text
Портал для медицинских работников

Маркеры вирусной инфекции при заболеваниях системы крови с сопутствующим диагнозом «гепатит неясной этиологии»

  • 15 мая 2013
  • 19

Поражение печени у пациентов с заболеваниями системы крови является одним из наиболее частых осложнений в ходе проведения программной химиотерапии. При этом характерной особенностью данного осложнения является его многофакторность: гепатит на фоне прогрессирования основного заболевания, гепатотоксичность химиопрепаратов, воздействие инфекционных агентов. Так, при острых лейкозах серьезная дисфункция печени превалирует среди других осложнений и составляет 63,6%. По данным японских исследователей, у лиц с заболеваниями системы крови тяжелое поражение печени в подавляющем большинстве случаев (75,0%) ассоциируется с инфекцией, вызванной вирусом гепатита В (ВГВ) и в 8,2% случаев с инфекцией, вызванной вирусом гепатита С (ВГС).

Диагностика гепатита начинается с рутинного исследования: выявление HBsAg и aнтител к ВГС в крови пациента и в большинстве случаев на этом и заканчивается. Лишь в некоторых лабораториях проводят расширенное исследование для выявления ВГВ, включающее выявление его маркеров (АТ анти-HBs, анти-HBc, анти-HBe) и антигена HBeAg. Значительное распространение получили молекулярные методы диагностики вирусных инфекций, преимущественно обнаружение ДНК ВГВ и РНК ВГС методом ПЦР. Однако несмотря на широкий арсенал исследований инфекционный агент может быть и не выявлен. Такую ситуацию трактуют как криптогенный гепатит, или гепатит неясной этиологии.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

В проведенных ранее исследованиях авторами показано, что ряд осложнений у пациентов с заболеваниями системы крови ассоциирован с присутствием цитомегаловируса (ЦМВ) и вируса Эпштейна - Барр (ВЭБ) из семейства Herpesviridae: возникновение лихорадки, развитие пневмонии, дыхательной недостаточности, поражение кроветворной ткани. В настоящее время не существует единого мнения о роли герпетических инфекций в развитии патологии печени.

Для оценки вклада возбудителей различных инфекций в формирование гепатита неясной этиологии проанализированы образцы биоматериалов от 56 пациентов гематологического стационара: плазма/сыворотка крови (44 образца), мононуклеары периферической крови (44 образца), биоптаты печени (56 образцов).

Мононуклеары периферической крови (фракция лимфоцитов с плотностью 1,078г/л) выделяли в градиенте фикола по стандартной методике. Для предварительной обработки биоптатов применялся буфер с протеиназой К.

Рутинные маркеры вирусных гепатитов В и С (HBsAg и АТ к ВГС) выявляли методом ИФА с использованием наборов реагентов фирм «Ниармедик» и «Диагностические системы» соответственно. В качестве подтверждающих тестов использовали наборы Мюрекс (фирма Эбботт). Для обнаружения других маркеров ВГВ и ВГС (анти-HBs, анти-HBc, анти-HBe и HBeAg) использовали наборы реагентов фирм «Рош» (Швейцария) и «БИОРАД» (США).

Для выявления ДНК ВГВ и РНК ВГС, а также нуклеиновых кислот герпесвирусов методом ПЦР использовали наборы реагентов производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора: АмплиСенс HCV- FRT, АмплиСенс HВV-FRT, АмплиСенс ВГВ-470/770-ВКО, АмплиСенс HCV-240/440-ВКО.

Маркеры ВЭБ (АТ IgM-VCA, АТ IgG ЕА, количество IgG-EBNA-1 (IgG-NA) ) и ЦМВ (АТ классов IgM и титр IgG) выявляли с помощью тест-систем фирм Medac, Euroimmun (Германия) и «Вектор-Бест» (Россия). Выявление АТ классов IgM, IgG к раннему антигену ВЭБ (IgG-EA- ВЭБ), а также титра IgG-ЦМВ, превышающего нормальные значения в 4 и более раз в сыворотке/плазме крови, считали свидетельством активной герпесвирусной инфекции, обнаружение нуклеиновой кислоты вируса в образцах биологического материала - указанием его репликации.

При исследовании 44 образцов крови больных криптогенным гепатитом в 18 обнаружены различные маркеры ВГВ и/или ВГС. У 16 больных выявлены анти-НВз, у 9 пациентов анти-НВс суммарные, у 3 - анти-НВе и анти-ВГС (табл. 1). Ни у одного больного не были выявлены анти-НВс IgM или НВеАg ВГВ, свидетельствующие об активной репликации вируса. У 3 пациентов в плазме крови выявлена ДНК ВГВ при отсутствии HBsAg. РНК ВГС выявлена в 4 образцах плазмы крови, при этом анти- ВГС были обнаружены только в 3 из них. Таким образом, дополнительно было выявлено 4 образца крови, содержащие маркеры активно реплицирующихся вирусов гепатитов В и С.

Таблица 1

Маркеры вирусов гепатитов В и С у больных с криптогенным

гепатитом

Всего

обсле

довано

Маркеры вирусов гепатитов В и С

Маркеры

не

выявлены

HBsAg

a-HBs

а-НВс

сумм.

а-НВс IgM

HBeAg

0>

CQ

Е

и

д

ДНК HBV

РНК HCV

44

26

0

16

9

0

0

3

3

3

4

С целью выявления дополнительных факторов, причастных к поражению печени, проведено исследование для обнаружения ДНК ВЭБ и ЦМВ в мононуклеарах периферической крови. В лейкоцитах каждого четвертого пациента (11 больных) была выявлена ДНК ВЭБ, у 1 - в сочетании с ДНК ЦМВ и у 1 - в сочетании с ДНК ВГВ. В 4 образцах крови была обнаружена ДНК ЦМВ. Ни в одном образце крови, содержащем РНК ВГС, не были выявлены ДНК герпесвирусов. Таким образом, ДНК ВЭБ и ЦМВ были выявлены в лейкоцитах 16 больных криптогенным гепатитом, что составляет третью часть обследованных.

Образцы сывороток крови были проанализированы на наличие антител к герпесвирусам 4 и 5 типа (ВЭБ и ЦМВ). Ни у одного из обследованных не были обнаружены антитела IgM-ЦМВ. Титр IgG-антител к ЦМВ превышал в 4 раза нормальные значения у каждого третьего пациента (13 больных). У каждого пятого из обследованных (9 пациентов) обнаружены маркеры активной ВЭБ-инфекции - антитела к раннему антигену ВЭБ (IgG-ЕА-ВЭБ). Полученные данные позволяют полагать, что активная фаза герпесвирусной инфекции выявлена почти у половины обследованных пациентов с криптогенным гепатитом. Таким образом, при исследовании образцов крови мы обнаружили более чем у половины пациентов те или иные маркеры активных вирусных инфекций, которые в том числе ассоциируются с поражением печени.

При исследовании 56 биоптатов печени больных с криптогенным гепатитом для выявления нуклеиновых кислот вирусов были получены следующие результаты (табл. 2). Чаще других в биоптатах печени были выявлены ДНК ВГВ и ДНК ВЭБ - в 20 и 14 образцах соответственно. РНК ВГС была обнаружена только в 6 биоптатах, а ДНК ЦМВ - в 3-х. В ряде образцов были выявлены ДНК нескольких вирусов, наиболее частым из них было сочетание ДНК ВГВ и ВЭБ (4 образца), в одном из образцов одновременно обнаружены ДНК трех разных вирусов (ВГВ, ВЭБ и ЦМВ). Стоит заметить, что РНК ВГС ни в одном образце не была обнаружена вместе с ДНК ЦМВ или ВЭБ.

Таблица 2

Обнаружение нуклеиновых кислот вирусов в биоптатах печени (n = 56)

Показатель

Количество положительных результатов

РНК ВГС

6

ДНК ВГВ

20

ДНК ВЭБ

14

ДНК ЦМВ

3

РНК ВГС + ДНК ВГВ

2

ДНК ЦМВ + ДНК ВЭБ

2

ДНК ВГВ + ДНК ВЭБ

4

ДНК ВГВ + ДНК ВЭБ + ДНК ЦМВ

1

Полученные образцы биоматериала позволили оценить присутствие РНК ВГС и ДНК ВГВ в плазме крови и биоптатах печени у 44 пациентов. ДНК ВГВ была выявлена в биоптатах печени у 10 пациентов и только у 1 из них - в плазме крови. РНК ВГС была обнаружена в биоптатах печени 4 пациентов, в плазме крови - у 2 пациентов. Таким образом, наиболее информативным материалом для выявления инфицированности ВГВ и ВГС оказался биоптат печени. Полученные данные совпадают с данными литературы, трактующими наличие ДНК ВГВ в биоптате печени как «золотой стандарт» диагностики скрытого гепатита В.

В результате проведенных исследований установлено, что более чем у половины пациентов с поражением печени неясного генеза, были обнаружены те или иные лабораторные маркеры активной вирусной инфекции. Таким образом представляется целесообразным при отсутствии в сыворотке крови у больных с криптогенным гепатитом HBsAg и анти- ВГС проводить дополнительное исследование для обнаружения в крови ДНК ВГВ, РНК ВГС и маркеров ВГВ (анти-HBs, анти-HBc-IgM, анти-HBc- суммарные, анти-HBe, HBeAg). В случае отрицательного результата представляется целесообразным выявление маркеров, свидетельствующих о присутствии активных ВЭБ- и ЦМВ-инфекции. В случае проведения биопсии печени, помимо стандартного гистологического исследования полученного материала, необходимо провести также выявление нуклеиновых кислот перечисленных вирусов методом ПЦР.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×

×

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.