Использование молекулярно-биологических методов для обнаружения парвовируса В19 в донорской крови

10

Парвовирусная инфекция (парвовирусная инфекция В19, инфекционная эритема, “синдром отшлепанных щек”, “пятая болезнь”) - широко распространенное антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое пар- вовирусом В19 (Parvovirus B19), характеризующееся широким спектром клинических проявлений, зависящих от иммунного и гематологического статуса человека. Регистрируется в виде эпидемических и спорадических вспышек, чаще в зимний и весенний периоды, преимущественно у детей в возрасте от 6 до 15 лет, хотя заболеванию подвержены абсолютно все возрастные группы. Эпидемические подъемы отмечаются с интервалом в 3-4 года, при котором два года с высоким уровнем заболеваемости сменяются двумя годами с пониженным уровнем.

Первые упоминания о заболевании появились в XIX в., когда A. Tscha- mer (1886) и впоследствии G. Sticker (1899) описали клиническую картину инфекционной эритемы. Этиология заболевания оставалась неизвестной длительное время. В 1975 г. в Лондоне Y.E. Cossart с коллегами при исследовании с помощью электронной микроскопии крови доноров с ложноположительной реакцией на HBsAg обнаружили мелкие изометрические частицы диаметром 23 нм. Название вирусу было дано с учетом его размера (parvum - маленький) и номера образца сыворотки крови на панели, где он впервые был обнаружен, - В19. В 1981-1983 гг. J. Pattison с соавт. установили этиологическую роль Parvovirus B19 в развитии преходящего апластического криза у детей с серповидноклеточной анемией. В 1985 г. во время вспышки в Великобритании была выявлена связь между парвовирусом В19 и развитием инфекционной эритемы у детей. В этом же году была подтверждена связь между Parvovirus B19 и развитием артропатии. В 1995 г. Parvovirus B19 был отнесен к роду Erythrovirus.

Парвовирус В19 - ДНК-содержащий вирус рода Erythrovirus семейства Parvoviridae. Вирион Parvovirus B19 представляет собой икосаэдриче- ский нуклеокапсид диаметром около 20-25 нм с линейной одноцепочечной геномной ДНК длиной 5,4 тыс. оснований положительной или отрицательной полярности. В состав вириона входят два структурных (VP1, VP2) и один неструктурный (NS1) полипептидных протеина. Parvovirus B19 чувствителен к ультрафиолетовому излучению, однако высокоустойчив к действию физических и химических факторов: не разрушается в кислой среде, сохраняет инфекционность при температуре 60 °С до 12 ч. Парвовирус В19 обладает тропизмом к клеткам-предшественникам эритроцитов в красном костном мозге, селезенке и гепатоцитам плода, репродуцируется в них, вызывая лизис. Тропизм к клеткам данного ряда обусловлен специфическим связыванием Parvovirus B19 с клеточным рецептором Р-антигеном, облегчающим проникновение вируса внутрь клеток. Лица, генетически не экспрессирующие Р-антиген, устойчивы к заражению.

Источником заболевания является человек как с острой, так и с хронической инфекцией. Наиболее контагиозны больные в период виремии (до момента появления сыпи), а также пациенты с периодическими апластическими кризами. Пути передачи: воздушно-капельный, трансплацентарный и парентеральный. Парентеральное заражение может произойти при пересадке органов и тканей, при гемотрансфузии с донорской кровью, а также с очищенными продуктами крови - плазмой, тромбоцитами, концентратами факторов свертывания крови VIII, IX. Это представляет опасность в первую очередь для пациентов с гематологическими заболеваниями, получающих многочисленные трансфузии компонентов крови в процессе лечения, т. к. инфицирование парвовирусом В19 больных в состоянии иммуносупрессии может приводить к анемии вплоть до парциальной красноклеточной аплазии костного мозга. Также показано, что Parvovirus B19 может приводить к фульминантному гепатиту у иммунокомпрометированных больных  и развитию конгенитальной анемии, водянки плода у беременных женщин.

Активное изучение парвовируса В19 и его роли в посттрансфузионных осложнениях было начато в 1990-х гг. Проведенные исследования показали, что вирусоспецифические антитела класса IgG обнаруживаются у 29-65% доноров, класса IgM - у 1-3% доноров. При этом частота выявления ДНК Parvovirus B19 в крови доноров в зарубежных странах составляет 0,03-1,3%, в Российской Федерации - 1,0-1,9%.

Диагностика парвовирусной инфекции основана на анализе клиникоэпидемиологических данных и проведении своевременных лабораторных исследований (таблица).

Лабораторная диагностика парвовирусной инфекции (инфекционной эритемы)

Маркер

Используемые методы исследования

Вирусоспецифические антитела класса IgM

Иммунологические (иммунофер-

Вирусоспецифические антитела класса IgG

ментный анализ)

ДНК Parvovirus B19

Молекулярно-биологические(полимеразная цепная реакция)

Лабораторным подтверждением острой инфекции является выявление вирусоспецифических антител класса IgM и/или сероконверсии и значительного увеличения уровня IgG при исследовании парных образцов сыворотки или плазмы периферической крови с интервалом 7-14 дней или идентификация ДНК Parvovirus B19 в адекватном биологическом образце. Диагностическая значимость маркеров инфекции и корректная интерпретация результатов лабораторных исследований в значительной степени зависят от типа клинического материала и сроков его сбора. Выбор типа клинического материала определяется методом исследования и особенностями патогенеза заболевания. Достоверность полученных результатов во многом зависит от соблюдения условий транспортирования и хранения образца.

В последние годы основную роль в лабораторной диагностике заболевания отводят косвенным методам, направленным на обнаружение вирусоспецифических антител к антигенам Parvovirus B19, с использованием иммунологических методик, преимущественно ИФА. К ограничениям к такого способа диагностики относятся:

  • возможность получения ложноотрицательных результатов при проведении исследования образцов сыворотки или плазмы периферической крови, полученных в инкубационный период заболевания, для которого характерно отсутствие вирусоспецифических антител классов IgM, IgG или их выработка на низком недетектируемом для современных диагностических наборов реагентов уровне - период “серологического окна”;
  • возможность получения ложноположительных результатов, обусловленных наличием в тестируемых образцах сыворотки или плазмы периферической крови ревматоидного фактора, перекрестнореагирующих антител класса IgM к антигенам вируса Эпштейна - Барр, неспецифических антител класса IgM при поликлональной стимуляции В-клеток. Для исключения представленных ограничений широко используются прямые методы диагностики - молекулярно-биологические методы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяющие выявлять ДНК Parvovirus B19, что существенно повышает чувствительность диагностики в целом. Рекомендуемым материалом для исследования являются образцы плазмы крови. Возможно проведение исследования других видов биологического материала. Однако при исследовании донорской крови тестирование образцов плазмы крови или их пулов более целесообразно.

В настоящее время в Российской Федерации согласно постановлению Правительства РФ от 31.12.2010 № 1230 “Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови, необходимых для применения и исполнения технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии” обязательным является скрининг, направленный на выявление маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов B и C, возбудителя сифилиса. Однако многочисленные научно-исследовательские работы свидетельствуют о необходимости тестирования донорской крови, переливаемой пациентам, находящимся в состоянии иммуносупрессии, на наличие Parvovirus B19. При исследовании донорской крови и ее компонентов на маркеры возбудителей гемотрансмиссивных инфекций (вирусы иммунодефицита человека, гепатитов B и C, возбудитель сифилиса) используют иммунологические и молекулярно-биологические методы. При этом молекулярнобиологические исследования проводятся дополнительно (до, после, одновременно) к обязательным иммунологическим. Данный подход недопустим при оценке вирусной безопасности гемотрансфузий относительно парво- вируса В19. Это связано в первую очередь с тем, что при виремии, когда вирусоспецифические антитела еще отсутствуют или находятся на низком недетектируемом уровне, парвовирус В19 может присутствовать в крови в очень высокой концентрации - до 1012 МЕ/мл и при пулировании сотен тысяч плазм от различных доноров для промышленного изготовления факторов коагуляции и других продуктов достаточно одного положительного образца для заражения всего объема. Также необходимо учитывать, что, с одной стороны, выявление вирусоспецифических антител не подтверждает наличие Parvovirus B19 в крови, с другой стороны, данный вирус может длительно (до года) сохраняться в крови на уровне 100-1000 МЕ/мл в отсутствие каких-либо клинических симптомов.

Банки крови США, Германии, Австрии, Великобритании осуществляют исследование донорской крови на наличие Parvovirus B19. Согласно рекомендациям Управления по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (US Food and Drug Administration) и Европейской фармакопеи (European Pharmacopoeia) производственные пулы донорской плазмы для фракционирования не должны содержать ДНК Parvovirus В19 в концентрации, превышающей установленный уровень инфекционности, равный 104 МЕ/мл.

В Российской Федерации необходимость проведения скрининга донорской крови, направленного на выявление Parvovirus B19, была показана в исследованиях, проведенных ФБУН “Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной” Роспотребнадзора совместно с Нижегородским предприятием по производству бактериальных препаратов “ИмБио” Роспотребнадзора и Нижегородской областной станцией переливания крови в 2009 г., и в дальнейшем подтверждена данными, полученными в результате совместной работы ФГБУ “Гематологический научный центр” Минздравсоцразвития России, ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора и Чеченской республиканской станцией переливания крови в 2010 г.. Проведенные методом ПЦР исследования выявили от 0,3 до 0,5% образцов донорской крови, заготовленной для трансфузий и переработки, с потенциально опасной для инфицирования реципиентов вирусной нагрузкой ДНК Parvovirus В19/мл. Показано, что в период виремии выявить доноров, инфицированных парвовирусом В19, возможно только исключительно при помощи молекулярно-биологических методов, т. к. иммунологические методы в данный период неинформативны.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о целесообразности проведения скрининга донорской крови для выявления ДНК Parvovirus В19 с целью предотвращения гемотрансмиссивного инфицирования и снижения потенциального риска заражения.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×