text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Использование молекулярно-биологических методов для обнаружения парвовируса В19 в донорской крови

  • 15 декабря 2011
  • 10

Парвовирусная инфекция (парвовирусная инфекция В19, инфекционная эритема, “синдром отшлепанных щек”, “пятая болезнь”) - широко распространенное антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое пар- вовирусом В19 (Parvovirus B19), характеризующееся широким спектром клинических проявлений, зависящих от иммунного и гематологического статуса человека. Регистрируется в виде эпидемических и спорадических вспышек, чаще в зимний и весенний периоды, преимущественно у детей в возрасте от 6 до 15 лет, хотя заболеванию подвержены абсолютно все возрастные группы. Эпидемические подъемы отмечаются с интервалом в 3-4 года, при котором два года с высоким уровнем заболеваемости сменяются двумя годами с пониженным уровнем.

Первые упоминания о заболевании появились в XIX в., когда A. Tscha- mer (1886) и впоследствии G. Sticker (1899) описали клиническую картину инфекционной эритемы. Этиология заболевания оставалась неизвестной длительное время. В 1975 г. в Лондоне Y.E. Cossart с коллегами при исследовании с помощью электронной микроскопии крови доноров с ложноположительной реакцией на HBsAg обнаружили мелкие изометрические частицы диаметром 23 нм. Название вирусу было дано с учетом его размера (parvum - маленький) и номера образца сыворотки крови на панели, где он впервые был обнаружен, - В19. В 1981-1983 гг. J. Pattison с соавт. установили этиологическую роль Parvovirus B19 в развитии преходящего апластического криза у детей с серповидноклеточной анемией. В 1985 г. во время вспышки в Великобритании была выявлена связь между парвовирусом В19 и развитием инфекционной эритемы у детей. В этом же году была подтверждена связь между Parvovirus B19 и развитием артропатии. В 1995 г. Parvovirus B19 был отнесен к роду Erythrovirus.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Парвовирус В19 - ДНК-содержащий вирус рода Erythrovirus семейства Parvoviridae. Вирион Parvovirus B19 представляет собой икосаэдриче- ский нуклеокапсид диаметром около 20-25 нм с линейной одноцепочечной геномной ДНК длиной 5,4 тыс. оснований положительной или отрицательной полярности. В состав вириона входят два структурных (VP1, VP2) и один неструктурный (NS1) полипептидных протеина. Parvovirus B19 чувствителен к ультрафиолетовому излучению, однако высокоустойчив к действию физических и химических факторов: не разрушается в кислой среде, сохраняет инфекционность при температуре 60 °С до 12 ч. Парвовирус В19 обладает тропизмом к клеткам-предшественникам эритроцитов в красном костном мозге, селезенке и гепатоцитам плода, репродуцируется в них, вызывая лизис. Тропизм к клеткам данного ряда обусловлен специфическим связыванием Parvovirus B19 с клеточным рецептором Р-антигеном, облегчающим проникновение вируса внутрь клеток. Лица, генетически не экспрессирующие Р-антиген, устойчивы к заражению.

Источником заболевания является человек как с острой, так и с хронической инфекцией. Наиболее контагиозны больные в период виремии (до момента появления сыпи), а также пациенты с периодическими апластическими кризами. Пути передачи: воздушно-капельный, трансплацентарный и парентеральный. Парентеральное заражение может произойти при пересадке органов и тканей, при гемотрансфузии с донорской кровью, а также с очищенными продуктами крови - плазмой, тромбоцитами, концентратами факторов свертывания крови VIII, IX. Это представляет опасность в первую очередь для пациентов с гематологическими заболеваниями, получающих многочисленные трансфузии компонентов крови в процессе лечения, т. к. инфицирование парвовирусом В19 больных в состоянии иммуносупрессии может приводить к анемии вплоть до парциальной красноклеточной аплазии костного мозга. Также показано, что Parvovirus B19 может приводить к фульминантному гепатиту у иммунокомпрометированных больных  и развитию конгенитальной анемии, водянки плода у беременных женщин.

Активное изучение парвовируса В19 и его роли в посттрансфузионных осложнениях было начато в 1990-х гг. Проведенные исследования показали, что вирусоспецифические антитела класса IgG обнаруживаются у 29-65% доноров, класса IgM - у 1-3% доноров. При этом частота выявления ДНК Parvovirus B19 в крови доноров в зарубежных странах составляет 0,03-1,3%, в Российской Федерации - 1,0-1,9%.

Диагностика парвовирусной инфекции основана на анализе клиникоэпидемиологических данных и проведении своевременных лабораторных исследований (таблица).

Лабораторная диагностика парвовирусной инфекции (инфекционной эритемы)

Маркер

Используемые методы исследования

Вирусоспецифические антитела класса IgM

Иммунологические (иммунофер-

Вирусоспецифические антитела класса IgG

ментный анализ)

ДНК Parvovirus B19

Молекулярно-биологические(полимеразная цепная реакция)

Лабораторным подтверждением острой инфекции является выявление вирусоспецифических антител класса IgM и/или сероконверсии и значительного увеличения уровня IgG при исследовании парных образцов сыворотки или плазмы периферической крови с интервалом 7-14 дней или идентификация ДНК Parvovirus B19 в адекватном биологическом образце. Диагностическая значимость маркеров инфекции и корректная интерпретация результатов лабораторных исследований в значительной степени зависят от типа клинического материала и сроков его сбора. Выбор типа клинического материала определяется методом исследования и особенностями патогенеза заболевания. Достоверность полученных результатов во многом зависит от соблюдения условий транспортирования и хранения образца.

В последние годы основную роль в лабораторной диагностике заболевания отводят косвенным методам, направленным на обнаружение вирусоспецифических антител к антигенам Parvovirus B19, с использованием иммунологических методик, преимущественно ИФА. К ограничениям к такого способа диагностики относятся:

  • возможность получения ложноотрицательных результатов при проведении исследования образцов сыворотки или плазмы периферической крови, полученных в инкубационный период заболевания, для которого характерно отсутствие вирусоспецифических антител классов IgM, IgG или их выработка на низком недетектируемом для современных диагностических наборов реагентов уровне - период “серологического окна”;
  • возможность получения ложноположительных результатов, обусловленных наличием в тестируемых образцах сыворотки или плазмы периферической крови ревматоидного фактора, перекрестнореагирующих антител класса IgM к антигенам вируса Эпштейна - Барр, неспецифических антител класса IgM при поликлональной стимуляции В-клеток. Для исключения представленных ограничений широко используются прямые методы диагностики - молекулярно-биологические методы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяющие выявлять ДНК Parvovirus B19, что существенно повышает чувствительность диагностики в целом. Рекомендуемым материалом для исследования являются образцы плазмы крови. Возможно проведение исследования других видов биологического материала. Однако при исследовании донорской крови тестирование образцов плазмы крови или их пулов более целесообразно.

В настоящее время в Российской Федерации согласно постановлению Правительства РФ от 31.12.2010 № 1230 “Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови, необходимых для применения и исполнения технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии” обязательным является скрининг, направленный на выявление маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов B и C, возбудителя сифилиса. Однако многочисленные научно-исследовательские работы свидетельствуют о необходимости тестирования донорской крови, переливаемой пациентам, находящимся в состоянии иммуносупрессии, на наличие Parvovirus B19. При исследовании донорской крови и ее компонентов на маркеры возбудителей гемотрансмиссивных инфекций (вирусы иммунодефицита человека, гепатитов B и C, возбудитель сифилиса) используют иммунологические и молекулярно-биологические методы. При этом молекулярнобиологические исследования проводятся дополнительно (до, после, одновременно) к обязательным иммунологическим. Данный подход недопустим при оценке вирусной безопасности гемотрансфузий относительно парво- вируса В19. Это связано в первую очередь с тем, что при виремии, когда вирусоспецифические антитела еще отсутствуют или находятся на низком недетектируемом уровне, парвовирус В19 может присутствовать в крови в очень высокой концентрации - до 1012 МЕ/мл и при пулировании сотен тысяч плазм от различных доноров для промышленного изготовления факторов коагуляции и других продуктов достаточно одного положительного образца для заражения всего объема. Также необходимо учитывать, что, с одной стороны, выявление вирусоспецифических антител не подтверждает наличие Parvovirus B19 в крови, с другой стороны, данный вирус может длительно (до года) сохраняться в крови на уровне 100-1000 МЕ/мл в отсутствие каких-либо клинических симптомов.

Банки крови США, Германии, Австрии, Великобритании осуществляют исследование донорской крови на наличие Parvovirus B19. Согласно рекомендациям Управления по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (US Food and Drug Administration) и Европейской фармакопеи (European Pharmacopoeia) производственные пулы донорской плазмы для фракционирования не должны содержать ДНК Parvovirus В19 в концентрации, превышающей установленный уровень инфекционности, равный 104 МЕ/мл.

В Российской Федерации необходимость проведения скрининга донорской крови, направленного на выявление Parvovirus B19, была показана в исследованиях, проведенных ФБУН “Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной” Роспотребнадзора совместно с Нижегородским предприятием по производству бактериальных препаратов “ИмБио” Роспотребнадзора и Нижегородской областной станцией переливания крови в 2009 г., и в дальнейшем подтверждена данными, полученными в результате совместной работы ФГБУ “Гематологический научный центр” Минздравсоцразвития России, ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора и Чеченской республиканской станцией переливания крови в 2010 г.. Проведенные методом ПЦР исследования выявили от 0,3 до 0,5% образцов донорской крови, заготовленной для трансфузий и переработки, с потенциально опасной для инфицирования реципиентов вирусной нагрузкой ДНК Parvovirus В19/мл. Показано, что в период виремии выявить доноров, инфицированных парвовирусом В19, возможно только исключительно при помощи молекулярно-биологических методов, т. к. иммунологические методы в данный период неинформативны.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о целесообразности проведения скрининга донорской крови для выявления ДНК Parvovirus В19 с целью предотвращения гемотрансмиссивного инфицирования и снижения потенциального риска заражения.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
×
Гость, Вы выиграли доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»!

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.