text
Портал для медицинских работников

Диагностика рака мочевого пузыря с использованием цитологического и молекулярно-цитогенетического методов исследования

  • 15 июня 2011
  • 70

Диагностика первичного и рецидивирующего рака мочевого пузыря (РМП) представляет собой одну из наиболее трудных проблем в урологии. Современные методы диагностики (цистоскопия, ультразвуковое исследование, цитология и т. д.) являются либо инвазивными, либо малочувствительными, что ограничивает их применение. При достаточно высокой специфичности цитологического метода - 96% чувствительность его низка - 59%. В настоящее время широкое распространение получил метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Принцип метода основан на использовании меченных флуоресцентными красителями ДНК-зондов, специфичных для центромерных участков или уникальных последовательностей хромосом, что позволяет выявлять количественные или структурные хромосомные аномалии. Основываясь на данных о связи РМП с отдельными типами хромосомных нарушений, в США группа исследователей из отделения лабораторной генетики Mayo Clinic and Foundation в сотрудничестве с фирмой Vysis, Inc. создали набор из четырех флуоресцентных зондов для выявления мутаций, наиболее характерных при карциноме мочевого пузыря: центромерных меток - для определения полисомии 3-й, 7-й, 17-й хромосом и для 9-й хромосомы - пробу, специфичную локусу 9р21.

Подобная комбинация зондов была принята за основу при создании диагностического набора и получила название Uro Vysion тест.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Как свидетельствуют результаты разных авторов, чувствительность FISH-метода составляет 81-94%, что значительно выше, чем при цитологическом исследовании - 59-61%. Специфичность же обоих методов практически совпадает: FISH - 98%, цитологическое исследование - 96%. Для РМП характерна делеция участка хромосомы 9, что ведет к потере ряда генов, ответственных за контроль клеточного цикла. Эта мутация проявляется на ранних стадиях злокачественного перерождения уротелия (карциномы in situ), еще до появления полисомных клеток, что позволяет выявить раковые клетки в моче до проявления клинических симптомов, а это, в свою очередь, приводит к увеличению выживаемости и улучшению прогноза заболевания. Полисомии хромосомы 7 при РМП коррелируют с более агрессивными, инвазивными опухолями и плохим прогнозом. Полисомия хромосомы 17 ассоциирована с увеличением риска опухолевой прогрессии. Согласно последней морфологической классификации опухолей мочевого пузыря Всемирной организации здравоохранения, принято выделять два типа карцином: генетически нестабильные с высокой степенью злокачественности и генетически стабильные с низкой степенью анаплазии.

Сорок четыре цитологических и 25 цитогенетических исследований было выполнено у 44 пациентов (26 мужчин, 18 женщин), средний возраст больных составил 63 года (от 31 до 100 лет). Из них 24 (54,5%) пациентам ранее проведено комплексное лечение - трансуретральная резекция мочевого пузыря, химио- и фотодинамическая терапия; 20 (45,5%) пациентов обратились первично - для подтверждения или исключения диагноза РМП.

Цитогенетическое исследование с использованием FISH-набора фирмы Uro Vysion Bladder Cancer Kit (Abbott, США) с центромерными ДНК- зондами к парам хромосом 3, 7, 17 и локусспецифического ДНК-зонда к короткому плечу хромосомы 9 выполнено 25 больным: 12 - наблюдение уротелиального рака, 6 - подозрение на наличие рака, 1 - переходноклеточная папиллома, 6 - цитограмма без особенностей (настораживало обилие клеток уротелия в осадке мочи).

Соскобы с опухоли, полученные при цистоскопии, помещали в микропробирку с 800 мкл питательной среды накопления; промывные воды из мочевого пузыря, образцы мочи собирали в объеме 100-150 мл. Центрифугированием получали богатый клеточными элементами осадок в 800 мкл жидкости (мочи, промывной воды, среды накопления) и из него готовили 6-8 монослойных мазков на центрифуге Cytospin-3; 2-4 мазка окрашивали по Романовскому в модификации Паппенгейма для цитологического исследования, остальные использовались для цитогенетического анализа.

FISH-исследование проводилось в соответствии с инструкцией к набору Uro Vysion (Abbott).

Полисомию по хромосомам 3, 7, 17 и делецию локуса 9р21 оценивали с использованием набора Uro Vysion Bladder Cancer Kit (Abbott), содержащего 4 различные по цвету флуоресцентные метки: хромосома 3 - красный, хромосома 7 - зеленый, хромосома 17 - голубой, делеция локуса 9р21 - желтый. Результаты оценивали с помощью флуоресцентного микроскопа Imager.Ml (Zeiss, Германия) с телекамерой CoolCubel (Meta Systems, Италия) c использованием набора фильтров, учитывая количество каждой из флуоресцентных меток в 60 клетках опухоли и принимая в качестве нормы содержание во всех клетках по 2 сигнала каждой цветной метки.

Анализ продолжали до тех пор, пока не обнаруживали 4 клетки с одновременным увеличением более двух хромосом 3, 7, 17 или 12 клеток из 25 с гомозиготной потерей локуса 9р21, что проявляется отсутствием желтого сигнала в ядре.

Рецидив РМП цитологически подтвержден в 9 из 24 (37,5%) наблюдений, первично поставлен диагноз уротелиального рака в 3 из 20 (15%) наблюдений. Гистологический тип РМП - переходноклеточный рак, в 1 наблюдении - с выраженной плоскоклеточной метаплазией.

Клетки рака в мазках после проведенного лечения найдены в 3 наблюдениях (12,5%) и у 2 пациентов (10%), которым не проводили никакого лечения. В цитограмме отмечались клетки с признаками плоскоклеточной метаплазии, с пролиферацией уротелия, укрупнением и полиморфизмом клеток, с гипер- хромией отдельных ядер, формированием сосочкоподобных структур.

Переходноклеточная папиллома диагностирована у 1 пациента, ранее лечившегося от папиллярной уротелиальной карциномы (таблица).

Цитограмма воспаления после лечения отмечена в 3 наблюдениях (12,5%) и первично почти в половине исследований (9 наблюдений, 45%) поставлен диагноз неспецифического цистита.

Результаты цитологии соответствовали норме в 8 наблюдениях (33,3%) после проведенного лечения и в 6 (30%) у первично обратившихся.

Результаты цитологического анализа

Варианты цитологических заключений

Рецидив РМП

Первичный РМП

Переходноклеточный рак

9 (37,5%)

3 (15%)

Подозрение на наличие переходноклеточного рака

3 (12,5%)

2 (10%)

Переходноклеточная папиллома

1 (4,1%)

-

Неспецифическое воспаление

3 (12,5%)

9 (45%)

Цитограмма без особенностей

8 (33,3%)

6 (30%)

ВСЕГО

24

20

44 наблюдения

Применение цитогенетического метода (набор Uro Vysion Bladder Cancer Kit) позволило диагностировать карциному у 12 пациентов.

Из 12 пациентов с уротелиальным раком хромосомные аберрации выявлены в 10 (83%) случаях, причем в 7 (70%) из 10 наблюдений по трем исследуемым хромосомам (3-й, 7-й и 17-й) в ядрах просматривалось более двух голубых, красных и зеленых сигналов. Делеция 9р21 выявлена в 9 (75%) из 12 наблюдений уротелиальных карцином (отсутствие желтого сигнала).

В двух случаях хромосомные изменения выявить не удалось: 1 цитограмма соответствовала переходноклеточному раку с выраженными признаками плоскоклеточной метаплазии, в ней оценить реакции не представлялось возможным в силу того, что ядра были компактные и плотные. В другом наблюдении при высокодифференцированной уротелиальной карциноме (G1) отмечалось по 2 сигнала каждой пробы (СЕР3, СЕР7, СЕР17, проба 9р21). Таким образом, диагноз карциномы поставлен только при цитологическом исследовании. Надо заметить, что в высокодифференцированных опухолях мочевого пузыря хромосомные аномалии встречаются несколько реже (5471%), чем в низкодифференцированных опухолях (84-97%).

В первом наблюдении цитограмма осадка промывных вод представлена переходным эпителием, часть ядер укрупнены, слабо полиморфные - дисплазия под вопросом. В анамнезе у больного уротелиальный рак G2, проведено комплексное лечение. Цитогенетический анализ показал наличие полисомии 3-й хромосомы в 36% ядер (тетросомии и пентосомии). Остальные сигналы (СЕР7, СЕР17, проба 9р21) соответствовали норме. В данном сомнительном наблюдении цитогенетический анализ свидетельствует в пользу дисплазии.

Также в первом наблюдении в цитограмме осадка мочи отмечалось большое число клеток уротелия, немного плоского эпителия, в анамнезе - уротелиальный рак G3, проведено комплексное лечение. FISH-исследование показало наличие тетра-, пента- и гексасомии 7-й хромосомы, и в половине ядер (55%) отмечено отсутствие желтого сигнала, что подтверждает наличие делеции локуса 9р21. Это позволило предположить наличие рецидива опухоли на цитогенетическом уровне, что не было выявлено при цистоскопии, цитологии и гистологии.

Таким образом, результаты обоих методов (цитологического и FISH- метода) в диагностике уротелиального рака совпали в 12 наблюдениях.

В двух наблюдениях карциному мочевого пузыря диагностировали только молекулярно-генетическим методом, при цитологическом исследовании клетки уротелия морфологически выглядели как нормальные.

Таким образом, молекулярно-генетические исследования опухолей мочевого пузыря представляют собой перспективный метод, позволяющий выявить единичные опухолевые клетки, предсказать склонность к прогрессии (инвазии, метастазированию) и определить рецидив опухоли.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×

Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.