text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Применение биохимического анализатора для лекарственного мониторинга такролимуса

  • 15 декабря 2013
  • 253

Необходимость мониторинга лекарственных препаратов в условиях стационара продиктована как терапевтической, так и экономической целесообразностью. Например, согласно данным министерства здравоохранения Великобритании за 2000 г., у 10,0% пациентов стационара возникают нежелательные реакции на лекарственную терапию. Аналогичные данные приводит и рабочая группа по качеству медицинской помощи «Больницы Европы». Нежелательные реакции на лекарственную терапию являются причиной увеличения сроков пребывания пациентов в стационаре, снижения эффективности терапии, существенного удорожания лечения.

С целью подбора оптимальной дозы лекарственного препарата для достижения максимального терапевтического эффекта при минимальных токсических эффектах, применяется терапевтический лекарственный мониторинг. Особенно важно проводить лекарственный мониторинг для препаратов с узким терапевтическим коридором. К таким препаратам относятся в частности иммуносупрессоры.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

В клинической лабораторной практике для проведения лекарственного мониторинга применяют как специализированные приборы (например, TDx фирмы Abbott Laboratories, США), так и стандартные биохимические анализаторы, для которых разработаны соответствующие тесты. В клинико-диагностической лаборатории Республиканской клинической больницы им. Куватова (г. Уфа) были установлены в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя и успешно применяются на биохимическом анализаторе AU680 Beckman Coulter (США) наборы производства компании Thermo Fisher Scientific (США) для проведения лекарственного мониторинга иммуносупрессивной терапии. В статье представлена методика определения концентрации такролимуса на биохимическом анализаторе AU680 наборами CEDIA Tacrolimus производства компании Thermo Fisher Scientific. Такролимус применяется в Республиканской клинической больнице им. Куватова в качестве препарата выбора для иммуносупрессивной терапии при ведении больных, которым была проведена родственная либо трупная трансплантация почки.

Такролимус относится к группе макролидов грибкового происхождения и обладает выраженным иммуносупрессивным действием. Важно отметить, что распределение такролимуса между цельной кровью и плазмой зависит от нескольких факторов, включая гематокрит, концентрацию лекарственного средства и концентрацию белка в плазме.

Такролимус интенсивно подвергается метаболизму системой цитохрома P-450, главным образом CYP3A4. Средний период полувыведения такролимуса in vivo составляет около 48 ч. Сопутствующее применение лекарственных или растительных препаратов, которые ингибируют или индуцируют CYP3A4, может повлиять на метаболизм такролимуса и таким образом снизить или повысить его уровень в крови. Та- кролимус также оказывает влияние на CYP3A4 зависимый метаболизм лекарственных препаратов; таким образом, совместное применение та- кролимуса с препаратами, которые метаболизируются CYP3A4 зависимыми путями, может изменить метаболизм этих лекарственных средств. Совместное применение такролимуса с препаратами, обладающими нефротоксическим или нейротоксическим действием, может повысить токсичность. Также есть данные о большой вариативности концентраций такролимуса в цельной крови у одного пациента и между пациентами. Таким образом, учитывая токсичность такролимуса и возможные многочисленные причины флуктуации его концентрации в крови пациентов, мониторинг такролимуса важен для эффективного применения лекарственного препарата с целью предотвращения отторжения аллогенных трансплантатов печени и почек, особенно у больных группы высокого риска. Измерение концентраций такролимуса в цельной крови, в совокупности с другими лабораторными и клиническими данными, - это лучший подход для оптимизации иммунодепрессивного действия и минимизации побочных эффектов у пациентов.

Группа пациентов, участвовавших в исследовании, включала 5 мужчин и 7 женщин в возрасте от 19 до 54 лет и одного подростка в возрасте 14 лет. Пациентам была проведена родственная (4 пациента) либо трупная (9 пациентов) трансплантация почки. В качестве иммуносупрессивной терапии все пациенты получали такролимус в дозировке от 4 до 12 мг. Мониторинг концентрации такролимуса проводился параллельно на оборудовании TDx Abbott, Architect Abbott (с соответствующими наборами реагентов) и AU680 Beckman Coulter. На последнем применялся набор для лекарственного мониторинга CEDIA Tacrolimus Thermo Fisher Scientific.

Для анализа использовали образцы цельной венозной крови, в качестве антикоагулянта применялся К2ЭДТА. Все образцы были собраны с применением одноразовых вакуумных систем забора крови. При температуре хранения 2-8 °С образец стабилен в течение 7 дней.

В основе теста «CEDIA® Такролимус» лежит фермент ^-галактозидаза, который с помощью генно-инженерных методов был разделен на два неактивных фрагмента (донорскую и акцепторную части фермента). Эти фрагменты в растворе спонтанно связываются вновь, образуя действующие ферменты, которые расщепляют субстрат (хлорфенол красный-^- D-галакторинанозид), что приводит к изменению цвета, которое можно измерить методом спектрофотометрии.

В ходе анализа образец лекарственного препарата конкурирует с аналогом такролимуса, сопряженным с ферментным донором (ED) в-галактозидазы, за ограниченное число мест связывания антител аналога такролимуса. Если в образце присутствует лекарство, оно связывается с антителом аналога лекарства, при этом ED свободно сопрягается с ферментным акцептором (EA), образуя активные ферменты. Если в образце лекарства нет, антитело аналога лекарства связывается с аналогом лекарства, сопряженным с ED, подавляя повторное соединение ED с EA, при этом не происходит образования активного фермента. Количество образованного активного фермента и вызванное этим изменение абсорбции прямо пропорциональны содержанию анализируемого вещества в образце.

Подготовка образцов для определения уровня такролимуса на биохимическом анализаторе AU680 Beckman Coulter с использованием набора CEDIA Tacrolimus Thermo Fisher Scientific осуществлялась следующим методом:

  1. Калибраторам, стандартным растворам и образцам пациентов давали нагреться до комнатной температуры.
  2. Образцы тщательно перемешивали на гематологической мешалке.
  3. В пробирку для микроцентрифуги с круглым дном помещали 200 мкл образца.
  4. Готовили экстрагирующий реагент. Для этого смешивали реагент, входящий в состав набора (300 ммоль ZnSO4), с метанолом качества ВЭЖХ (чистота > 99,98%) в соотношении 1:4. Готовый экстрагирующий реагент можно использовать в течение 2 недель.
  5. В образец добавляли 200 мкл экстрагирующего реагента. Полученную смесь перемешивали на вортексе при максимальной скорости в течение 15-20 с до достижения полной гомогенности образца.
  6. Полученную смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 5 мин.
  7. Пробирки с полученной смесью центрифугировали в течение 5 мин при ускорении 12 000 G.
  8. Для проведения анализа использовали полученный супернатант.

Так как исследования концентрации такролимуса проводились параллельно на трех анализаторах разными методами, важно было установить, как соотносятся между собой полученные результаты.

Результаты измерения концентрации такролимуса в образцах крови пациентов

пациента

Концентрация такролимуса, измеренная на Abbott TDx, нг/мл

Концентрация такролимуса, измеренная на Abbott Architect, нг/мл

Концентрация такролимуса, измеренная на AU680 методом CEDIA Tacrolimus Thermofisher, нг/мл

i

11,0

9,0

10,8

2

9,0

8,9

9,2

3

2,1

1,6

3,5

4

4,7

4,8

3,8

5

6,9

6,7

7,1

6

7,7

8,9

8,0

7

11,6

13,6

10,7

8

12,8

11,2

11,5

9

14,0

13,0

14,6

10

12,5

-

13,9

11

6,4

-

7,5

12

4,7

3,3

4,5

13

-

14,4

12,7

14

-

6,7

6,0

Исходя из полученных данных, были построены линии регрессии и рассчитан коэффициент корреляции.

Измеренные концентрации такролимуса не коррелировали с дозировкой препарата. Это связано с тем, что скорость метаболизма данного препарата существенно различается у разных пациентов.

Показана хорошая корреляция результатов измерения концентрации такролимуса в образцах крови пациентов, проведенного методом CEDIA Tacrolimus на анализаторе AU680 Beckman Coulter, и результатов, полученных на анализаторе TDx Abbott. Несколько хуже корреляция с результатами, полученными на анализаторе Architect i100SR Abbott. Причина этого, возможно, кроется в различной специфичности методик к метаболитам такролимуса, содержащимся в образцах пациентов. При проведении лекарственного мониторинга иммуносупрессивных препаратов, помимо числового значения концентрации лекарственного средства, исключительную важность представляет динамика определяемых концентраций в течение длительного периода наблюдения за пациентом. Данные для большинства пациентов в Российской Федерации, принимающих такролимус, ранее получали именно на анализаторах TDx. Полученные данные позволяют нам с уверенностью говорить о возможности и целесообразности применения для терапевтического лекарственного мониторинга такролимуса реагентов Thermo Fisher Scientific CEDIA Tacrolimus на биохимическом анализаторе AU680 Beckman Coulter.

Отсутствие корреляции между вводимой дозой такролимуса и концентрацией препарата в образце крови объясняется разной скоростью метаболизма такролимуса у разных пациентов. Так, как скорость метаболизма данного препарата связана с активностью системы цитохрома Р-450, а именно с ферментом CYP3A4, показано генотипирование пациента перед началом иммуносупрессивной терапии. Это поможет быстрее подобрать требуемую дозировку такролимуса, однако не отменяет необходимости проведения терапевтического лекарственного мониторинга. Данные терапевтического лекарственного мониторинга особенно важны при применении других препаратов, метаболизирующихся в системе цитохрома Р-450, а также при переводе пациента с терапии одним иммуносупрессором на терапию другим иммуносупрессором.

Результаты проведенного исследования позволяют говорить о возможности применения для терапевтического лекарственного мониторинга такролимуса реагентов CEDIA Tacrolimus производства компании Thermo Fisher Scientific на биохимическом анализаторе AU680 Beckman Coulter.

С точки зрения экономической эффективности, использование реагентов Thermo Fisher Scientific CEDIA Tacrolimus на биохимическом анализаторе AU680 Beckman Coulter также представляется целесообразным, т. к. избавляет лабораторию от необходимости приобретать и обслуживать дополнительный прибор для проведения терапевтического лекарственного мониторинга.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.