text

🎁 Журнал+чайник в ПОДАРОК! УСПЕТЬ ➤➤➤

Здравоохранение

Диагностика рака мочевого пузыря с использованием цитологического и молекулярно-цитогенетического методов исследования

  • 15 июня 2011
  • 72

Диагностика первичного и рецидивирующего рака мочевого пузыря (РМП) представляет собой одну из наиболее трудных проблем в урологии. Современные методы диагностики (цистоскопия, ультразвуковое исследование, цитология и т. д.) являются либо инвазивными, либо малочувствительными, что ограничивает их применение. При достаточно высокой специфичности цитологического метода - 96% чувствительность его низка - 59%. В настоящее время широкое распространение получил метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Принцип метода основан на использовании меченных флуоресцентными красителями ДНК-зондов, специфичных для центромерных участков или уникальных последовательностей хромосом, что позволяет выявлять количественные или структурные хромосомные аномалии. Основываясь на данных о связи РМП с отдельными типами хромосомных нарушений, в США группа исследователей из отделения лабораторной генетики Mayo Clinic and Foundation в сотрудничестве с фирмой Vysis, Inc. создали набор из четырех флуоресцентных зондов для выявления мутаций, наиболее характерных при карциноме мочевого пузыря: центромерных меток - для определения полисомии 3-й, 7-й, 17-й хромосом и для 9-й хромосомы - пробу, специфичную локусу 9р21.

Подобная комбинация зондов была принята за основу при создании диагностического набора и получила название Uro Vysion тест.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Как свидетельствуют результаты разных авторов, чувствительность FISH-метода составляет 81-94%, что значительно выше, чем при цитологическом исследовании - 59-61%. Специфичность же обоих методов практически совпадает: FISH - 98%, цитологическое исследование - 96%. Для РМП характерна делеция участка хромосомы 9, что ведет к потере ряда генов, ответственных за контроль клеточного цикла. Эта мутация проявляется на ранних стадиях злокачественного перерождения уротелия (карциномы in situ), еще до появления полисомных клеток, что позволяет выявить раковые клетки в моче до проявления клинических симптомов, а это, в свою очередь, приводит к увеличению выживаемости и улучшению прогноза заболевания. Полисомии хромосомы 7 при РМП коррелируют с более агрессивными, инвазивными опухолями и плохим прогнозом. Полисомия хромосомы 17 ассоциирована с увеличением риска опухолевой прогрессии. Согласно последней морфологической классификации опухолей мочевого пузыря Всемирной организации здравоохранения, принято выделять два типа карцином: генетически нестабильные с высокой степенью злокачественности и генетически стабильные с низкой степенью анаплазии.

Сорок четыре цитологических и 25 цитогенетических исследований было выполнено у 44 пациентов (26 мужчин, 18 женщин), средний возраст больных составил 63 года (от 31 до 100 лет). Из них 24 (54,5%) пациентам ранее проведено комплексное лечение - трансуретральная резекция мочевого пузыря, химио- и фотодинамическая терапия; 20 (45,5%) пациентов обратились первично - для подтверждения или исключения диагноза РМП.

Цитогенетическое исследование с использованием FISH-набора фирмы Uro Vysion Bladder Cancer Kit (Abbott, США) с центромерными ДНК- зондами к парам хромосом 3, 7, 17 и локусспецифического ДНК-зонда к короткому плечу хромосомы 9 выполнено 25 больным: 12 - наблюдение уротелиального рака, 6 - подозрение на наличие рака, 1 - переходноклеточная папиллома, 6 - цитограмма без особенностей (настораживало обилие клеток уротелия в осадке мочи).

Соскобы с опухоли, полученные при цистоскопии, помещали в микропробирку с 800 мкл питательной среды накопления; промывные воды из мочевого пузыря, образцы мочи собирали в объеме 100-150 мл. Центрифугированием получали богатый клеточными элементами осадок в 800 мкл жидкости (мочи, промывной воды, среды накопления) и из него готовили 6-8 монослойных мазков на центрифуге Cytospin-3; 2-4 мазка окрашивали по Романовскому в модификации Паппенгейма для цитологического исследования, остальные использовались для цитогенетического анализа.

FISH-исследование проводилось в соответствии с инструкцией к набору Uro Vysion (Abbott).

Полисомию по хромосомам 3, 7, 17 и делецию локуса 9р21 оценивали с использованием набора Uro Vysion Bladder Cancer Kit (Abbott), содержащего 4 различные по цвету флуоресцентные метки: хромосома 3 - красный, хромосома 7 - зеленый, хромосома 17 - голубой, делеция локуса 9р21 - желтый. Результаты оценивали с помощью флуоресцентного микроскопа Imager.Ml (Zeiss, Германия) с телекамерой CoolCubel (Meta Systems, Италия) c использованием набора фильтров, учитывая количество каждой из флуоресцентных меток в 60 клетках опухоли и принимая в качестве нормы содержание во всех клетках по 2 сигнала каждой цветной метки.

Анализ продолжали до тех пор, пока не обнаруживали 4 клетки с одновременным увеличением более двух хромосом 3, 7, 17 или 12 клеток из 25 с гомозиготной потерей локуса 9р21, что проявляется отсутствием желтого сигнала в ядре.

Рецидив РМП цитологически подтвержден в 9 из 24 (37,5%) наблюдений, первично поставлен диагноз уротелиального рака в 3 из 20 (15%) наблюдений. Гистологический тип РМП - переходноклеточный рак, в 1 наблюдении - с выраженной плоскоклеточной метаплазией.

Клетки рака в мазках после проведенного лечения найдены в 3 наблюдениях (12,5%) и у 2 пациентов (10%), которым не проводили никакого лечения. В цитограмме отмечались клетки с признаками плоскоклеточной метаплазии, с пролиферацией уротелия, укрупнением и полиморфизмом клеток, с гипер- хромией отдельных ядер, формированием сосочкоподобных структур.

Переходноклеточная папиллома диагностирована у 1 пациента, ранее лечившегося от папиллярной уротелиальной карциномы (таблица).

Цитограмма воспаления после лечения отмечена в 3 наблюдениях (12,5%) и первично почти в половине исследований (9 наблюдений, 45%) поставлен диагноз неспецифического цистита.

Результаты цитологии соответствовали норме в 8 наблюдениях (33,3%) после проведенного лечения и в 6 (30%) у первично обратившихся.

Результаты цитологического анализа

Варианты цитологических заключений

Рецидив РМП

Первичный РМП

Переходноклеточный рак

9 (37,5%)

3 (15%)

Подозрение на наличие переходноклеточного рака

3 (12,5%)

2 (10%)

Переходноклеточная папиллома

1 (4,1%)

-

Неспецифическое воспаление

3 (12,5%)

9 (45%)

Цитограмма без особенностей

8 (33,3%)

6 (30%)

ВСЕГО

24

20

44 наблюдения

Применение цитогенетического метода (набор Uro Vysion Bladder Cancer Kit) позволило диагностировать карциному у 12 пациентов.

Из 12 пациентов с уротелиальным раком хромосомные аберрации выявлены в 10 (83%) случаях, причем в 7 (70%) из 10 наблюдений по трем исследуемым хромосомам (3-й, 7-й и 17-й) в ядрах просматривалось более двух голубых, красных и зеленых сигналов. Делеция 9р21 выявлена в 9 (75%) из 12 наблюдений уротелиальных карцином (отсутствие желтого сигнала).

В двух случаях хромосомные изменения выявить не удалось: 1 цитограмма соответствовала переходноклеточному раку с выраженными признаками плоскоклеточной метаплазии, в ней оценить реакции не представлялось возможным в силу того, что ядра были компактные и плотные. В другом наблюдении при высокодифференцированной уротелиальной карциноме (G1) отмечалось по 2 сигнала каждой пробы (СЕР3, СЕР7, СЕР17, проба 9р21). Таким образом, диагноз карциномы поставлен только при цитологическом исследовании. Надо заметить, что в высокодифференцированных опухолях мочевого пузыря хромосомные аномалии встречаются несколько реже (5471%), чем в низкодифференцированных опухолях (84-97%).

В первом наблюдении цитограмма осадка промывных вод представлена переходным эпителием, часть ядер укрупнены, слабо полиморфные - дисплазия под вопросом. В анамнезе у больного уротелиальный рак G2, проведено комплексное лечение. Цитогенетический анализ показал наличие полисомии 3-й хромосомы в 36% ядер (тетросомии и пентосомии). Остальные сигналы (СЕР7, СЕР17, проба 9р21) соответствовали норме. В данном сомнительном наблюдении цитогенетический анализ свидетельствует в пользу дисплазии.

Также в первом наблюдении в цитограмме осадка мочи отмечалось большое число клеток уротелия, немного плоского эпителия, в анамнезе - уротелиальный рак G3, проведено комплексное лечение. FISH-исследование показало наличие тетра-, пента- и гексасомии 7-й хромосомы, и в половине ядер (55%) отмечено отсутствие желтого сигнала, что подтверждает наличие делеции локуса 9р21. Это позволило предположить наличие рецидива опухоли на цитогенетическом уровне, что не было выявлено при цистоскопии, цитологии и гистологии.

Таким образом, результаты обоих методов (цитологического и FISH- метода) в диагностике уротелиального рака совпали в 12 наблюдениях.

В двух наблюдениях карциному мочевого пузыря диагностировали только молекулярно-генетическим методом, при цитологическом исследовании клетки уротелия морфологически выглядели как нормальные.

Таким образом, молекулярно-генетические исследования опухолей мочевого пузыря представляют собой перспективный метод, позволяющий выявить единичные опухолевые клетки, предсказать склонность к прогрессии (инвазии, метастазированию) и определить рецидив опухоли.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
×

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.