text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Новая методика измерения уровня клеточного и внеклеточного (кровезаменитель) гемоглобина

  • 15 апреля 2012
  • 49

Уровень гемоглобина обычно используется для определения степени анемии у пациентов и долгое время измерялся при помощи колориметрических методов. Недавно появившаяся технология, которая позволяет измерять объем и концентрацию гемоглобина в эритроцитах пациента, представляет собой альтернативную клеточную методику для количественного определения уровня гемоглобина в крови. В данном исследовании нами показана точность этого нового подхода к количественному определению уровня гемоглобина. Нами установлено, что сочетание клеточного и колориметрического способов определения гемоглобина позволяет очень точно дифференцировать клеточно-ассоциированный и свободный гемоглобин в широком диапазоне уровней гемоглобина. Поскольку в настоящее время нет автоматизированных методов диффе- ренцировки клеточно-ассоциированного и свободного гемоглобина, описанная нами методика может применяться для контроля свободного гемоглобина и уровней заменителей гемоглобина в крови пациентов, которым переливали такую кровь.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Введение

Уровень гемоглобина обычно используется для определения степени анемии у пациентов. Гемоглобин (Hb, г/дл), важный параметр клинического анализа крови, определяется автоматическими гематологическими анализаторами при помощи колориметрических методов с очень высокой точностью. Исключение составляют образцы крови с лейкоцитозом, некоторые образцы крови с гиперлипемией и определенные образцы пациентов с гемоглобинопатией, эритроциты которых нельзя полностью лизировать. При помощи новой методики можно измерить объем (V) и концентрацию гемоглобина (HC) в эритроцитах пациента, и на основе этих двух параметров вычислить содержание гемоглобина в эритроцитах пациента (CH = V х HC). Таким образом, средняя концентрация гемоглобина в эритроците (Corpuscular Hemoglobin Concentration Mean, CHCM) напрямую измеряется путем анализа клетки за клеткой. Для сравнения, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците вычисляют на основе количества эритроцитов (RBC), среднего объема эритроцитов (MCV) и колориметрически измеренного гемоглобина (Hb) по формуле: CHCM = (Hb / (RBC х х MCV). Уровень клеточного гемоглобина определяется по формуле Hb = = CHCM х RBC х MCV.

В данном исследовании мы оценивали точность такой методики клеточного определения уровня гемоглобина, сравнивая полученные результаты с данными колориметрического анализа образцов крови, лизированных реагентами. Так как новый метод позволяет определить количество гемоглобина только в эритроцитах (Hbcell), в то время как колориметрический метод определения гемоглобина (Hbtotai) измеряет гемоглобин одновременно в эритроцитах (HbceU) и плазме (Hbexcen), комбинация этих методов позволила нам точно дифференцировать клеточно-ассоциированный гемоглобин от свободного гемоглобина в образцах крови. Данный подход особенно применим для контроля уровней заменителей гемоглобина (Hbexcell) в крови пациентов, которым переливали такую кровь.

Образцы крови

Были проанализированы свежие образцы крови с антикоагулянтом К3-ЭДТА от 186 здоровых людей и 1707 пациентов. Все образцы были проанализированы в течение 4 ч после взятия крови. Образцы крови были взяты в т. ч. у людей с нарушениями эритроцитов, например железодефицитной анемией, талассемией и серповидно-клеточной анемией. Заменитель гемоглобина (PEG Hb) (концентрация - 5,4 г/дл) был предоставлен компанией Enzon Corporation (Пискатавэй, Нью-Джерси).

Двухмерный анализ эритроцитов

Двухмерный анализ эритроцитов (RBC) при помощи гематологической системы ADVIA 2120i (Сименс Хелзкеа Диагностикс Инк., США) представляет собой оптический метод клеточного анализа, при котором одновременно определяются объем и коэффициент преломления отдельных эритроцитов правильной сферической формы путем измерения двух углов светорассеяния лазера. Два значения рассеяния преобразуются в значения объема (размер клеток) и коэффициента преломления (плотность клеток). Система ADVIA 2120i автоматически вычисляет два значения гемоглобина: колориметрический Hb (Hbtotal) и клеточный Hb (Hbcell) = RBC х х MCV х CHCM.

На цитограмме эритроцитов (слева) показаны значения малого и большого углов рассеяния отдельных эритроцитов. Карта рассеяния охватывает значения объема в пределах от 30 до 180 фл и коэффициента преломления - от 1,38 до 1,44. Измеренное значение коэффициента преломления используется для вычисления концентрации гемоглобина в отдельных эритроцитах. Справа приведены гистограммы объема, концентрации гемоглобина (HC) и содержания гемоглобина (CH) в эритроцитах проанализированных образцов крови. Данные этих гистограмм используются для вычисления среднего объема эритроцитов (Mean Cell Volume, MCV), средней концентрации гемоглобина в эритроците (CHCM) и содержания гемоглобина в эритроците (Cell Hemoglobin Content Mean, CH).

Линейный регрессионный анализ значений СН и МСН, полученных при анализе 186 образцов здоровых людей и 1707 образцов пациентов, показал, что существует идеальное соответствие между значениями СН и МСН для образцов здоровых людей и пациентов.

Содержание гемоглобина в эритроците (СН), вычисленное на основе значений объема и концентрации гемоглобина в отдельных эритроцитах, точно отражает значение среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН).

Для двух отдельных образцов, отмеченных как А и В (табл. 1), значение СН, полученное в результате клеточного анализа, кажется более точным. Этот вывод основан на том, что MCHC, которая рассчитывается на основании измеренных значений гемоглобина и эритроцитов, используемых также для вычисления MCH, выходит за пределы ожидаемого физиологического диапазона от 20 до 39 г/дл. С другой стороны, значение CHCM, используемое для расчета СН, находится в пределах физиологического диапазона.

Есть четкая корреляция между значениями гемоглобина, полученными при измерении индексов эритроцитов (HbceU) и при помощи колориметрического анализа лизированных образцов крови (Hbtotal). Значение клеточного гемоглобина точно отражает содержание гемоглобина во всем образце крови.

У образцов A - G наблюдалось наибольшее расхождение значений Hbcell и Hbtotal. Все важные параметры клеток отличающихся образцов приведены в таблице 1.

Таблица 1

Клинический анализ 7 образцов крови с расхождением значений клеточного и общего гемоглобина

Образец

3*S2s

я и и о и «

«^ з

=Н О V -н

R 3

А "5 н о Н н

М- 4>

О и и

CL * И

S

а 2

mi

н

S

* ^

н

сЗ

1

MCV (фл)

MCHC (г/дл)

CHCM (г/дл)

к —

и Ё

(hi)

нэ

%'S В н л -5-

К &

и

S

A

0,42

2,49

22,1

88,6

8,4

32,2

7,5

28,4

1,86

7,13

B

5,67

2,21

22,8

102,8

43,3

31,7

44,5

32,3

9,86

7,22

C

24,91

2,91

26,5

90,8

40,9

33,0

37,1

29,9

10,80

8,70

D

14,90

3,27

28,9

88,5

39,8

31,6

35,2

27,7

11,51

9,13

E

25,43

3,19

27,3

85,8

44,1

33,9

37,9

28,8

12,06

9,28

F

15,90

5,02

42,7

84,9

37,0

31,7

31,4

26,8

15,80

13,54

G

16,30

5,07

41,9

82,7

39,5

33,1

32,7

27,1

16,55

13,88

Для 7 из 1707 проанализированных образцов расхождение между значениями вычисленного и измеренного гемоглобина составило более 2 г/дл. Например, при анализе образца А возникли проблемы колориметрического определения гемоглобина, т. к. значение гемоглобина 1,86 г/дл несопоставимо с количеством эритроцитов 2,49 х 1012/л. Кроме того, неверное значение гемоглобина получено при использовании физиологически несовместимых значений MCH и MCHC - 7,5 пг и 8,4 г/дл соответственно. С другой стороны, значения CH и CHCM (28,4 пг и 32,2 г/дл), полученные при измерении эритроцитов, физиологически совместимы. Аналогичные анализы позволили нам предположить, что значение клеточного гемоглобина, но не колориметрического гемоглобина, точно отражает уровень циркулирующего гемоглобина в 5 из 6 образцов крови (образцы B, C, D, E и G). В одном случае (образец F) нам не удалось выяснить, какое значение гемоглобина отражает действительный уровень циркулирующего гемоглобина.

Основываясь на своем опыте, мы предполагаем, что физиологически несовместимые значения MCHC (менее 20 г/дл или менее 39 г/дл), полученные при колориметрическом измерении гемоглобина, служат точным показателем неправильно измеренного значения гемоглобина.

Поскольку клеточный анализ позволяет определить только ассоциированный с эритроцитами гемоглобин (HbceU), в то время как колориметрический метод измеряет клеточно-ассоциированный гемоглобин (Hbcell) и внеклеточный гемоглобин в плазме (Hbexcell), мы изучили возможность точного определения количества внеклеточного гемоглобина в образце при использовании этих методов в комбинации.

Путем добавления соответствующих количеств кровезаменителя (PEG Hb) в цельную кровь здоровых людей подготовили и проанализировали образцы крови с различным содержанием клеточного и внеклеточного гемоглобина.

Удалось точно дифференцировать клеточный и внеклеточный гемоглобин в образцах крови, в которых неизменное содержание внеклеточного гемоглобина наблюдалось при различных количествах клеточного гемоглобина (табл. 2). Измеренные значения клеточного и внеклеточного гемоглобина находились в пределах 0,1 г/дл от ожидаемых значений в широком диапазоне уровней гемоглобина.

Комбинация клеточного и колориметрического способов измерения позволяет очень точно дифференцировать клеточный (Hbcell) и внеклеточный (Hbexcell) гемоглобин в широком диапазоне уровней заменителя гемоглобина.

Таблица2

Значения ожидаемого и измеренного значения клеточного и внеклеточного гемоглобина в образцах крови, полученных при добавлении заменителя гемоглобина фиксированной концентрации к различному количеству цельной крови

Общий гемоглобин

Клеточный гемоглобин

Внеклеточный

(г/дл)

(г/дл)

гемоглобин (г/дл)

Ожидаемый

Измеренный

Ожидаемый

Измеренный

Ожидаемый

Измеренный

5,9

5,8 ± 0,09

3,1

3,2 ± 0,05

2,8

2,6 ± 0,11

5,3

5,4 ± 0,05

2,6

2,7 ± 0,05

2,8

2,7 ± 0,08

4,8

4,9 ± 0,08

2,1

2,2 ± 0,08

2,8

2,8 ± 0,07

4,3

4,3 ± 0,08

1,5

1,7 ± 0,04

2,8

2,8 ± 0,07

3,8

3,8 ± 0,04

1,0

1,1 ± 0,05

2,8

2,8 ± 0,05

3,3

3,4 ± 0,00

0,5

0,5 ± 0,04

2,8

2,9 ± 0,05

3,0

3,2 ± 0,00

0,2

0,3 ± 0,04

2,8

2,9 ± 0,04

Выводы

Измерение объема и концентрации гемоглобина в отдельных эритроцитах представляет собой альтернативный клеточный метод количественного определения уровня гемоглобина в образцах крови.

Существует высокая корреляция между значениями клеточного и колориметрически измеренного гемоглобина.

Комбинация клеточного и колориметрического способов измерения позволяет точно дифференцировать клеточный и внеклеточный гемоглобин и может использоваться для контроля пациентов, которым переливали внеклеточный гемоглобин.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.