Новая методика измерения уровня клеточного и внеклеточного (кровезаменитель) гемоглобина

49

Уровень гемоглобина обычно используется для определения степени анемии у пациентов и долгое время измерялся при помощи колориметрических методов. Недавно появившаяся технология, которая позволяет измерять объем и концентрацию гемоглобина в эритроцитах пациента, представляет собой альтернативную клеточную методику для количественного определения уровня гемоглобина в крови. В данном исследовании нами показана точность этого нового подхода к количественному определению уровня гемоглобина. Нами установлено, что сочетание клеточного и колориметрического способов определения гемоглобина позволяет очень точно дифференцировать клеточно-ассоциированный и свободный гемоглобин в широком диапазоне уровней гемоглобина. Поскольку в настоящее время нет автоматизированных методов диффе- ренцировки клеточно-ассоциированного и свободного гемоглобина, описанная нами методика может применяться для контроля свободного гемоглобина и уровней заменителей гемоглобина в крови пациентов, которым переливали такую кровь.

Введение

Уровень гемоглобина обычно используется для определения степени анемии у пациентов. Гемоглобин (Hb, г/дл), важный параметр клинического анализа крови, определяется автоматическими гематологическими анализаторами при помощи колориметрических методов с очень высокой точностью. Исключение составляют образцы крови с лейкоцитозом, некоторые образцы крови с гиперлипемией и определенные образцы пациентов с гемоглобинопатией, эритроциты которых нельзя полностью лизировать. При помощи новой методики можно измерить объем (V) и концентрацию гемоглобина (HC) в эритроцитах пациента, и на основе этих двух параметров вычислить содержание гемоглобина в эритроцитах пациента (CH = V х HC). Таким образом, средняя концентрация гемоглобина в эритроците (Corpuscular Hemoglobin Concentration Mean, CHCM) напрямую измеряется путем анализа клетки за клеткой. Для сравнения, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците вычисляют на основе количества эритроцитов (RBC), среднего объема эритроцитов (MCV) и колориметрически измеренного гемоглобина (Hb) по формуле: CHCM = (Hb / (RBC х х MCV). Уровень клеточного гемоглобина определяется по формуле Hb = = CHCM х RBC х MCV.

В данном исследовании мы оценивали точность такой методики клеточного определения уровня гемоглобина, сравнивая полученные результаты с данными колориметрического анализа образцов крови, лизированных реагентами. Так как новый метод позволяет определить количество гемоглобина только в эритроцитах (Hbcell), в то время как колориметрический метод определения гемоглобина (Hbtotai) измеряет гемоглобин одновременно в эритроцитах (HbceU) и плазме (Hbexcen), комбинация этих методов позволила нам точно дифференцировать клеточно-ассоциированный гемоглобин от свободного гемоглобина в образцах крови. Данный подход особенно применим для контроля уровней заменителей гемоглобина (Hbexcell) в крови пациентов, которым переливали такую кровь.

Образцы крови

Были проанализированы свежие образцы крови с антикоагулянтом К3-ЭДТА от 186 здоровых людей и 1707 пациентов. Все образцы были проанализированы в течение 4 ч после взятия крови. Образцы крови были взяты в т. ч. у людей с нарушениями эритроцитов, например железодефицитной анемией, талассемией и серповидно-клеточной анемией. Заменитель гемоглобина (PEG Hb) (концентрация - 5,4 г/дл) был предоставлен компанией Enzon Corporation (Пискатавэй, Нью-Джерси).

Двухмерный анализ эритроцитов

Двухмерный анализ эритроцитов (RBC) при помощи гематологической системы ADVIA 2120i (Сименс Хелзкеа Диагностикс Инк., США) представляет собой оптический метод клеточного анализа, при котором одновременно определяются объем и коэффициент преломления отдельных эритроцитов правильной сферической формы путем измерения двух углов светорассеяния лазера. Два значения рассеяния преобразуются в значения объема (размер клеток) и коэффициента преломления (плотность клеток). Система ADVIA 2120i автоматически вычисляет два значения гемоглобина: колориметрический Hb (Hbtotal) и клеточный Hb (Hbcell) = RBC х х MCV х CHCM.

На цитограмме эритроцитов (слева) показаны значения малого и большого углов рассеяния отдельных эритроцитов. Карта рассеяния охватывает значения объема в пределах от 30 до 180 фл и коэффициента преломления - от 1,38 до 1,44. Измеренное значение коэффициента преломления используется для вычисления концентрации гемоглобина в отдельных эритроцитах. Справа приведены гистограммы объема, концентрации гемоглобина (HC) и содержания гемоглобина (CH) в эритроцитах проанализированных образцов крови. Данные этих гистограмм используются для вычисления среднего объема эритроцитов (Mean Cell Volume, MCV), средней концентрации гемоглобина в эритроците (CHCM) и содержания гемоглобина в эритроците (Cell Hemoglobin Content Mean, CH).

Линейный регрессионный анализ значений СН и МСН, полученных при анализе 186 образцов здоровых людей и 1707 образцов пациентов, показал, что существует идеальное соответствие между значениями СН и МСН для образцов здоровых людей и пациентов.

Содержание гемоглобина в эритроците (СН), вычисленное на основе значений объема и концентрации гемоглобина в отдельных эритроцитах, точно отражает значение среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН).

Для двух отдельных образцов, отмеченных как А и В (табл. 1), значение СН, полученное в результате клеточного анализа, кажется более точным. Этот вывод основан на том, что MCHC, которая рассчитывается на основании измеренных значений гемоглобина и эритроцитов, используемых также для вычисления MCH, выходит за пределы ожидаемого физиологического диапазона от 20 до 39 г/дл. С другой стороны, значение CHCM, используемое для расчета СН, находится в пределах физиологического диапазона.

Есть четкая корреляция между значениями гемоглобина, полученными при измерении индексов эритроцитов (HbceU) и при помощи колориметрического анализа лизированных образцов крови (Hbtotal). Значение клеточного гемоглобина точно отражает содержание гемоглобина во всем образце крови.

У образцов A - G наблюдалось наибольшее расхождение значений Hbcell и Hbtotal. Все важные параметры клеток отличающихся образцов приведены в таблице 1.

Таблица 1

Клинический анализ 7 образцов крови с расхождением значений клеточного и общего гемоглобина

Образец

3*S2s

я и и о и «

«^ з

=Н О V -н

R 3

А "5 н о Н н

М- 4>

О и и

CL * И

S

а 2

mi

н

S

* ^

н

сЗ

1

MCV (фл)

MCHC (г/дл)

CHCM (г/дл)

к —

и Ё

(hi)

нэ

%'S В н л -5-

К &

и

S

A

0,42

2,49

22,1

88,6

8,4

32,2

7,5

28,4

1,86

7,13

B

5,67

2,21

22,8

102,8

43,3

31,7

44,5

32,3

9,86

7,22

C

24,91

2,91

26,5

90,8

40,9

33,0

37,1

29,9

10,80

8,70

D

14,90

3,27

28,9

88,5

39,8

31,6

35,2

27,7

11,51

9,13

E

25,43

3,19

27,3

85,8

44,1

33,9

37,9

28,8

12,06

9,28

F

15,90

5,02

42,7

84,9

37,0

31,7

31,4

26,8

15,80

13,54

G

16,30

5,07

41,9

82,7

39,5

33,1

32,7

27,1

16,55

13,88

Для 7 из 1707 проанализированных образцов расхождение между значениями вычисленного и измеренного гемоглобина составило более 2 г/дл. Например, при анализе образца А возникли проблемы колориметрического определения гемоглобина, т. к. значение гемоглобина 1,86 г/дл несопоставимо с количеством эритроцитов 2,49 х 1012/л. Кроме того, неверное значение гемоглобина получено при использовании физиологически несовместимых значений MCH и MCHC - 7,5 пг и 8,4 г/дл соответственно. С другой стороны, значения CH и CHCM (28,4 пг и 32,2 г/дл), полученные при измерении эритроцитов, физиологически совместимы. Аналогичные анализы позволили нам предположить, что значение клеточного гемоглобина, но не колориметрического гемоглобина, точно отражает уровень циркулирующего гемоглобина в 5 из 6 образцов крови (образцы B, C, D, E и G). В одном случае (образец F) нам не удалось выяснить, какое значение гемоглобина отражает действительный уровень циркулирующего гемоглобина.

Основываясь на своем опыте, мы предполагаем, что физиологически несовместимые значения MCHC (менее 20 г/дл или менее 39 г/дл), полученные при колориметрическом измерении гемоглобина, служат точным показателем неправильно измеренного значения гемоглобина.

Поскольку клеточный анализ позволяет определить только ассоциированный с эритроцитами гемоглобин (HbceU), в то время как колориметрический метод измеряет клеточно-ассоциированный гемоглобин (Hbcell) и внеклеточный гемоглобин в плазме (Hbexcell), мы изучили возможность точного определения количества внеклеточного гемоглобина в образце при использовании этих методов в комбинации.

Путем добавления соответствующих количеств кровезаменителя (PEG Hb) в цельную кровь здоровых людей подготовили и проанализировали образцы крови с различным содержанием клеточного и внеклеточного гемоглобина.

Удалось точно дифференцировать клеточный и внеклеточный гемоглобин в образцах крови, в которых неизменное содержание внеклеточного гемоглобина наблюдалось при различных количествах клеточного гемоглобина (табл. 2). Измеренные значения клеточного и внеклеточного гемоглобина находились в пределах 0,1 г/дл от ожидаемых значений в широком диапазоне уровней гемоглобина.

Комбинация клеточного и колориметрического способов измерения позволяет очень точно дифференцировать клеточный (Hbcell) и внеклеточный (Hbexcell) гемоглобин в широком диапазоне уровней заменителя гемоглобина.

Таблица2

Значения ожидаемого и измеренного значения клеточного и внеклеточного гемоглобина в образцах крови, полученных при добавлении заменителя гемоглобина фиксированной концентрации к различному количеству цельной крови

Общий гемоглобин

Клеточный гемоглобин

Внеклеточный

(г/дл)

(г/дл)

гемоглобин (г/дл)

Ожидаемый

Измеренный

Ожидаемый

Измеренный

Ожидаемый

Измеренный

5,9

5,8 ± 0,09

3,1

3,2 ± 0,05

2,8

2,6 ± 0,11

5,3

5,4 ± 0,05

2,6

2,7 ± 0,05

2,8

2,7 ± 0,08

4,8

4,9 ± 0,08

2,1

2,2 ± 0,08

2,8

2,8 ± 0,07

4,3

4,3 ± 0,08

1,5

1,7 ± 0,04

2,8

2,8 ± 0,07

3,8

3,8 ± 0,04

1,0

1,1 ± 0,05

2,8

2,8 ± 0,05

3,3

3,4 ± 0,00

0,5

0,5 ± 0,04

2,8

2,9 ± 0,05

3,0

3,2 ± 0,00

0,2

0,3 ± 0,04

2,8

2,9 ± 0,04

Выводы

Измерение объема и концентрации гемоглобина в отдельных эритроцитах представляет собой альтернативный клеточный метод количественного определения уровня гемоглобина в образцах крови.

Существует высокая корреляция между значениями клеточного и колориметрически измеренного гемоглобина.

Комбинация клеточного и колориметрического способов измерения позволяет точно дифференцировать клеточный и внеклеточный гемоглобин и может использоваться для контроля пациентов, которым переливали внеклеточный гемоглобин.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×