Гирудин – антикоагулянт выбора при взятии крови для импедансометрического теста агрегации тромбоцитов

78

В последнее время в лабораторной оценке агрегации тромбоцитов отмечается тенденция к внедрению в практику методов агрегометрии цельной крови.

Технология импедансометрии

Технология импедансометрии позволяет значительно снизить вероятность преаналитических погрешностей и уменьшить время анализа благодаря отсутствию этапа центрифугирования, обязательного в оптической агрегометрии.

Для оценки влияния применения разных антикоагулянтов при взятии образцов цельной крови на импедансометрическую оценку агрегации тромбоцитов исследованы данные анализа агрегации тромбоцитов у 10 здоровых доноров. Оценка применения

Пробы крови забирали в вакутейнеры с цитратом натрия (3,2%), а также в моноветы с цитратным буфером или с рекомбинантным гирудином.

Анализ агрегации тромбоцитов проводили на анализаторе Chrono-Log (США) в цельной крови через 2 и 5 ч после венепункции с использованием в качестве индукторов АДФ (5 мкМ) и коллагена (2 мкг/мл). 

Показано, что использование в качестве антикоагулянта гирудина при импедансной агрегометрии проб цельной крови приводит к более высоким значениям АДФ- и коллаген-индуцированной активности тромбоцитов.

Лабораторная оценка

В последнее время анализ агрегации тромбоцитов в лабораторной оценке агрегации тромбоцитов отмечается тенденция к внедрению в практику методов агрегометрии цельной крови.

Технология импедансометрии позволяет значительно снизить вероятность преаналитических погрешностей и уменьшить время анализа благодаря отсутствию этапа центрифугирования, обязательного в оптической агрегометрии. 

Кроме того, проведение теста в образцах цельной крови обеспечивает условия анализа, близкие к процессам in vivo.

Импедансная агрегометрия цельной крови, как и оптический метод,

  • позволяет выявлять пациентов со склонностью к кровотечениям,
  • выявлять пациентов с наследственными нарушениями функции тромбоцитов,
  • проводить мониторинг антиагрегантной терапии. 

Вместе с тем серьезной проблемой при использовании тестов агрегации тромбоцитов in vitro является недостаточная корреляция их результатов с клиническими проявлениями нарушений гемостаза.

По данным разных исследований, результат анализа агрегации зависит как от выбранного метода исследования, так и от используемого при взятии крови антикоагулянта.

Кроме того, важным фактором, часто ограничивающим использование анализа агрегации тромбоцитов в практике клинико-диагностической лаборатории, является время хранения образца, которое при использовании цитрата натрия не должно превышать 4 ч с момента взятия крови. Стабильность функций тромбоцитов также зависит от использованных антикоагулянтов и индукторов агрегации.

Взятие образца цельной крови для исследования показателей гемостаза традиционно осуществляется с использованием в качестве антикоагулянта цитрата натрия.

Правила сбора биологических материалов

Правила сбора биологических материалов
посмотреть/скачать>>

Однако известно, что цитрат натрия связывает ионы кальция, необходимые для полноценной активации тромбоцитов, а также способен индуцировать секрецию гранул и формирование тромбоцитарных микровезикул. 

Также было выявлено, что нефракционированный и низкомолекулярный гепарин, в отличие от гирудина, стимулирует агрегацию в импедансометрическом тесте в пробах цельной крови. Гиперагрегационный феномен авторы связывают с активацией гепарином в условиях in vitro αIIbβ3 тромбоцитарных рецепторов, что влияет на возможность достоверной интерпретации полученных результатов.

Для получения надежных результатов при тестировании проб цельной крови на анализаторе функций тромбоцитов (PFA-100, PFA-200) предложено использовать специальные системы взятия крови с забуференным цитратом натрия, например S-Monovette® PFA и соблюдений условий утилизации отходов процедур.

Производители импедансометрических агрегометров Multiplate рекомендуют использовать при взятии крови, наряду с цитратом натрия, также и гирудин в качестве антикоагулянта. 

Вместе с тем, однозначных клинических рекомендаций по выбору антикоагулянтов и индукторов для импедансометрического определения функции тромбоцитов до сих пор не существует.

Чтобы оценить, как влияет применение разных антикоагулянтов при взятии образцов цельной крови на импедансометрическую оценку агрегации тромбоцитов, были исследованы данные анализа агрегации тромбоцитов у 10 здоровых доноров (женщин). 

Венозную кровь отбирали в стандартные системы взятия крови (вакутейнеры) с цитратом натрия 3,2% (BD Vacutainer®), S-Monovette® Citrate/Buffer 9 NC/PFA для анализатора PFA («Сарштедт»), S-Monovette® с r-гирудином («Сарштедт»). 

Исследования образцов крови

Исследования проводились на агрегометре Хронолог-700 (Chrono-Log, США) методом импеданса в цельной крови через 2 ч и через 5 ч после взятия образцов крови, индукция осуществлялась 5 мкМ АДФ и 2 мкг/мл коллагена. Статистический анализ данных осуществлялся с использованием критерия Вилкоксона, данные представлены в виде медианы и квартилей (C25-C75).

Можно отметить (рис.), что наибольшая величина амплитуды агрегации как при индукции АДФ, так и при индукции коллагеном наблюдалась при использовании гирудина в качестве антикоагулянта.

Величина амплитуды агрегации

Технология

Взятие крови для импедансометрического теста

Влияние антикоагулянта и времени, прошедшего с момента взятия крови, на амплитуду агрегации: А — индуктор АДФ, Б индуктор коллаген; р 0,05: * по сравнению с агрегацией через 2 ч,сравнению с гирудином

В целом при использовании в качестве индуктора АДФ, спустя 2 ч с момента взятия крови, амплитуда агрегации статистически достоверно увеличивалась в ряду: PFA — цитрат-гирудин, а спустя 5 ч с момента взятия статистически значимо (p < 0,05) уменьшалась для всех исследуемых антикоагулянтов, но в разной степени: для PFA и цитрата натрия — почти на 100%, а для гирудина — на 53% по сравнению с начальным уровнем (рис. А).

При использовании в качестве индуктора коллагена амплитуда агрегации спустя 2 ч после взятия крови была статистически значимо ниже для образцов крови с PFA и цитратом натрия по сравнению с гирудином (рис. Б).

Спустя 5 ч с момента взятия крови амплитуда агрегации для всех антикоагулянтов при индукции коллагеном значимо не изменилась. Таким образом, при использовании в качестве индуктора агрегации коллагена возможно увеличить время хранения образца до исследования.

Факт наименьшей сохранности проб при индукции АДФ был ранее описан в ряде исследований. При хранении цельной крови происходит снижение pH, что влияет на агрегацию при использовании в качестве индуктора АДФ, но не на коллаген-индуцированную агрегацию.

Кроме того, происходит активация тромбоцитов и секреция содержимого гранул — АТФ, АДФ и т. д., вследствие чего кровяные пластинки становятся менее чувствительными к действию «слабого индуктора» АДФ.

Еще одной причиной описанного феномена может являться снижение концентрации внеклеточного кальция при хранении образца цельной крови, который в большей степени необходим для АДФ-индуцированной агрегации, чем для индукции агрегации коллагеном.

Очевидно, что PFA в связи с очень низкой сохранностью функциональных свойств тромбоцитов не может являться антикоагулянтом выбора для исследования агрегации методом импеданса на агрегометре Chrono-Log, что, вероятно, связано с неоптимальным уровнем pH в результате добавления буферного раствора к цитрату натрия при подготовке систем S-Monovette® PFA.

Использование гирудина

Напротив, использование гирудина может быть более целесообразным, чем применение традиционного цитрата натрия, потому что позволяет сохранять агрегационные свойства тромбоцитов более длительное время, а также проводить измерение в условиях, близких к in vivo, — при физиологических концентрациях кальция.

Таким образом, использование в качестве антикоагулянта гирудина при импедансной агрегометрии проб цельной крови приводит к получению более высоких значений активности тромбоцитов при индукции АДФ и коллагеном.

Использование коллагена в качестве индуктора позволяет увеличить традиционный интервал измерения агрегации с 4 до 5 ч с момента взятия крови.

Гирудин может быть рекомендован как антикоагулянт выбора для исследования функции тромбоцитов на агрегометре Chrono-Log.

Несмотря на появление новых, более совершенных и эффективных лабораторных тестов агрегации тромбоцитов, исторически сложившаяся концепция сравнения новых технологий с до сих пор не сдающим своих позиций «золотым стандартом» — оптической агрегометрией — продолжает существовать; и только высокозначимая корреляция результатов этих методов в большинстве случаев позволяет оправдать их клиническое применение.

Очевидно, что достигнуть консенсуса в вопросе стандартизации агрегометрии возможно только при использовании в качестве референсных глобальных тестов свертывания крови, выполняя исследование сразу после получения проб крови с учетом влияния всех основных участников тромбообразования.

Статья из журнала "Справочник заведующего КДЛ" № 11, 2015

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×