text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Пути оптимизации лабораторной диагностики инфекции, обусловленной Helicobacter pylori

  • 15 июля 2012
  • 18

За 30 лет, прошедшие с момента открытия Helicobacter pylori (HP) - спиралевидной бактерии, колонизирующей слизистую оболочку желудка (СОЖ), была установлена этиологическая роль этого возбудителя в развитии многих заболеваний гастродуоденальной зоны.

Вместе с тем нет сомнения в том, что такие распространенные заболевания желудка и двенадцатиперстной кишки, как язвенная болезнь и рак желудка - это не местные инфекционные патологические процессы, а общие полиэтиологические заболевания со сложным патогенезом, в развитии которых HP-инфекции принадлежит важная, но не решающая роль. Кроме того, существуют и HP-независимые формы хронического гастрита - это аутоиммунный (тип А), токсикохимический (тип С) и особые формы хронического гастрита (эозинофильный, гранулематозный, радиационный).

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Хорошо известно, что HP-инфекция широко распространена во всем мире: до 60% населения земного шара инфицировано HP. Однако язвенная болезнь развивается только у 12-15% из них, дистальный рак желудка - у 1%, а мальтома желудка - лишь у 0,5%. До 70% людей, инфицированных HP, являются здоровыми (бессимптомными) бактерионосителями. Именно поэтому точная диагностика HP-инфицирования имеет важное значение, прежде всего при HP-ассоциированных хроническом гастрите, язве желудка и раке желудка, для обоснования эрадикационной терапии.

За прошедшие годы было разработано множество инвазивных и неинвазивных методов диагностики HP. Среди инвазивных методов получил признание гистологический метод определения HP в биопсийном материале (его чувствительность - 90%, специфичность - 97%). Одно время его даже называли “золотым стандартом” в диагностике HP. Особенно удобным для практических врачей оказался уреазный экспресс-тест с материалом биопсии желудка и двенадцатиперстной кишки. Для массовых эпидемиологических обследований чаще всего используют определение антител (IgG и IgA) к HР в сыворотке крови (чувствительность - 64-98,4%, специфичность - 88,4-95%).

Из неинвазивных методов диагностики HP высокую оценку получили уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной (чувствительность - 64-99%, специфичность - 75-95%), определение антигенов HP в фекалиях (чувствительность - 92-94%, специфичность - 94-97%) и определение HP методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (чувствительность - 96,7%, специфичность - 100%).

В то же время были установлены и определенные недостатки перечисленных выше тестов. Так, при определении в сыворотке крови антител к HP нельзя исключить возможность перекрестного реагирования антител. ПЦР является одним из наиболее перспективных методов лабораторной диагностики и все чаще используется при проведении научных исследований, требует специального оборудования, которым не всегда оснащены клинико-диагностические лаборатории практического звена. Уреазные тесты не обеспечивают достоверных результатов, поскольку уреазная активность присуща не только HP, но и другой мукозной микрофлоре, колонизирующей СОЖ. При цитологическом и гистологическом исследовании биопта- тов СОЖ ошибочное заключение возможно из-за близости структуры HP и некоторых других микроорганизмов, обнаруженных в желудке.

“Маастрихтский консенсус-4” по диагностике и лечению HP-ассоциированных заболеваний рекомендует для принятия решения о назначении антибактериальных и антисекреторных средств в качестве диагностических методов уреазный экспресс-тест, определение антител к HP, уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной и определение антигенов HP в фекалиях (HpSA), отдавая предпочтение двум последним.

Pяд исследователей считает, что диагностика HP-инфекции должна быть комплексной. Вместе с тем до сих пор не определены критерии отбора тестов, которые должны входить в этот комплекс. Бесспорно лишь то, что тесты для диагностики HP (как и любой другой инфекции) в системе первичного звена практического здравоохранения должны быть не только высокочувствительные и специфичные, но и простые (доступность), с быстрым получением ответа и минимальными материальными затратами (экономичность).

С целью разработки стандартного комплекса лабораторных диагностических тестов по определению HP-инфекции у пациентов с гастродуоденальной патологией в эндоскопическом отделении стационара Пермского клинического центра ФМБА Pоссии в период 2010-2011 гг. было обследовано 102 пациента, предъявлявших активные жалобы на эпигастральные боли и диспепсические явления. Диагноз гастродуоденальной патологии устанавливали в ходе комплексного клинического, инструментального и лабораторного обследования. Обследуемая группа пациентов состояла из 11 чел. с язвенной болезнью желудка, 6 - с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ДПК), 25 - с гастродуоденальными эрозиями, 9 - с очаговым или диффузным атрофическим хроническим гастритом, 37 - с неатрофическим антрум-гастритом, 9 - с рубцовой деформацией луковицы ДПК, 2 - с дуо- деногастральным рефлюксом и по 1 чел. - с поверхностным гастродуоденитом, недостаточностью нижнего пищеводного сфинктера и эзофагитом Барретта. Средний возраст обследуемых составил 54,9±4,93 лет, среди них было 64 мужчины (62,9%) и 46 женщин (45,1%).

Общеклиническое обследование пациентов сопровождалось их анкетированием с целью изучения анамнеза заболевания.

Биологический материал СОЖ или ДПК получали при гастродуодено- фиброскопии с прицельной биопсией в пораженном участке. Гистологические и цитологические препараты готовили по общепринятой методике.

Посев биологического материала осуществляли после тщательного перемешивания и гомогенизации кусочков биоптата на вортексе по усовершенствованной нами методике на две чашки геликобактерного кровяного агара. При этом на одну чашку питательной среды посев проводили методом мазков-отпечатков с последующей инкубацией в анаэростате с газогенераторными пакетами (AnaeroHiGas - Compylo Pack “HiMedia” или Microaerophil “Becton Dickinson”). Вторую часть биоптата с целью обогащения помещали в тиогликолевую питательную среду для контроля стерильности (СКС). Часть биоптата использовали для проведения уреазного теста (тест-полоски “BioMerieux”). При этом нами были одновременно использованы комбинации тест-полосок с мочевиной (“BioMerieux”) вместе с жидкой питательной средой, содержащей мочевину, или микропланшетным тестом (“Lachema”). После 2 сут инкубации в стандартном режиме из СКС готовили для микроскопии окрашенный по Граму препарат (при отсутствии визуального роста на питательном агаре продолжали термостатирование до 7 сут) и делали дополнительные высевы на питательные среды для первичного посева. После 5-7 сут инкубации биологических проб в чашках Петри оценивали характер роста микрофлоры. Идентификацию HP проводили по классической и собственной модифицированной методике.

Суммарные антитела к антигену CagA выявляли в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа с использованием тестсистемы “ХеликоБест-антитела” (ЗАО “Вектор-Бест”, Россия) на аппарате StatFax-303. Результаты анализа оценивали как отрицательные (отсутствие антител к антигену СаgА HP); как сомнительные (титр антител менее 1:5) или слабоположительные (титр 1:5); как положительные (1:10 - 1:20) или резко положительные (1:40 - 1:80). Диагностически значимым считали титр антител 1:10 и выше.

По рекомендации “Маастрихтского консенсуса-4” (2011) в работе был использован неинвазивный копрологический иммунохроматографический тест с моноклональными анти-HP антителами (ImmunoCard STAT HpSA, Germany).

На начальной стадии исследования из комплекса методов диагностики HP был исключен уреазный дыхательный тест по причине отказа от его проведения большинства пациентов исследуемой группы из-за неудобства процедуры.

Таким образом, для проведения сравнительной оценки нами были отобраны шесть доступных лабораторных тестов: определение суммарных антител к антигену CagA; данные гистологии и цитологии; уреазный экспресс-тест; определение антигена HP в кале; микроскопия культуры, выросшей на питательной среде.

Из выборочной совокупности пациентов с патологией гастродуоденальной зоны были сформированы 2 группы. В основную группу вошли обследуемые (40 чел.) с положительными результатами выявления возбудителя из биоптата, что достоверно подтверждало наличие HP-инфицирования; контрольную группу составили пациенты с отрицательным результатом (62 чел.).

Группы были сопоставимы по возрасту, полу, перенесенным ранее инфекционным заболеваниям, а также выявленной патологии гастродуоденальной зоны (p > 0,2).

Сравнительную характеристику лабораторных тестов проводили по методике ВОЗ  с расчетом чувствительности и специфичности исследуемого признака, характеризующего HP-инфекцию. Статистическая обработка материала проводилась с использованием программы “Exel-11.5612.5606”

Анализ частоты встречаемости маркеров HP, определяемых различными тестами, приведен в табл. 1.

Таблица 1

Частота встречаемости маркеров инфекции Helicobacter pylori у пациентов с гастродуоденальной патологией

Частота встречаемости положительного результата

п/п

Тест

Основная группа (n = 40)

Контрольная группа (n = 62)

p

абс.

%±m

абс.

%±m

1.

Антитела к CagA-антигену в сыворотке крови

21

52,5±7,9

11

17,7±4,8

< 0,01

2.

Данные гистологического исследования

17

27,4±7,1

6

9,6±3,7

< 0,05

3.

Данные цитологического исследования

23

57,5±7,8

13

21,0±5,2

< 0,01

4.

Уреазный экспресс-тест биоптата СОЖ

34

85,0±5,6

10

16,0±4,7

< 0,001

5.

Определение антигена HP в кале

20

50,0±7,9

0

0

< 0,001

6.

Микроскопия мазка культуры, выросшей на питательной среде

40

100,0

7

11,1±3,9

< 0,001

Максимальную чувствительность (100%) имел только один признак - присутствие в СКС с биоптатом СОЖ бактерий, морфологически сходных с

HP, а максимальную специфичность (100%) - наличие антигенов НР в кале (табл. 2).

Таблица 2

Диагностическая чувствительность и специфичность тестов для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастродуоденальной патологией

п/п

Тест

Чувствительность (%)

Специфичность (%)

1.

Антитела к CagA-антигену в сыворотке крови

52,5

82,3

2.

Данные гистологического исследования

27,4

90,4

3.

Данные цитологического исследования

57,5

79,0

4.

Уреазный экспресс-тест биоптата СОЖ

85,0

84,0

5.

Определение антигена ОТ в кале

50,0

100,0

6.

Микроскопия мазка культуры, выросшей на питательной среде

100,0

88,9

Чувствительность уреазного экспресс-теста биоптата СОЖ не превышала 85%. Наиболее низкая чувствительность наблюдалась при гистологическом методе диагностики HP (27,4%). На фоне результатов чувствительности цитологического метода (57,5%) не исключалась вероятность влияния на ход гистологического исследования субъективных факторов. Показатели специфичности по большинству признаков находились в диапазоне от 79,0 до 90,4%.

Ни один из шести перечисленных выше лабораторных тестов не обладал одновременно высокой чувствительностью и специфичностью. Таким образом, наиболее информативными и доступными в клинической практике методами идентификации HP можно считать сочетания трех из числа изученных нами диагностических тестов: определение антигена HP в кале (HpSA); наличие в сыворотке крови суммарных антител к антигену CagA; результаты гистологического (или цитологического) исследования, подтверждающие присутствие HP в биоптате; положительный уреазный экспресс-тест биоптата СОЖ; наличие в СКС с биоптатом СОЖ изогнутых палочек, морфологически сходных с HP.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.