Автоматизация и стандартизация окраски мазков крови в практической деятельности клинико-диагностических лабораторий

143

Общий анализ крови, с подсчетом лейкоцитарной формулы и оценкой морфологии клеток, является одним из самых распространенных исследований, выполняемых практически всем амбулаторным и стационарным пациентам независимо от диагноза. В клинико-диагностических лабораториях (КДЛ) для оценки морфологии клеток чаще всего используется микроскопия окрашенного мазка крови, которая до сих пор остается «золотым стандартом» при анализе клеток крови.

Современной тенденцией развития гематологических исследований является внедрение систем автоматического распознавания изображений и компьютерной оценки морфологии элементов крови. Примером практического использования таких систем являются различные приборы, выпускаемые компанией «West Medica» (Австрия): Vision Hema Assist, Vision Hema Pro, Vision Hema Ultimate. Эти приборы самостоятельно отбирают изображения, с высокой точностью распознают тип клеток, сортируют и представляют их на экране компьютера в виде галерей изображений для последующего визуального контроля сотрудником лаборатории. Применение таких приборов позволяет избавить врача от необходимости непосредственно просматривать препарат окрашенного мазка крови для поиска клеток. Основной задачей врача становится анализ морфологических особенностей клеток, представленных в галереях изображений. Однако внедрение таких компьютерных технологий диктует более высокие требования к качеству мазка крови, и особенно, к стандартизации его окраски.

На рынке присутствует целый ряд приборов для окраски мазков крови, различающихся по своим эксплуатационным характеристикам. Нами проанализированы характеристики аппаратов для окраски мазков крови V-Chromer (West Medica) и Hema Tec 2000 (Siemens). Данные приведены в таблице. Можно отметить, что, несмотря на схожие размеры и производительность, прибор V-Chromer (West Medica) значительно проще в эксплуатации и позволяет реализовать большее количество протоколов различных методов окраски, не привязан к реактивам одного производителя, позволяет точно соблюдать протоколы окраски и получать мазки высокого качества. Однако в обычной практике КДЛ преимущественно применяется ручной (неавтоматизированный) способ окраски мазков крови, с использованием различных штативов для более компактного расположения стекол, при этом не всегда удается обеспечить высокое качество окраски мазков крови и добиться хорошей воспроизводимости результатов анализа.

Авторами проведено исследование, целью которого являлась стандартизация процедуры окраски мазков крови с применением реактивов различных производителей.

Адаптировалась наиболее часто применяющаяся методика окраски мазков крови по Романовскому - Гимзе (в зарубежной литературе - методика окраски по Май - Грюнвальду - Гимзе, или MGG). Данный вид окрашивания является одним из наиболее распространенных в гематологии. В качестве фиксатора используется раствор эозина метиленового синего в метиловом спирте (фиксатор Май - Грюнвальда). Он обеспечивает быструю и качественную фиксацию клеток крови и хорошо сохраняет специфическую зернистость

базофилов. Использование для фиксации мазков крови более доступного и дешевого этилового спирта приводит к плохой фиксации специфической зернистости базофилов и ее последующему растворению при окрашивании, в результате чего базофилы при микроскопии легко могут быть приняты за нейтрофилы. Последующее окрашивание выполняли водным раствором красителя Романовского - Гимзы (краситель Гимзы). На качество окрашивания мазка значительное влияние оказывает рН раствора краски, поэтому водный раствор краски готовили на дистиллированной воде с добавлением фосфатного буфера (рН 7,0 ± 0,1).

Оценивались наборы, состоящие из фиксатора Май - Грюнвальда и красителя Гимзы, следующих фирм-производителей:

  • QCA (Испания);
  • Bio Optica (Италия);
  • а также отечественных производителей:
  • НПФ «Абрис+» (г. Санкт-Петербург);
  • ЭКОлаб (г. Электрогорск);
  • Минимед (г. Брянск).

Предварительно использовали традиционный протокол окраски мазков крови, применяемый при ручном методе. Высушенные мазки крови помещали в штатив для стекол в количестве 25 шт. (максимальная загрузка штатива) и окрашивали в контейнере с краской по следующей схеме:

  • фиксация мазков в фиксаторе Май - Грюнвальда - 3 мин;
  • промывка в сосуде с дистиллированной водой - 2 мин;
  • окраска красителем Гимзы, приготовленным на дистиллированной воде со стабилизированным значением рН, - 10 мин;
  • промывка дистиллированной водой - 2 мин;
  • досушивание на воздухе - 10-15 мин.

Окрашенные по такому протоколу мазки крови характеризовались двумя недостатками:

  • в ряде случаев имела место недостаточно четкая окраска ядер и зернистости в цитоплазме лейкоцитов, в связи с чем они выглядели несколько бледнее;
  • наличие преципитатов красителя на поверхности мазка.

Такие же преципитаты краски могут обнаруживаться и при ручной окраске мазков крови, но выявляются значительно реже, т. к. после ручной окраски каждый из мазков крови промывается под струей проточной воды. Такая промывка механически смывает формирующиеся преципитаты краски и препятствует их закреплению на поверхности мазка крови.

В литературе указывается, что водный раствор красителя Гимзы нестабилен, краситель быстро выпадает в осадок.

Для увеличения стабильности свежеприготовленного рабочего раствора красителя предложено добавление 50 мл/л диметилсульфоксида (ДМСО), что увеличивает стабильность раствора по крайней мере до 4 ч.

Однако, с учетом существующих в России сложностей в приобретении химических реактивов, ДМСО был заменен на более доступное соединение, в качестве которого выбран 96° этиловый спирт.

В результате серии исследований было установлено, что добавление к раствору красителя Гимзы 10% (по объему) 96° этилового спирта предотвращает выпадение в осадок преципитатов эозина и азура. В связи с этим были внесены изменения в рекомендуемый протокол окраски в автоматах для окрашивания мазков крови. В качестве дополнительного соединения, стабилизирующего рабочий раствор красителя Гимзы, добавлен этиловый спирт, время окраски увеличено до 15 мин.

Перед окраской мазков в рабочие ванночки вносятся следующие растворы:

  • фиксатор Май - Грюнвальда, который может использоваться неоднократно (до 10 раз, затем его нужно сменить, т. к. происходит обводнение: впитывается вода, содержащаяся в мазках крови);
  • краситель Гимзы, который готовится непосредственно перед окраской мазков крови.

Для приготовления, например, 250 мл рабочего раствора краски необходимо:

  1. взять 25 мл краски;
  2. добавить 25 мл 96° этилового спирта;
  3. довести объем до 250 мл дистиллированной водой с добавлением фосфатного буфера (рН 7,0 ± 0,1).

Высушенные мазки крови следует в вертикальном положении поместить в штатив для стекол и окрашивать по следующему протоколу:

  • фиксация мазков в фиксаторе Май - Грюнвальда - 3 мин;
  • промывка в емкости с дистиллированной водой - 2 мин;
  • окраска в свежеприготовленном водном растворе красителя Гим- зы, приготовленном на дистиллированной воде со стабилизированным значением рН, - 15 мин;
  • промывка в емкости с дистиллированной водой - 2 мин;
  • досушивание на воздухе в течение 10-15 мин.

В результате получаются качественные, однотипно окрашенные мазки крови без присутствия преципитатов красителя.

Хорошие результаты достигнуты на фиксаторах и красках всех апробированных производителей.

По нашим данным, добавление 10% этилового спирта к водному раствору красителя Гимзы замедляет выпадение осадка красителя и предупреждает его закрепление на поверхности мазка крови. Предложенный способ модификации традиционного протокола окраски мазков крови по Романовскому - Гимзе обеспечивает качественное окрашивание мазков крови ручным методом в штативах, независимо от производителя набора красок.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Когда вы посещаете страницы сайта, мы обрабатываем ваши данные и можем передать сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×