text
Портал для медицинских работников

Хроматография в лабораторной диагностике анаэробной неклостридиальной инфекции

  • 15 марта 2012
  • 116

Облигатные неспорообразующие анаэробы представляют собой большую сборную группу условно-патогенных микробов, относящихся таксономически к различным родам и семействам. Среди них есть как грамположитель- ные, так и грамотрицательные кокки, палочки, извитые и ветвящиеся формы. Большинство видов анаэробов являются представителями нормальной микрофлоры организма человека. Причем анаэробы доминируют в микробиоте всех биотопов организма человека. Так, в ротовой полости соотношение анаэробы - аэробы составляет 10:1, во влагалище - 100:1, а в толстой кишке доходит до 1000:1. Как все представители нормальной микрофлоры организма, анаэробы выполняют целый ряд жизненно важных функций, важнейшей из которых является обеспечение колонизационной резистентности организма. Однако при целом ряде патологических состояний организма, ведущих к снижению иммунного статуса, анаэробы, как и все условно-патогенные микробы, приобретают способность покидать свои нормальные биотопы на поверхности кожных покровов и слизистых оболочек, транслоцироваться через эти покровы, причем даже неповрежденные, попадать во внутреннюю стерильную среду организма и колонизировать ее, что ведет к развитию воспаления. Таким образом, анаэробная неклостридиальная инфекция (АНИ) развивается у иммунокомпрометированных лиц как эндогенная оппортунистическая инфекция. В большинстве случаев АНИ носит характер смешанной анаэробно-аэробной инфекции вследствие очень низкой патогенности анаэробов. Поскольку анаэробы являются доминирующей микрофлорой организма в норме, то и при гнойно-воспалительных заболеваниях (ГВЗ) различной локализации они также преобладают. Наибольшее клиническое значение анаэробы играют при ГВЗ челюстно-лицевой области, женской репродуктивной сферы и абдоминальной патологии.

Бактериологическое исследование для определения анаэробных бактерий длительно, трудоемко и дорого. Время с момента доставки ана- лита в микробиологическую лабораторию до получения полного разверну того ответа составляет от 7 до 10 суток, а иногда и более, что абсолютно не удовлетворяет требованиям клиницистов. Особенно остро эта проблема стоит в тех клиниках, где средняя продолжительность пребывания в стационаре больных с острыми ГВЗ составляет от 7 до 14 суток. Эффективное лечение ГВЗ требует быстрой индикации патогена и его идентификации как аэроба или анаэроба; эти данные необходимы для выбора адекватной антибактериальной терапии и решения вопроса о способе и объеме хирургического вмешательства. Между тем ответ из бактериологической лаборатории обычно приходит к моменту выписки больного или же после его выписки, когда потребность в нем уже отпадает. Для клинициста гораздо важнее иметь ориентировочный ответ о наличии или отсутствии анаэробов в аналите в день поступления больного в стационар, чем полный развернутый ответ на 7-10-е сутки.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

К числу экспресс-методов микробиологической диагностики АНИ следует отнести физико-химические методы анализа химического состава микробной клетки и продуктов ее метаболизма. Одним из таких методов является газовая хроматография (ГХ) и масс-спектрометрия (МС). Использование ГХ с целью экспресс-диагностики АНИ основано на индикации в биологических пробах больных ГВЗ специфических продуктов метаболизма анаэробых бактерий - жирных кислот (ЖК) (масляная, пропионовая, валериановая, изовалериановая и др.), которые служат молекулярными маркерами наличия анаэробов.

Бактериологические лаборатории, занимающиеся изучением анаэробов, используют ГХ и МС по следующим направлениям :

  • индикация анаэробов в биологическом материале (гной, ликвор, кровь и т. д.) на основе определения молекулярных маркеров;
  • хемотаксономия и классификация анаэробов. В определителе бактерий Берджи большинство описаний родов включает конечные продукты метаболизма как критерии для помещения микробов в определенный род и вид;
  • видовая идентификация анаэробов, основанная на многокомпонентном анализе всех продуктов метаболизма бактериальной клетки и сравнении полученного хроматографического профиля с типовым;
  • изучение патогенетических механизмов взаимодействия микроба и организма на молекулярном уровне, что позволяет судить о степени реального участия анаэробов в патологическом процессе и об эффективности проводимого лечения;
  • ускоренное определение чувствительности анаэробов к химиотерапевтическим препаратам.

Индикация анаэробов

Наибольшее распространение ГХ получила при экспресс-диагностике АНИ. Высокоспецифичными конечными продуктами метаболизма углеводов у анаэробов являются ЖК - короткоцепочечные ЖК (С27) и длинноцепочечные кислоты. Индикация в биоматериале (гной, кровь, ликвор, моча и др.) ЖК с помощью ГХ является убедительным доказательством анаэробной этиологии ГВЗ. Методом ГХ технически более просто определять короткоцепочечные ЖК. Молекулярными маркерами анаэробов являются изомасляная, масляная, изовалериановая, валериановая, изокапроновая, капроновая, гексановая, каприловая кислоты.

Методика подготовки пробы к ГХ-анализу и ее последующий анализ просты, хорошо воспроизводимы и занимают 30-50 мин от момента доставки биоматериала до получения ответа. При подготовке пробы к ГХ анализу широкое распространение в лабораториях получили методики жидкостной либо газовой (парофазный анализ) экстракции летучих ЖК из аналита. Методы жидкостной и газовой экстракции одинаково приемлемы в лабораторной практике, но парофазный анализ используется исключительно в целях экспресс-диагностики АНИ.

Исследование выполняют на газовых хроматографах с использованием хроматографических стеклянных набивных колонок длиной 2 м, диаметром 3 мм, заполненных 15% раствором полидиэтиленсукцината (Chemapol), нанесенного на хромосорб WAW-G-MDS (Supelco). Определение проводится в изотермическом режиме при температуре 190 °С. Детектор - пламенно-ионизационный, газ-носитель - азот. Чувствительность метода - 10-6 г/л. Время проведения анализа - 40-50 мин. Идентификацию ЖК осуществляют по относительному времени удерживания, для сравнения используют аналитические стандарты ЖК (Alltech АТ-1000). Для получения более подробной информации о метаболической активности присутствующих в биоматериале микробов определяют длинноцепочечные ЖК, которые переводят в летучие производные, например в метиловые эфиры Наличие в биоматериале длинноцепочечных ЖК также является убедительным доказательством анаэробной этиологии ГВЗ. Анализ метиловых эфиров ЖК необходим, если в пробе отсутствуют летучие ЖК или определяется только уксусная кислота.

Индикация в биоматериале только уксусной или пропионовой кислот не может являться достоверным доказательством наличия анаэробов в данной пробе, т. к. эти кислоты могут продуцироваться некоторыми факультативными анаэробами, такими как Staphylococcus aureus, Esherichia coli, Proteus mirabilis, Klebsiella spp. Обнаружение в биоматериале только молочной или яблочной кислот также не может служить веским доказательством наличия анаэробов, т. к. эти кислоты являются нормальными метаболитами тканей человека.

Важное значение при индикации анаэробов приобретают ложноположительные и ложноотрицательные результаты ГХ-анализа. Под ложноположительными понимают такие результаты, когда на хроматограмме присутствуют пики ЖК, а бактериологически анаэробы выделить не удается. Возможные причины ложноположительных результатов объясняются, во-первых, ошибками на преаналитическом этапе (нарушение правил забора образца, его транспортировки, культивирования и т. п.) при исследовании на анаэробы (молекулярные маркеры присутствуют в аналите дольше, чем сами бактерии); во-вторых, массивной предшествующей антибиотикотерапией, не позволяющей выделять анаэробы из ана- лита; в-третьих, наличием в некоторых пробах очень большого количества монокультуры Staphylococcus aureus. При культивировании на бульоне in vitro S. aureus освобождает уксусную и в очень низкой концентрации - изовалериановую кислоту. Возможно, что аналогичный процесс может наблюдаться и in vivo. Staphylococcus spp. не продуцирует изовалериановой кислоты при ферментации. Предполагают, что изовалериановая кислота высвобождается стафилококками при переваривании мясного бульона и, возможно, аналогичный процесс в небольшом числе случаев имеется in vivo. Пропионовая кислота высвобождается in vivo и in vitro Е. coli, хотя эта бактерия не продуцирует ее при ферментации углеводов, аминокислот, пуринов. Механизм ее образования в бульоне неизвестен и может быть обусловлен высвобождением из компонентов среды в процессе приготовления. Имеются клинические наблюдения, подтвержденные опытами in vitro, о способности S. aureus при культивировании в жидкой питательной среде (PYG-бульон) с добавлением женского молока или при культивировании непосредственно в женском молоке образовывать пропионовую и масляную кислоты в низких концентрациях.

При массовых анализах пробы аналита с высоким содержанием летучих ЖК чередуются с образцами, в которых летучие ЖК практически отсутствуют. В таких пробах концентрация летучих ЖК может колебаться в пределах трех-четырех порядков, что нередко приводит к загрязнению пневматического дозатора, соединительных трубок, хроматографических колонок и возможности получения ложноположительного результата. Во избежание этого явления после анализа пробы с высоким содержанием летучих ЖК необходимо очистить дозатор и газоподводящие трубки от сорбированных на стенках остаточных количеств летучих примесей.

Наряду с ложноположительными результатами ГХ анализа отмечаются и ложноотрицательные, когда на хроматограмме отсутствуют пики ЖК, хотя анаэробы присутствуют в аналите и могут быть выделены при бактериологическом исследовании. Возможные причины ложноотрицательных результатов объясняются, во-первых, низкой чувствительностью катарометра (при работе на хроматографе, оснащенном детектором по теплопроводности); во-вторых, редко встречающимися в клинике случаями АНИ, вызванной анаэробами, не продуцирующими ЖК (Bacteroides corrodens, Peptoccocus magnus, Peptostreptococcus intermedius); в-третьих, очень сильным разведением биоматериала (перитонеальный диализат, промывные воды и т. п.); в-четвертых, очень низким уровнем продукции ЖК при моноинфекциях, вызванных

Bacteroides fragilis и некоторыми другими видами анаэробов; в-пятых, при смешанной аэробно-анаэробной инфекции, когда некоторые виды аэробов, входящих в состав микробных ассоциаций (например, Pseudomonas aeruginosa), могут метаболизировать ЖК, продуцируемые анаэробами. Причины ложных результатов ГХ-анализа представлены в табл. 1.

Таблица 1

Причины ложных результатов анализа методом газовой хроматографии у больных с подозрением на анаэробную неклостридиальную инфекцию

Ложноположительный результат

Ложноотрицательный результат

Ошибки преаналитического этапа

Низкая чувствительность катарометра (при работе на хроматографе, оснащенном ТПД)

Массивная предшествующая антибиотикотерапия

Наличие видов анаэробов, не продуцирующих летучие ЖК

Высокая обсемененность биологического материала стафилококками при инфекции, вызванной монокультурой Staphylococcus aureus

Очень сильное разведение биологического материала (перитонеальный диализат, промывные воды и т. п.)

Загрязнение хроматографических колонок, пневматического дозатора при проведении массовых анализов

Очень низкий уровень продукции ЖК при моноинфекции, вызванной Bacteroides fragilis и некоторыми другими видами анаэробов

Некоторые глистные инвазии

Наличие в аналите микробных ассоциаций, включающих аэробы, способные метаболизировать ЖК, продуцируемые анаэробами (например, Pseudomonas aeruginosa)

Хемотаксономия и классификация анаэробов

Хемотаксономия - учение о химических свойствах живых организмов и об использовании химических критериев в их классификации и идентификации. Хемотаксономия основана на химических свойствах микробов - распределении аминокислот, сахаров, липидов, белков и других веществ как в целой бактериальной клетке, так и в части клетки или на продуктах ферментации и ферментах бактериальной клетки. Хемотаксономия позволяет автоматизировать методы идентификации микробов. Она позволяет дать лучшую классификацию бактерий, определяя степень корреляции между ними. Хемотаксономия использует физико-химические методы анализа живых организмов, хроматографию, масс-спектрометрию, электрофорез, а также классические методики таксономии - изучение ферментативных и антигенных свойств, фаготипирование. Наиболее часто используются анализ ЖК с помощью ГХ и исследование белков клеточной стенки с помощью электрофореза.

Спектр конечных продуктов метаболизма анаэробов включен в Bergey’s manual. Деление семейств на роды в ряде случаев основывается прежде всего на конечных продуктах метаболизма. Внутри семейства Bacteroidaceae бактерии, продуцирующие масляную кислоту без изомасляной или изовалериановой кислот, классифицируют как члены рода Fusobacterium, а не продуцирующие масляную кислоту вообще или продуцирующие ее вместе с изомасляной и изовалериановой кислотами помещаются в род Bacteroides. ГХ-исследования конечных продуктов метаболизма используют для дифференциации группы В. oralis от группы В. fragilis, т. к. только бактероиды группы В. fragilis продуцируют пропионовую кислоту. АХ. Coykendall в 1980 г. на основании способности оральных штаммов В. asaccharolyticus продуцировать фенилуксусную кислоту, которую в отличие от неоральных изолятов можно определить с помощью ГХ, предложил выделить оральные штаммы В. asaccharolyticus в новый вид Prevotella gingivalis, поскольку различия метаболизма между оральными и неоральными штаммами коррелировали и с их генетическими различиями.

Идентификация анаэробов

Идентификация анаэробов в биоматериале методом ГХ в настоящее время невозможна. С применением ГХ можно до вида идентифицировать анаэробы, выделенные в чистой культуре. Для этого наиболее приемлемым является сочетание ГХ-МС и компьютерного анализа, позволяющее проводить многокомпонентный анализ всех продуктов метаболизма бактериальной клетки и ее фрагментов. ГХ не позволяет абсолютно идентифицировать разделяемые соединения в исследуемых образцах. Если требуется абсолютно точная идентификация соединений, разделенных методами ГХ, применяют спектрометрические методы, включающие МС. Для этого используется непрерывная система - газовый хроматограф и масс-спектрометр, которая дает возможность просканировать и записать одновременно с хроматограммами и масс-спектры разделенных соединений. Дополнение времени удерживания соединений их масс-спектрами позволяет безошибочно идентифицировать все соединения, входящие в состав сложных биоорганических смесей, и определять весь набор конечных продуктов метаболизма анаэробов: ЖК, токсические метаболиты, углеводные компоненты и т. д.

ГХ-МС исследования выполняются на системах с масс-селективным детектором и специальной химической станцией для идентификации выявленных соединений. Идентификацию соединений и обработку данных проводят на ЭВМ ГХ-МС системы типа НР-1000. Для идентификации соединений используют спектральные библиотеки Nist и Wiley.

Данные многокомпонентного анализа конечных продуктов метаболизма анаэробов вводятся в ЭВМ для сравнения с библиотекой типовых профилей конечных продуктов метаболизма, и таким образом определяется вид выделенной культуры. Для проведения многокомпонентного анализа рекомендуется использовать капиллярные колонки и программируемый режим температуры. В настоящее время ввиду высокой стоимости систем для ГХ-МС идентификация анаэробов на основе многокомпонентного анализа продуктов метаболизма экономически не всегда целесообразна.

Перспективно сочетание ГХ для проведения ориентировочной идентификации с классическими микробиологическими методами исследования.

Изучение патогенетических механизмов взаимодействия микроба и организма, мониторинг эффективности проводимого лечения

Высокая чувствительность и хорошая воспроизводимость позволяют контролировать изменение содержания ЖК и токсических метаболитов в биологических жидкостях, а также тканях организма в процессе антибактериальной терапии. ГХ дает возможность определить качественный и количественный состав продуктов метаболизма, свидетельствуя не только о наличии анаэробов, но и об их активности, степени реального участия в развитии патологического процесса, а также позволяет прогнозировать течение ГВЗ и судить об эффективности проводимого лечения.

Ряд метаболитов анаэробов (фенилуксусная, пропионовая, масляная, янтарная, валериановая ЖК) в анаэробных условиях ингибируют хемотаксис гранулоцитов человека, причем больший эффект достигается при более высоких концентрациях кислот. Исключение составляет лишь фенилуксусная кислота, которая действует как ингибитор только в низких концентрациях, а в высоких стимулирует хемотаксис. Это свидетельствует о том, что короткоцепочечные ЖК играют роль факторов патогенности анаэробов, действуя как потенциальные лейкотоксины. Аналогичным действием обладают и некоторые длинноцепочечные ЖК. Янтарная кислота - побочный продукт метаболизма бактероидов - подавляет респираторный взрыв нейтрофилов путем снижения внутриклеточного рН, которого достаточно для объяснения необратимого повреждения респираторного взрыва нейтрофилов. ЖК проявляют свое ингибирующее действие (по крайней мере отчасти) путем уменьшения внутриклеточного рН. ЖК анаэробов оказывают воздействие и на тромбоциты, что ведет к нарушению их агрегации и может явиться причиной расстройств микроциркуляции. Одним из факторов вирулентности пропионовых бактерий является липолизин, который приводит к освобождению ЖК, вызывающих типичный воспалительный процесс “Common acne”.

ГХ-МС позволяет непосредственно определять токсические соединения в биологических жидкостях и тканях организма. Методом ГХ-МС в биоптатах гнойных ран, пунктатах абсцессов легких и печени, выпоте брюшной полости при перитонитах обнаруживаются летучие метаболиты анаэробов. ГХ-МС определение ЖК и токсических метаболитов анаэробов в крови показывает, что снижение концентрации ЖК и токсических метаболитов в крови больных с АНИ соответствует улучшению их состояния, в то время как резкое увеличение спектра и количества метаболитов анаэробов свидетельствует о тяжести процесса и является прогностически неблагоприятным признаком.

Информативность ГХ показателей выше традиционных клинико-лабораторных показателей. Отмечается положительная корреляционная связь между клиническим течением заболевания и метаболической активностью анаэробов, между клиническим течением и накоплением в воспалительном очаге ЖК и токсических метаболитов.

Метаболическая активность анаэробов в очаге воспаления отражает степень их реального участия в развитии патологического процесса, что может быть использовано для мониторинга степени тяжести течения ГВЗ и эффективности проводимого лечения.

Послойное интраоперационное ГХ-МС исследование мягких тканей с определением содержания в них ЖК и токсических метаболитов анаэробов приобретает особое значение для мониторинга течения ГВЗ и эффективности проводимого лечения у тяжелых хирургических больных.

АНИ мягких тканей является одной из актуальных проблем современной хирургии. Несмотря на крупные достижения в области диагностики и лечения ран и раневой инфекции, АНИ мягких тканей по-прежнему остается сложной для диагностики и лечения проблемой. Для АНИ мягких тканей характерны быстрое развитие патологического процесса, высокая интоксикация за счет продукции ЖК и токсических метаболитов, как микробных, так и тканевых, поражение всех органов и систем организма, развитие полиорганной недостаточности, что соответствует основным диагностическим критериям сепсиса по классификации ACCP/SCCM 1992 г. Быстрое развитие АНИ и сепсиса заставляет хирургов постоянно искать новые быстрые и эффективные диагностические методы, позволяющие определить развитие АНИ и септических осложнений.

Ускоренное определение чувствительности анаэробов к химиотерапевтическим препаратам

В настоящее время простых, надежных и удобных способов определения чувствительности анаэробов к химиотерапевтическим препаратам не разработано.

Диско-диффузионный метод и метод серийных разведений, которые широко используются для определения чувствительности аэробных бактерий, мало приемлемы для анаэробов.

Метод серийных разведений, хотя и позволяет определять минимальную подавляющую концентрацию химиопрепаратов, действующих на анаэробы, однако является длительным и трудоемким. Он может быть использован только в исключительных случаях, при индивидуальном подборе антимикробной химиотерапии тяжелым больным, но не пригоден для массовых рутинных исследований. Применение диско-диффузионного метода для определения чувствительности анаэробов имеет ряд недостатков, ограничивающих его возможности. Во-первых, этот метод является качественным, что не позволяет получить количественную или полуколичественную оценку чувствительности изучаемых штаммов анаэробов к химиопрепаратам. Во-вторых, до сих пор еще не разработаны критерии для оценки чувствительности анаэробов к антибиотикам с помощью диско-диффузионного метода, как это сделано для аэробов; для этой цели бактериологи вынуждены ориентировочно пользоваться критериями, разработанными для аэробов. В-третьих, при определении чувствительности в анаэробных условиях диаметры зон задержки роста у ряда антибиотиков могут изменяться за счет наличия углекислоты и других факторов в бескислородной атмосфере. Кроме того, на определение чувствительности анаэробов с помощью диско-диффузионного метода затрачивается обычно двое-трое суток, что еще больше продлевает срок бактериологического исследования и абсолютно не удовлетворяет потребностям клиники.

Разработан метод ГХ определения изменений метаболизма анаэробов под действием химиотерапевтических препаратов, который позволяет использовать ГХ-анализ для оценки степени чувствительности исследуемого анаэроба к тестируемым антимикробным препаратам. Регистрируют исходный спектр метаболитов, после чего в каждую пробирку с опытной пробой помещают стандартные диски с химиотерапевтическими препаратами, причем количество дисков подбирается таким образом, чтобы в пробе создавалась концентрация химиотерапевтического препарата, равная его концентрации в сыворотке крови при введении обычных терапевтических доз (табл. 2).

Таблица 2

Концентрации антибактериальных препаратов, используемые для определения чувствительности анаэробных микроорганизмов методом газовой хроматографии

Содержание

Количество

Конечные

Препарат

препарата в диске, мкг

дисков на 5 мл среды

концентрации антибиотиков, мкг/мл

1

2

3

4

Пенициллин G

6 (10 ЕД)

1

1,2 (2 ЕД)

Ампициллин

10

2

4

Карбенициллин

100

3

60

Цефалексин

30

2

12

Левомицетин

30

2

12

Тетрациклин

30

1

6

Эритромицин

15

1

3

Клиндамицин*

2

4

1,6

Метронидазол*

80

1

16

* Диски изготавливаются в лаборатории или используются импортные диски.

Пробы инкубируют в термостате в анаэробных условиях в течение 12 ч, после чего повторно определяют спектр метаболитов и сравнивают между собой полученные спектры метаболитов.

Изменение спектра конечных продуктов метаболизма анаэробов под действием химиотерапевтического препарата по сравнению с контролем - культурой, не подвергшейся воздействию антибиотиков, является отражением чувствительности микробов к тестируемому препарату и позволяет объективно судить о степени чувствительности микроба по сравнению с таким известным критерием, как диаметр зоны задержки роста. Характерными изменениями спектра метаболитов анаэробов под воздействием химиотерапевтических препаратов являются, во-первых, выпадение большинства пиков метаболитов, продуцируемых бактериальной клеткой; во-вторых, выпадение ряда пиков метаболитов, отсутствующих в норме в контроле; в-третьих, снижение высоты и площади пиков. На хроматограмме изменения не являются равноценными. Наиболее часто отмечается снижение высоты и площади пиков, что свидетельствует о неглубоких обратимых изменениях метаболизма бактерий под действием химиотерапевтического препарата, который замедляет метаболические процессы в бактериальной клетке. Накопление метаболитов в среде культивирования идет более медленно, чем у контрольной культуры, не подвергшейся его воздействию. Чем больше уменьшается площадь хроматографических пиков, тем выше чувствительность микроба к тестируемому химиотерапевтическому препарату.

Наиболее значительные изменения ГХ профилей анаэробов отмечаются при действии на культуры высокоэффективных антианаэробных препаратов, таких как метронидазол и клиндамицин. Метронидазол вызывает выпадение большей части ГХ пиков метаболитов, что свидетельствует о грубых, необратимых повреждениях метаболизма бактерий. Хроматограммы штаммов, высокочувствительных к метронидазолу, напоминают изоэлектрическую линию. Подобных изменений ГХ профиля культур анаэробов под действием клиндамицина не наблюдается. Для повреждающего действия клиндамицина характерны изменения метаболизма клетки в виде “инверсии” хроматограммы, т. е. наряду с уменьшением высоты и площади и полным выпадением ряда нормальных пиков на хроматограмме регистрируются атипичные пики.

Различия в изменениях ГХ профилей культур анаэробов, подвергшихся воздействию метронидазола и клиндамицина, связывают с различным механизмом антибактериального действия этих препаратов. Метро- нидазол, восстанавливаясь в короткоживущий промежуточный продукт, ингибирует репликацию бактериальной ДНК анаэробов. Точкой приложения антимикробного действия клиндамицина в бактериальной клетке являются рибосомы, он необратимо ингибирует 50s субъединицу рибосом. Повреждение химиотерапевтическим препаратом различных структур бактериальной клетки ведет к неодинаковым изменениям метаболической активности, что и регистрируется на хроматограмме.

Для оценки степени чувствительности анаэробов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам используют отношение суммарных площадей хроматографических пиков опытного и контрольного образцов (в %), обозначаемое TPAR.

Изменение ГХ профиля метаболитов анаэробов под действием антимикробных химиотерапевтических препаратов позволяет судить о степени чувствительности микробов к данному препарату. Высокая чувствительность (I степень) определялась при показателе TPAR менее 20%; средняя (II степень) - при показателе TPAR от 21 до 40%; низкая (III степень) - при показателе TPAR от 41 до 70%; устойчивость (IV степень) определялась при показателе TPAR больше или равном 71%. Корреляция данных ГХ способа определения чувствительности к антимикробным химиотерапевтическим препаратам и метода серийных разведений составляет 74,6-97,9%.

При воздействии химиотерапевтических препаратов изменение ГХ профиля метаболитов анаэробов позволяет судить о степени чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам. Выпадение или изменение ГХ спектра более чем на 70% указывает на высокую чувствительность, от 30 до 69% - на среднюю, менее 30% - на низкую чувствительность анаэробов к химиотерапевтическим препаратам.

ГХ находит широкое применение в анаэробной бактериологии. Метод ГХ прост по своей технике, высокочувствителен, занимает мало времени, обладает хорошей воспроизводимостью результатов. В настоящее время все большее применение он находит в клинических бактериологических и санитарно-бактериологических лабораториях. Использование ГХ для определения анаэробных бактерий сокращает время анализа, повышает его точность и надежность. В то же время метод ГХ нельзя противопоставлять традиционным микробиологическим методам. Он может стать ценным вспомогательным средством, которое будет использоваться главным образом тогда, когда традиционные методы оказываются несостоятельными или занимают слишком много времени. Развитие в будущем многоканальных хроматографических систем, связанных с хромато-масс-спектрометром и компьютером, а также создание обширной “библиотеки” метаболических профилей микробов позволит проводить прямую идентификацию анаэробных бактерий непосредственно в аналите без выделения чистой культуры. Если окажется возможным сделать эту методику рутинной, это будет означать действительный переворот в клинической микробиологической лаборатории.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×

×

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.