Пути оптимизации лабораторной диагностики инфекции, обусловленной Helicobacter pylori

18

За 30 лет, прошедшие с момента открытия Helicobacter pylori (HP) - спиралевидной бактерии, колонизирующей слизистую оболочку желудка (СОЖ), была установлена этиологическая роль этого возбудителя в развитии многих заболеваний гастродуоденальной зоны.

Вместе с тем нет сомнения в том, что такие распространенные заболевания желудка и двенадцатиперстной кишки, как язвенная болезнь и рак желудка - это не местные инфекционные патологические процессы, а общие полиэтиологические заболевания со сложным патогенезом, в развитии которых HP-инфекции принадлежит важная, но не решающая роль. Кроме того, существуют и HP-независимые формы хронического гастрита - это аутоиммунный (тип А), токсикохимический (тип С) и особые формы хронического гастрита (эозинофильный, гранулематозный, радиационный).

Хорошо известно, что HP-инфекция широко распространена во всем мире: до 60% населения земного шара инфицировано HP. Однако язвенная болезнь развивается только у 12-15% из них, дистальный рак желудка - у 1%, а мальтома желудка - лишь у 0,5%. До 70% людей, инфицированных HP, являются здоровыми (бессимптомными) бактерионосителями. Именно поэтому точная диагностика HP-инфицирования имеет важное значение, прежде всего при HP-ассоциированных хроническом гастрите, язве желудка и раке желудка, для обоснования эрадикационной терапии.

За прошедшие годы было разработано множество инвазивных и неинвазивных методов диагностики HP. Среди инвазивных методов получил признание гистологический метод определения HP в биопсийном материале (его чувствительность - 90%, специфичность - 97%). Одно время его даже называли “золотым стандартом” в диагностике HP. Особенно удобным для практических врачей оказался уреазный экспресс-тест с материалом биопсии желудка и двенадцатиперстной кишки. Для массовых эпидемиологических обследований чаще всего используют определение антител (IgG и IgA) к HР в сыворотке крови (чувствительность - 64-98,4%, специфичность - 88,4-95%).

Из неинвазивных методов диагностики HP высокую оценку получили уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной (чувствительность - 64-99%, специфичность - 75-95%), определение антигенов HP в фекалиях (чувствительность - 92-94%, специфичность - 94-97%) и определение HP методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (чувствительность - 96,7%, специфичность - 100%).

В то же время были установлены и определенные недостатки перечисленных выше тестов. Так, при определении в сыворотке крови антител к HP нельзя исключить возможность перекрестного реагирования антител. ПЦР является одним из наиболее перспективных методов лабораторной диагностики и все чаще используется при проведении научных исследований, требует специального оборудования, которым не всегда оснащены клинико-диагностические лаборатории практического звена. Уреазные тесты не обеспечивают достоверных результатов, поскольку уреазная активность присуща не только HP, но и другой мукозной микрофлоре, колонизирующей СОЖ. При цитологическом и гистологическом исследовании биопта- тов СОЖ ошибочное заключение возможно из-за близости структуры HP и некоторых других микроорганизмов, обнаруженных в желудке.

“Маастрихтский консенсус-4” по диагностике и лечению HP-ассоциированных заболеваний рекомендует для принятия решения о назначении антибактериальных и антисекреторных средств в качестве диагностических методов уреазный экспресс-тест, определение антител к HP, уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной и определение антигенов HP в фекалиях (HpSA), отдавая предпочтение двум последним.

Pяд исследователей считает, что диагностика HP-инфекции должна быть комплексной. Вместе с тем до сих пор не определены критерии отбора тестов, которые должны входить в этот комплекс. Бесспорно лишь то, что тесты для диагностики HP (как и любой другой инфекции) в системе первичного звена практического здравоохранения должны быть не только высокочувствительные и специфичные, но и простые (доступность), с быстрым получением ответа и минимальными материальными затратами (экономичность).

С целью разработки стандартного комплекса лабораторных диагностических тестов по определению HP-инфекции у пациентов с гастродуоденальной патологией в эндоскопическом отделении стационара Пермского клинического центра ФМБА Pоссии в период 2010-2011 гг. было обследовано 102 пациента, предъявлявших активные жалобы на эпигастральные боли и диспепсические явления. Диагноз гастродуоденальной патологии устанавливали в ходе комплексного клинического, инструментального и лабораторного обследования. Обследуемая группа пациентов состояла из 11 чел. с язвенной болезнью желудка, 6 - с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ДПК), 25 - с гастродуоденальными эрозиями, 9 - с очаговым или диффузным атрофическим хроническим гастритом, 37 - с неатрофическим антрум-гастритом, 9 - с рубцовой деформацией луковицы ДПК, 2 - с дуо- деногастральным рефлюксом и по 1 чел. - с поверхностным гастродуоденитом, недостаточностью нижнего пищеводного сфинктера и эзофагитом Барретта. Средний возраст обследуемых составил 54,9±4,93 лет, среди них было 64 мужчины (62,9%) и 46 женщин (45,1%).

Общеклиническое обследование пациентов сопровождалось их анкетированием с целью изучения анамнеза заболевания.

Биологический материал СОЖ или ДПК получали при гастродуодено- фиброскопии с прицельной биопсией в пораженном участке. Гистологические и цитологические препараты готовили по общепринятой методике.

Посев биологического материала осуществляли после тщательного перемешивания и гомогенизации кусочков биоптата на вортексе по усовершенствованной нами методике на две чашки геликобактерного кровяного агара. При этом на одну чашку питательной среды посев проводили методом мазков-отпечатков с последующей инкубацией в анаэростате с газогенераторными пакетами (AnaeroHiGas - Compylo Pack “HiMedia” или Microaerophil “Becton Dickinson”). Вторую часть биоптата с целью обогащения помещали в тиогликолевую питательную среду для контроля стерильности (СКС). Часть биоптата использовали для проведения уреазного теста (тест-полоски “BioMerieux”). При этом нами были одновременно использованы комбинации тест-полосок с мочевиной (“BioMerieux”) вместе с жидкой питательной средой, содержащей мочевину, или микропланшетным тестом (“Lachema”). После 2 сут инкубации в стандартном режиме из СКС готовили для микроскопии окрашенный по Граму препарат (при отсутствии визуального роста на питательном агаре продолжали термостатирование до 7 сут) и делали дополнительные высевы на питательные среды для первичного посева. После 5-7 сут инкубации биологических проб в чашках Петри оценивали характер роста микрофлоры. Идентификацию HP проводили по классической и собственной модифицированной методике.

Суммарные антитела к антигену CagA выявляли в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа с использованием тестсистемы “ХеликоБест-антитела” (ЗАО “Вектор-Бест”, Россия) на аппарате StatFax-303. Результаты анализа оценивали как отрицательные (отсутствие антител к антигену СаgА HP); как сомнительные (титр антител менее 1:5) или слабоположительные (титр 1:5); как положительные (1:10 - 1:20) или резко положительные (1:40 - 1:80). Диагностически значимым считали титр антител 1:10 и выше.

По рекомендации “Маастрихтского консенсуса-4” (2011) в работе был использован неинвазивный копрологический иммунохроматографический тест с моноклональными анти-HP антителами (ImmunoCard STAT HpSA, Germany).

На начальной стадии исследования из комплекса методов диагностики HP был исключен уреазный дыхательный тест по причине отказа от его проведения большинства пациентов исследуемой группы из-за неудобства процедуры.

Таким образом, для проведения сравнительной оценки нами были отобраны шесть доступных лабораторных тестов: определение суммарных антител к антигену CagA; данные гистологии и цитологии; уреазный экспресс-тест; определение антигена HP в кале; микроскопия культуры, выросшей на питательной среде.

Из выборочной совокупности пациентов с патологией гастродуоденальной зоны были сформированы 2 группы. В основную группу вошли обследуемые (40 чел.) с положительными результатами выявления возбудителя из биоптата, что достоверно подтверждало наличие HP-инфицирования; контрольную группу составили пациенты с отрицательным результатом (62 чел.).

Группы были сопоставимы по возрасту, полу, перенесенным ранее инфекционным заболеваниям, а также выявленной патологии гастродуоденальной зоны (p > 0,2).

Сравнительную характеристику лабораторных тестов проводили по методике ВОЗ  с расчетом чувствительности и специфичности исследуемого признака, характеризующего HP-инфекцию. Статистическая обработка материала проводилась с использованием программы “Exel-11.5612.5606”

Анализ частоты встречаемости маркеров HP, определяемых различными тестами, приведен в табл. 1.

Таблица 1

Частота встречаемости маркеров инфекции Helicobacter pylori у пациентов с гастродуоденальной патологией

Частота встречаемости положительного результата

п/п

Тест

Основная группа (n = 40)

Контрольная группа (n = 62)

p

абс.

%±m

абс.

%±m

1.

Антитела к CagA-антигену в сыворотке крови

21

52,5±7,9

11

17,7±4,8

< 0,01

2.

Данные гистологического исследования

17

27,4±7,1

6

9,6±3,7

< 0,05

3.

Данные цитологического исследования

23

57,5±7,8

13

21,0±5,2

< 0,01

4.

Уреазный экспресс-тест биоптата СОЖ

34

85,0±5,6

10

16,0±4,7

< 0,001

5.

Определение антигена HP в кале

20

50,0±7,9

0

0

< 0,001

6.

Микроскопия мазка культуры, выросшей на питательной среде

40

100,0

7

11,1±3,9

< 0,001

Максимальную чувствительность (100%) имел только один признак - присутствие в СКС с биоптатом СОЖ бактерий, морфологически сходных с

HP, а максимальную специфичность (100%) - наличие антигенов НР в кале (табл. 2).

Таблица 2

Диагностическая чувствительность и специфичность тестов для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастродуоденальной патологией

п/п

Тест

Чувствительность (%)

Специфичность (%)

1.

Антитела к CagA-антигену в сыворотке крови

52,5

82,3

2.

Данные гистологического исследования

27,4

90,4

3.

Данные цитологического исследования

57,5

79,0

4.

Уреазный экспресс-тест биоптата СОЖ

85,0

84,0

5.

Определение антигена ОТ в кале

50,0

100,0

6.

Микроскопия мазка культуры, выросшей на питательной среде

100,0

88,9

Чувствительность уреазного экспресс-теста биоптата СОЖ не превышала 85%. Наиболее низкая чувствительность наблюдалась при гистологическом методе диагностики HP (27,4%). На фоне результатов чувствительности цитологического метода (57,5%) не исключалась вероятность влияния на ход гистологического исследования субъективных факторов. Показатели специфичности по большинству признаков находились в диапазоне от 79,0 до 90,4%.

Ни один из шести перечисленных выше лабораторных тестов не обладал одновременно высокой чувствительностью и специфичностью. Таким образом, наиболее информативными и доступными в клинической практике методами идентификации HP можно считать сочетания трех из числа изученных нами диагностических тестов: определение антигена HP в кале (HpSA); наличие в сыворотке крови суммарных антител к антигену CagA; результаты гистологического (или цитологического) исследования, подтверждающие присутствие HP в биоптате; положительный уреазный экспресс-тест биоптата СОЖ; наличие в СКС с биоптатом СОЖ изогнутых палочек, морфологически сходных с HP.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×