text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Слайд-планшет для микроскопического исследования осадка мочи

  • 8 января 2017
  • 772

Количественные методы определения клеток в единице объема до сих пор широко используются в работе лабораторий разных направлений. Проведено исследование для оценки воспроизводимости результатов подсчета с помощью камеры Горяева и пластиковых слайд планшетов для микроскопического исследования осадка мочи. 

Используя при подсчете клеточных элементов формулы из методического пособия производителя, были достигнуты хорошие результаты. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Количественные методы определения клеток в единице объема образцов биологических жидкостей и сегодня широко используются в работе лабораторий разных направлений — общеклинических, микробиологических и др.

В рамках клинико-лабораторных исследований выполняют подсчет

  • числа сперматозоидов в 1 мл эякулята,
  • числа лейкоцитов в ликворе
  • концентрацию спор возбудителя сибирской язвы В. anthracis в вакцинной культуре [3, 4].

Камеры для подсчета клеток

В начале прошлого века для подсчета клеток крови применялся аппарат Тома — Цейсса, на смену ему пришла камера Предтеченского и, наконец, с середины прошлого века для подсчета клеток стали использовать сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких [2]. До настоящего времени она является основным инструментом подсчета клеток при проведении анализа мочи по методу Нечипоренко [1].

Принцип формирования сеток во всех камерах один и тот же.

Камеры разделены на некоторое число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объем квадрата, можно произвести расчет и определить количество клеток в единице объема образца.

Контрольных материалов для оценки результатов исследования мочи по методу Нечипоренко не существует. Камеры не подвергаются калибровке, ни одна система внешней оценки качества не имеет в своем арсенале контрольных образцов, в работе с которыми нужно применять камеру Горяева.

Таким образом, оценить правильность полученных результатов — дело непростое.


Слайд-планшеты для микроскопического исследования

Перед началом использования в работе пластиковых слайд-планшетов (Aptaca, Италия) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей мы решили провести исследование, целью которого было оценить точность и воспроизводимость результатов подсчета.

Слайд-планшет для микроскопического исследования осадка мочиВ качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных.

Подсчет проводился тремя врачами клинической лабораторной диагностики, которые определяли количество лейкоцитов при помощи слайд-планшета и для сравнения — с использованием камеры Горяева.

В качестве контрольных использовались данные, полученные на автоматическом гематологическом анализаторе Сисмекс KX-21N.

Для проверочного исследования мы выбрали подсчет форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем что контроль их количества можно осуществить автоматизированным способом.

  • Камера Горяева предназначена для подсчета форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. Площадь камеры — 9 мм², глубина — 0,1 мм, объем — 0,9 мм³.
  • Слайд-планшет содержит ячейки, которые снабжены сеткой для подсчета (3×3 мм) и покрыты тонкой прозрачной пластиковой пластинкой. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1×1 мм), которые, в свою очередь, разделены на 9 маленьких квадратов (0,333×0,333 мм).

Подсчет велся согласно инструкции, опубликованной на сайте компании-производителя.

Среднее значение количества лейкоцитов:

  • полученное при исследовании на автоматическом анализаторе, составило 5950 ± 2407×109/л (M ± SD),
  • при подсчете с помощью камеры Горяева (среднее значение результатов анализа, выполненного тремя врачами) — 4916 ± 1794,4×109/л,
  • при использовании слайд-планшета (среднее значение, полученное тремя врачами) — 9477 ± 3624×109/л.

Результаты подсчета количества лейкоцитов с использованием камеры Горяева и с использованием слайд-планшета достоверно отличались от данных, полученных на автоматическом анализаторе Sysmex KX-21 N.

Результаты подсчета с помощью камеры Горяева и на автоматическом анализаторе, полученные двумя врачами из трех, достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со  слайд-планшетом.

Особенно важно, что при использовании слайд-планшета были выше не только собственно средние значения числа лейкоцитов, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов, полученных с применением автоматического анализатора.

В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось. Обратившись к производителю за разъяснениями, мы получили великолепную инструкцию, в которой имелись ответы на все наши вопросы.

Оказалось, что необходимо выбирать способ подсчета элементов в зависимости от клеточности образца.

  1. При высокой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 5 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.
  2. При низкой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 10 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.

Дальнейшие подсчеты ведутся согласно формулам, приведенным ниже.

Коэффициент конверсии для 10 мл мочи, взятой для центрифугирования:

Tμ = n / (k x N x 10) или Tml = (n x 1000) / (k x N x 10),

где

  • n — количество клеток, подсчитанных в малых квадратах;
  • N — количество малых квадратов, в которых велся подсчет;
  • k — 0,01111 — объем малого квадрата;
  • 10 — количество миллилитров мочи, подвергнутых центрифугированию;
  • Tμ — количество клеток в микролитре;
  • Tml — количество клеток в миллилитре.

Также методическое пособие содержит формулы для работы с образцами, которые не подвергаются центрифугированию:

Tμ = n / (k x N) или Tml = (n x 1000) /(k x N) .

Используя данный подход к подсчету клеточных элементов, мы смогли добиться хороших результатов. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Применяя данные рекомендации, мы смогли использовать слайд-планшет для микроскопического анализа мочи, количественного определения по методу Нечипоренко, а также для подсчета клеток в любом биологическом материале.

На наш взгляд, эта тема представляет практический интерес, т. к. камеры для подсчета клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения.


Список использованной литературы

1. Нечипоренко А. З. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов в 1 мл мочи // Лабораторное дело. 1969. № 2. С. 121. 2. Предтеченский В. Е. Руководство к клинической микроскопии. М.: Типо-литографияТ-ваИ. Н. Кушнерев и Ко, 1901. 256 с. 3. Методические указания. МУ  3.3.1.1112–02. Основные требования к вакцинным штаммам сибиреязвенного микроба для иммунизации людей. (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ  26.02.2002). 4. СП  3.3.2.561-96. 3.3.2. Медицинские иммунобиологические препараты. Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила (утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от  31.10.1996 № 33).

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.