text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Диагностика церебрального токсоплазмоза у ВИЧ-инфицированных пациентов методом иммуноферментного анализа

  • 15 сентября 2013
  • 21

Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ- инфекция), сопровождается прогрессирующей деструкцией иммунной системы. Основные пути проникновения вируса в мозг и ликвор - гематогенный и периневральный. Поражение нервной системы при ВИЧ/ СПИДе обусловлено воздействием не только самого вируса, но и может осложняться оппортунистическими инфекциями, возбудители которых активируются в условиях иммунодефицита. Чаще всего основной причиной патологии центральной нервной системы при СПИДе, вызванной условно-патогенными микроорганизмами, является токсоплазмоз, который развивается обычно при снижении количества CD4 клеток до 100 и менее в 1 мкл крови.

Токсоплазмоз - широко распространенная зоонозная паразитарная инфекция, характеризующаяся полиморфизмом клинических проявлений и значительной вариабельностью течения процесса: от здорового, бессимптомного носительства до тяжелых, летальных форм болезни. Известно, что T. gondii инфицировано от 70,0 до 80,0% населения в зависимости от географического региона. У большинства людей иммунной системе удается контролировать развитие заболевания, но при угнетении иммунитета инфекция имеет тенденцию поражать мозг и вызывать проблемы с речью и ходьбой. Поражение центральной нервной системы чаще всего протекает в виде церебрального, базального арахноидита; развиваются гипертензионный и диэнцефальный синдромы, выявляются ве- гетососудистые нарушения, отмечается эписиндром. Больные СПИДом, инфицированные T. gondii, как правило, погибают. Летальность ВИЧ- инфицированных от нейроинфекции, вызванной токсоплазмозом, выше, чем от других возбудителей оппортунистических заболеваний.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Поскольку клинические проявления нейроинфекции различной этиологии носят обычно неспецифический характер, точная и быстрая диагностика возбудителя на ранних этапах заболевания имеет решающее значение для проведения своевременной терапии, которая позволяет предупредить или замедлить прогрессирование патологического процесса, продлить жизнь ВИЧ-инфицированного и сохранить ее качество. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) обнаруживает ДНК T. gondii в крови и ликворе только у 30,0-50,0% больных с активным токсоплазмозом.

Для диагностики токсоплазмоза в широкой лабораторной практике обычно используют иммуноферментный анализ (ИФА). Данный метод отличается простотой постановки, не требует сложного оборудования, автоматически учитывает результат анализа и позволяет быстро и с высокой достоверностью выявить возбудитель независимо от места его локализации в организме. Большинство иммуноферментных тестсистем разных производителей предназначены для определения антител к T. gondii в сыворотке/плазме крови человека.

Ликвор и сыворотку крови 20 больных ВИЧ (14 мужчин и 6 женщин) исследовали для выявления IgG к T. gondii методом ИФА набором реагентов DIA-Toxo-IgG (ЧАО НПК «Диапроф Мед»). Пациенты, находящиеся на лечении в стационарном отделении Центра профилактики и борьбы со СПИДом Ивано-Франковской области, имели клинические проявления менингита или менингоэнцефалита. По результатам обследования больных 1 пациенту поставлен диагноз прогрессирующей полифокальной лейкоэнцефалопатии, 7 - гнойный менингит, 1 - туберкулезный менингит, 1 - криптококковый менингит, 1 - криптококковый менингит в сочетании с гнойным менингитом, 2 - герпесвирусный (HSV1) энцефалит, 7 пациентам - очаговый церебральный токсоплазмоз. Очаговый токсоплазмозный энцефалит был монопатологией только у 3 пациентов, у остальных он сочетался с другой патологией центральной нервной системы: криптококковым менингитом - у 2 пациентов, абсцессом головного мозга - 1, Эпштейна - Бар вирусным энцефалитом и криптококковым менингитом - у 1 пациента.

Часть пациентов исследована до и после проведенной антивирусной и противопаразитарной терапии. Контрольную группу составляли ВИЧ- инфицированные, отрицательные по токсоплазмозу.

Тест-система DIA-Toxo-IgG сконструирована в формате непрямого ИФА. В составе иммуносорбента использованы очищенные природные антигены T. gondii, с которыми связываются специфические антитела на первом этапе реакции. После промывки иммуносорбента в реакцию вводят специфический пероксидазный конъюгат, изготовленный на основе мышиных моноклональных антител к IgG человека, которые выявляют образовавшиеся иммунные комплексы. Иммуноферментную реакцию проявляют раствором ТМБ (3,3’,5,5’-тетраметилбензидина), в состав которого входит перекись водорода. Останавливают реакцию 0,5 М раствором серной кислоты.

При исследовании сывороток крови на IgG к T.gondii, согласно инструкции к тест-системе, исследуемый образец предварительно перед постановкой ИФА разводили 1 : 50 буфером. С помощью калибраторов, которые входят в состав набора и откалиброваны в соответствии с 3-м Международным стандартом Всемирной организации здравоохранения (Anti-Toxoplasma serum, Human TOXM, NIBSC), строили калибровочную кривую и полученное значение концентрации специфических IgG в сыворотке крови выражали в МЕ/мл. Кроме этого, в проведенных нами исследованиях анализируемый материал дополнительно разводили указанным буфером двукратно: сыворотки крови - с 1 : 50 до 1 : 400, а ликвор - с 1/10 до 1/160. Результат анализа при этом выражали соотношением:

ОП / cut off,

где ОП - оптическая плотность, полученная при тестировании исследуемого образца;

cut off - граничное значение, которое рассчитывали по формуле:

срК- + 0,15;

срК- - среднее значение оптической плотности, полученное при анализе трех дублей отрицательного контроля;

0,15 - поправочный коэффициент.

Использование данного соотношения одновременно при учете результата анализа сыворотки крови и ликвора позволило сравнить концентрации IgG к T. gondii, как персистирующих, так и локализованных в нервной ткани организма больного.

При исследовании ВИЧ-инфицированных с нейроинфекцией специфические IgG к T.gondii в сыворотке крови выявлены у 65,0% больных (13 из 20 обследованных). У всех пациентов с положительным результатом на токсоплазмоз в организме персистировали специфические иммуноглобулины класса G в достаточно высоких концентрациях (70-176 МЕ/мл), которые указывали на перенесенное заболевание в прошлом (табл. 1, 2).

При анализе ликвора данных больных у 84,6% (11 из 13 обследованных) были обнаружены IgG к T. gondii. У одного больного (№ 6), у которого концентрация специфических IgG в сыворотке крови составила 58 МЕ/мл, ликвор не исследовался. Отмечено, что при последовательном двукратном разведении 14 образцов ликвора, в которых тест-система выявила IgG к T. gondii, в 9 образцах (64,3%) специфические антитела обнаружены в исследуемом материале до его разведения 1:400, в 2 образцах - до разведений 1 : 100, 1 : 200 соответственно. Необходимо отметить, что у всех пациентов, у которых IgG к T. gondii присутствовали в ликворе, они выявлялись и в сыворотке крови. Это свидетельствует о невозможности изолированного появления специфических антител в ликворе при отсутствии их в крови. У 3 больных (№ 4, 5, 11), в ликворе которых обнаружены специфические IgG, по результатам компьютерной томографии диагноз токсоплазмоза не был установлен. Двое из них умерли, так и не получив своевременно специфической терапии. У одного больного после выписки через 1 месяц развился токсоплазменный множественный хориоретинит со значительным снижением зрения. В дальнейшем по анамнезу всем трем больным был поставлен диагноз - токсоплазмоз мозга. При исследовании больного (№ 13), прошедшего курс противопаразитарной терапии, IgG к T. gondii обнаружены только при разведении ликвора 1 : 10. Учитывая полученные данные, очевидно, что именно данное разведение ликвора необходимо использовать как минимальное при проведении ИФА, чтобы исключить возможность получения ложноотрицательных результатов при тестировании ликвора в тест-системе DIA-Toxo-IgG.

У одного пациента (№ 10) IgG к T. gondii обнаружены только в сыворотке крови. По результатам расширенного обследования у него не подтвержден диагноз церебральный токсоплазмоз.

Сравнительный анализ значений соотношения ОП / cut off, полученных при исследовании образцов ликвора (в разведении 1 : 10), отобранных с интервалом 12-14 дней у больных, позволил установить снижение количества IgG к T. gondii у пациента № 1 с положительной динамикой заболевания в ходе проведения лечения (табл. 1).

Таблица 1

Результаты сравнительного тестирования сыворотки крови и ликвора ВИЧ-инфицированных с подозрением на токсоплазмоз в тест-системе DIA-Toxo-IgG.

боль

ного

пробы

Результаты иммуноферментного анализа сыворотки крови

Результаты иммуноферментного анализа ликвора

Токсоплазмоз

подтвержден

МЕ/мл

разведения

разведения

1/50

1/100

1/200

1/400

1/10

1/20

1/40

1/80

1/160

ОП/cut off

ОП/cut off

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

1

I

160

16,20

15,80

14,30

11,30

12,70

11,00

10,60

5,50

0,20

да

II

84

14,80

14,10

13,10

11,80

4,80

2,60

1,10

0,30

0,10

2

I

155

15,70

13,10

12,10

11,40

19,60

14,70

16,10

15,70

6,40

Да

3

I

175

17,60

15,30

13,20

9,60

17,60

17,90

16,70

15,80

5,80

Да

II

130

-

-

-

-

15,30

14,90

13,50

13,10

12,50

4

I

167

16,80

16,80

16,00

15,70

14,30

12,00

11,90

9,40

0,70

обосн

II

81

14,40

13,80

13,60

13,00

12,60

10,70

7,40

5,50

2,80

5

I

176

17,50

16,90

15,90

14,80

16,90

16,70

15,00

9,90

5,00

обосн

II

81

14,40

13,40

13,10

13,00

10,70

7,90

5,10

2,80

1,40

6

I

58

6,30

3,10

1,40

0,30

-

-

-

-

-

7

I

отр.

0,20

0,05

0,06

0,02

0,10

0,10

0,08

0,07

0,07

нет

II

отр.

0,08

0,04

0,04

0,04

0,08

0,04

0,03

0,02

0,03

8

I

отр.

0,07

0,05

0,04

0,06

0,20

0,10

0,20

0,07

0,08

нет

9

I

отр.

0,10

0,08

0,03

0,03

0,07

0,05

0,05

0,05

0,07

нет

10

I

70

12,90

12,20

11,80

10,50

0,05

0,04

0,04

0,04

0,04

нет

11

I

87

0,09

0,06

0,05

0,06

13,20

11,80

10,30

9,20

8,30

обосн

II

89

0,10

0,07

0,04

0,04

14,80

14,20

12,90

11,00

10,50

12

I

отр.

0,06

0,05

0,04

0,04

0,04

0,03

0,04

0,04

0,03

нет

13

I

154

15,50

15,10

13,10

11,20

2,00

0,80

0,20

0,07

0,05

нет

14

I

отр.

0,10

0,07

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

0,04

0,04

нет

15

I

отр.

0,08

0,05

0,03

0,02

0,06

0,07

0,06

0,08

0,07

нет

16

I

отр.

0,04

0,05

0,04

0,04

0,10

0,50

0,10

0,10

0,10

нет

17

I

отр.

0,07

0,05

0,04

0,03

0,05

0,05

0,04

0,02

0,02

нет

У 8 больных (контрольная группа - № 7, 8, 9, 12, 14, 15, 16, 17) мы не обнаружили IgG к T. gondii при исследовании в тест-системе DIA-Toxo- IgG образцов сывороток крови и ликвора.

Полученные данные по количеству IgG к T. gondii, персистирующих в организме и локализованных в нервной ткани, при нейроинфекции у ВИЧ-инфицированных представлены в табл. 2. По результатам тестирования сывороток крови и ликвора в одинаковых 2-кратных разведениях - от 1 : 50 до 1 : 16 400, специфические антитела в ликворе выявлялись в меньших разведениях и с меньшими значениями ОП / cut off, чем в сыворотке крови, у каждого больного. Очевидно, что у больных на ранних этапах развития нейроинфекции обсемененность возбудителем нервной ткани меньше, чем внутренних органов.

Таблица 2

Результаты сравнительного анализа содержания IgG к Toxoplasma gondii в сыворотке крови и ликворе больных, инфицированных вирусом иммунодефицита человека

Код

боль

ного

Мате

риал

Результаты иммуноферментного анализа

МЕ/мл

разведения

1/50

1/100

1/200

1/400

1/800

1/1600

1/3200

1/6400

ОП/cut off*

18

кровь

85

8,10

7,60

6,90

5,90

4,70

3,10

1,70

0,80

ликвор

2,60

1,30

0,50

0,20

0,03

0,02

0,02

0,03

19

кровь

88

8,40

8,20

7,70

7,70

7,20

7,00

6,40

5,30

ликвор

5,10

3,80

2,20

1,00

0,50

0,10

0,06

0,03

20

кровь

73

7,20

7,00

6,40

5,80

5,00

3,60

2,30

1,10

ликвор

4,30

2,70

1,50

0,70

0,30

0,09

0,04

0,02

Таким образом, проведенные нами исследования образцов ликвора и сыворотки крови ВИЧ-инфицированных с нейроинфекцией показали, что диагностические возможности иммуноферментной тест-системы DIA-Toxo-IgG позволяют выявлять IgG к T. gondii в указанном материале с высокой чувствительностью. При этом ликвор перед тестированием необходимо разводить 1 : 10 раствором для разведения исследуемых образцов, который входит в состав тест-набора. Высокая информативная способность тест-системы определяет возможность ее использования в алгоритме диагностики этиологического фактора нейроСПИДа. Поскольку из всех оппортунистических инфекций токсоплазмоз в условиях иммунодефицита у больных ВИЧ представляет реальную угрозу их жизни, своевременное выявление возбудителя токсоплазмоза в качестве причины нейроинфекции предупредит осложнения в ходе развития заболевания.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.