, объем — 0,9 мм³.
  • Слайд-планшет содержит ячейки, которые снабжены сеткой для подсчета (3×3 мм) и покрыты тонкой прозрачной пластиковой пластинкой. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1×1 мм), которые, в свою очередь, разделены на 9 маленьких квадратов (0,333×0,333 мм).

Подсчет велся согласно инструкции, опубликованной на сайте компании-производителя.

Среднее значение количества лейкоцитов:

  • полученное при исследовании на автоматическом анализаторе, составило 5950 ± 2407×109/л (M ± SD),
  • при подсчете с помощью камеры Горяева (среднее значение результатов анализа, выполненного тремя врачами) — 4916 ± 1794,4×109/л,
  • при использовании слайд-планшета (среднее значение, полученное тремя врачами) — 9477 ± 3624×109/л.

Результаты подсчета количества лейкоцитов с использованием камеры Горяева и с использованием слайд-планшета достоверно отличались от данных, полученных на автоматическом анализаторе Sysmex KX-21 N.

Результаты подсчета с помощью камеры Горяева и на автоматическом анализаторе, полученные двумя врачами из трех, достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со  слайд-планшетом.

Особенно важно, что при использовании слайд-планшета были выше не только собственно средние значения числа лейкоцитов, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов, полученных с применением автоматического анализатора.

В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось. Обратившись к производителю за разъяснениями, мы получили великолепную инструкцию, в которой имелись ответы на все наши вопросы.

Оказалось, что необходимо выбирать способ подсчета элементов в зависимости от клеточности образца.

  1. При высокой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 5 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.
  2. При низкой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 10 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.

Дальнейшие подсчеты ведутся согласно формулам, приведенным ниже.

Коэффициент конверсии для 10 мл мочи, взятой для центрифугирования:

Tμ = n / (k x N x 10) или Tml = (n x 1000) / (k x N x 10),

где

  • n — количество клеток, подсчитанных в малых квадратах;
  • N — количество малых квадратов, в которых велся подсчет;
  • k — 0,01111 — объем малого квадрата;
  • 10 — количество миллилитров мочи, подвергнутых центрифугированию;
  • Tμ — количество клеток в микролитре;
  • Tml — количество клеток в миллилитре.

Также методическое пособие содержит формулы для работы с образцами, которые не подвергаются центрифугированию:

Tμ = n / (k x N) или Tml = (n x 1000) /(k x N) .

Используя данный подход к подсчету клеточных элементов, мы смогли добиться хороших результатов. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Применяя данные рекомендации, мы смогли использовать слайд-планшет для микроскопического анализа мочи, количественного определения по методу Нечипоренко, а также для подсчета клеток в любом биологическом материале.

На наш взгляд, эта тема представляет практический интерес, т. к. камеры для подсчета клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения.


Список использованной литературы

1. Нечипоренко А. З. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов в 1 мл мочи // Лабораторное дело. 1969. № 2. С. 121. 2. Предтеченский В. Е. Руководство к клинической микроскопии. М.: Типо-литографияТ-ваИ. Н. Кушнерев и Ко, 1901. 256 с. 3. Методические указания. МУ  3.3.1.1112–02. Основные требования к вакцинным штаммам сибиреязвенного микроба для иммунизации людей. (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ  26.02.2002). 4. СП  3.3.2.561-96. 3.3.2. Медицинские иммунобиологические препараты. Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила (утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от  31.10.1996 № 33).

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...






      Наши продукты




















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль