text
Портал для медицинских работников

Стандартизация преаналитики исследования гомоцистеина

  • 7 марта 2018
  • 118

Свойства аналитаОбзор посвящен методическим аспектам преаналитического этапа определения концентрации гомоцистеина, особенности которого обусловлены свойствами аналита.

Приведены сведения о физиологическом и клиническом значении гомоцистеина, основных заболеваниях, фактором риска которого он является.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Сопоставление данных литературы позволяет авторам обозначить компоненты преаналитического этапа исследования уровня гомоцистеина, критические в отношении достоверности результатов анализа.

Гомоцистеин — аминокислота, образующаяся в ходе превращения незаменимой кислоты метионина в цистеин при участии фолиевой кислоты, витаминов В12 и В6.


Метионин поступает в организм с пищей (красное мясо, треска, соя, горох, фасоль, гречневая крупа и др.), необходим для синтеза белков и коротких пептидов, принимает участие в процессах инактивации метаболитов гормонов и лекарственных препаратов.

Функция гомоцистеина заключается в резервном обеспечении организма метионином и цистеином, поскольку он может либо снова быть восстановлен до метионина, либо подвергаться дальнейшему превращению в цистеин (рис. 1).

Рис. 1. Схема метаболизма метионина

Молекулярная масса

Молекулярная масса гомоцистеина — 135,18 г/моль. Наличие в химической формуле гомоцистеина двойной связи обусловливает его нестабильность (рис. 2).

Причины высокого уровня

Рис. 2. 2-амино-4-меркаптобутановая кислота (гомоцистеин)

Причины повышения уровня гомоцистеина в крови

В плазме крови только 1–2% гомоцистеина находится в свободном восстановленном состоянии, примерно 20% — в окисленном, в виде дисульфидов, и около 80% связано с белками плазмы крови. Комбинацию всех возможных форм гомоцистеина объединяет термин «общий гомоцистеин».

Циркулирующее в крови количество общего гомоцистеина в норме составляет до 15 мкмоль/л. Внутрииндивидуальная вариация уровня гомоцистеина составляет, по данным «Клинического руководства Тица по лабораторным тестам», 8% за год (при анализе утром натощак после легкого ужина), хотя у пациентов с гипергомоцистеинемией может достигать 25–34%.

Гомоцистеин слабо фильтруется почками, между тем обладает выраженным токсическим действием на клетку. По данным разных авторов, распространенность гипергомоцистеинемии в общей популяции — 5%, а среди больных с симптомами атеросклеротического поражения артерий — 13–47%.

В связи с особенностями метаболизма к наиболее частым причинам повышения уровня гомоцистеина в крови относятся витаминодефицитные состояния, в частности недостаток фолиевой кислоты и витаминов B6, B12 и B1.

Витаминодефицитные состоянияВ некоторых случаях гипергомоцистеинемию можно рассматривать лишь в качестве признака нездорового образа жизни. К числу заболеваний, сопровождающихся гипергомоцистеинемией, относят язвенный колит, болезнь Крона, целиакию, энтерит, гастрит, язвенную болезнь и другие патологические состояния, сопровождающиеся снижением всасывания витаминов В6, В12, фолиевой кислоты.

В различных исследованиях выявлена высокая корреляция между уровнем гомоцистеина плазмы крови и количеством потребляемого кофе. Кроме того, среди факторов, располагающих к гипергомоцистеинемии, присутствуют малоподвижный образ жизни, употребление наркотиков, психоэмоциональные нагрузки и курение.

У лиц, страдающих хроническим алкоголизмом, содержание гомоцистеина в плазме крови почти вдвое выше, чем у непьющих, что также может быть связано со снижением количества витамина В6 в плазме крови и фолатов в эритроцитах.

На метаболизм гомоцистеина могут также оказывать значимое влияние нарушения функции почек, что, возможно, связано со снижением экскреции креатинина и гомоцистеина, нарушением окисления гомоцистеина до СО2 и сульфатов и увеличением экскреции фолатов.

Пролиферативные заболевания, такие как псориаз, системная красная волчанка, лимфобластный лейкоз, рак молочной железы, яичников, поджелудочной железы, также сопровождаются повышением концентрации гомоцистеина в крови вследствие увеличения числа делящихся клеток.

К транзиторному повышению уровня гомоцистеина приводит применение некоторых лекарственных препаратов:

  1. Закись азота при анестезии ингибирует метионинсинтетазу.
  2. Метилпреднизолон снижает концентрацию витамина В6.
  3. Эстраген-содержащие контрацептивы, противосудорожные препараты нарушают обмен фолиевой кислоты в печени.
  4. Теофиллины — конкурентные ингибиторы фосфодиэстеразы — вызывают снижение метаболизма витамина В6.

Референтные интервалы уровня гомоцистеина в крови

До полового созревания содержание гомоцистеина в крови мальчиков и девочек примерно одинаково — около 5 мкмоль/л; позднее уровень гомоцистеина возрастает на 3–5 мкмоль/л, причем у мальчиков сильнее, чем у девочек и соответственно возрасту укладывается в следующие референтные интервалы.

Интервалы уровня гомоцистеина в крови, мкмоль/л

Интервалы уровня гомоцистеина в крови, мкмоль/л
посмотреть/скачать>>

При повышении уровня гомоцистеина более 15 мкмоль/л диагностируют умеренную, более 30 мкмоль/л — среднюю, более 100 мкмоль/л — тяжелую гипергомоцистеинемию.

В зависимости от популяции до 10% населения имеет умеренную, приблизительно 1% — среднюю и 0,02% — тяжелую гипергомоцистеинемию.

Считается, что повышение уровня гомоцистеина крови на 5 мкМ приводит к увеличению риска атеросклеротического поражения сосудов на 80% у женщин и на 60% у мужчин.

Повышенное внимание к проблеме гипергомоцистеинемии создало потребность в составлении рекомендаций для врачей общего профиля и кардиологов. Так, Нидерландская ассоциация сердца в 2001 году опубликовала рекомендации по диагностике, лечению и профилактике гипергомоцистеинемии.

Пациентам с выявленной гипергомоцистеинемией (более 15 мкмоль/л) рекомендуется ежедневный прием 500 мкг фолиевой кислоты. Наблюдение за пациентами включает ежемесячный мониторинг концентрации гомоцистеина в крови.


Влияние преаналитического этапа на клиническую достоверность анализа

Достоверность анализаТаким образом, критическим в отношении выявления порогового значения и назначения терапии оказывается вопрос, с какой точностью может быть измерен уровень гомоцистеина в лаборатории и какой процент изменения его концентрации у конкретного пациента можно достоверно считать динамикой.

Известно, что особенности проведения преаналитического и аналитического этапов исследования вносят свои погрешности в результат анализа, в связи с чем любой диагностической либо научно-практической работе должна предшествовать оценка клинической и аналитической точности определения аналита.

Неслучайно оценка качества и стандартизация лабораторных исследований — одни из наиболее актуальных направлений развития лабораторной диагностики во всем мире.

Многие авторы в научных публикациях отмечают, что для корректного и клинически достоверного определения уровня гомоцистеина в крови необходимо пользоваться высокочувствительным и, что чрезвычайно важно, воспроизводимым и стандартизированным методом детекции.

Взятие крови для исследования гомоцистеина рекомендуется проводить после 12-часового голодания, либо ужин накануне должен быть ограничен в белках. Известно, что после приема содержащей метионин белковой пищи уровень гомоцистеина в крови достигает максимума через 6–8 ч, затем медленно снижается с периодом полувыведения 3–4 ч.

Отмечены колебания в сторону снижения уровня гомоцистеина в крови на 5–10% спустя 30 мин после принятия горизонтального положения.

При определении концентрации гомоцистеина, как и многих других аналитов, вопрос выбора биоматериала окончательно не решен. Согласно данным, представленным в «Клиническом руководстве Тица по лабораторным тестам», уровень гомоцистеина при определении в цитратной плазме на 10–25% ниже, чем в сыворотке крови.

Однако в инструкции к набору реагентов «Гомоцистеин» для анализатора «Иммулайт XPi» указывается, что в качестве образца для исследования предпочтительнее плазма крови, полученная при применении ЭДТА или гепарина, однако использование сыворотки тоже допускается.

Важное условие пробоподготовки — быстрое отделение сыворотки или плазмы от форменных элементов крови, поскольку после взятия крови продолжается высвобождение гомоцистеина в плазму за счет разрушения S-аденозил-гомоцистеина.

В связи с этим, с момента взятия крови и до центрифугирования образцы необходимо хранить во льду. В инструкции к набору реагентов «Гомоцистеин» для анализатора «Иммулайт XPi» представлены результаты исследования уровня гомоцистеина в сыворотке и плазме крови 5 здоровых доноров, свидетельствующие, что хранение проб при комнатной температуре до отделения клеточной фракции приводит к завышению результатов на 10–30%.

Однако в ГОСТ Р 53079.4–2008 содержится информация о том, что стабильность гомоцистеина в крови удовлетворительна в течение 1 ч при комнатной температуре (соответствует данным «Клинического руководства Тица по лабораторным тестам») и 6 ч в условиях холодильника.

В соответствии с инструкцией хранение образцов может осуществляться при температуре 2–8 оС 14 дней, а по рекомендациям ГОСТ Р 53079.4–2008 — 4 нед. В «Клиническом руководстве Тица по лабораторным тестам» указано, что пробы после отделения эритроцитов стабильны также и при комнатной температуре в течение 4 ч.

Производитель набора реагентов «Гомоцистеин» для анализатора «Иммулайт XPi» также обращает особое внимание на то, что на результаты анализа может влиять использование для взятия образца пробирок некоторых производителей в связи с различиями в материале, из которого они изготовлены, а также в гелевых или других барьерах, активаторах формирования фибринового сгустка и антикоагулянтах.

Вызывает интерес возможность применения вакуумных пробирок VACUETTE, содержащих забуференный раствор натрия цитрата/лимонной кислоты (рН = 4,2) для стабилизации гомоцистеина в образце крови.

В соответствии с инструкцией, благодаря стабилизатору, уровень гомоцистеина не изменяется в течение 6 ч при комнатной температуре и 72 ч при температуре 4 оС (при корректном заполнении пробирки до линии наполнения на этикетке).

Производитель гарантирует отсутствие необходимости центрифугирования пробирок сразу после взятия крови и возможность транспортирования при комнатной температуре без охлаждения. В прилагаемой инструкции указано, что пробирки с пробами следует центрифугировать непосредственно перед исследованием проб в лаборатории!

Полученный результат определения концентрации гомоцистеина в плазме необходимо умножить на фактор разведения цитратом1,11. Производитель тем не менее предостерегает, что совместимость вакуумных пробирок VACUETTE для определения гомоцистеина с ферментативными методами исследования не гарантирована.

Таким образом, использование вакуумных пробирок VACUETTE для определения гомоцистеина позволяет за счет повышения стабильности гомоцистеина в образце крови стандартизировать наиболее критический компонент преаналитического этапа исследования: взятие крови и ее хранение до момента центрифугирования.

Однако существует необходимость оценить влияние такого подхода на аналитические характеристики метода, в том числе правильность и прецизионность.

С точки зрения влияния на достоверность результатов представляются неоднозначными некоторые компоненты преаналитического этапа исследования гомоцистеина, а именно: выбор пробирки для взятия крови и способ ее хранения до и после отделения клеточной фракции.

Между тем необходимо учитывать, что диагностика гипергомоцистеинемии проводится при многих патологических состояниях и контингент пациентов, нуждающихся в исследовании уровня гомоцистеина, крайне неоднороден. Взятие крови пациентов проводят на базе поликлиник, женских консультаций, стационаров, в том числе отделений реанимации и интенсивной терапии.

В большинстве случаев исследование гомоцистеина проводят в динамике с целью оценки эффективности проводимой терапии, зачастую при этом сравнивают результаты проб, полученных в разных условиях.

Следует отметить, что определение гомоцистеина, несмотря на его доказанную клиническую значимость и востребованность, выполняют только в централизованной лаборатории. Перечисленные факторы с трудом поддаются стандартизации, что влияет на точность полученных результатов.

Таким образом, в настоящее время отсутствуют согласованные, достаточные по количеству и валидные с точки зрения метода и условий их получения данные об индивидуальной и биологической вариации, а также стабильности гомоцистеина, что крайне необходимо для успешной стандартизации и обеспечения клинической точности лабораторного исследования.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Сайт предназначен для медицинских работников!


Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

Читайте экспертные
материалы

Скачивайте готовые
формы и СОПы

Смотрите
бесплатные вебинары

13 000 статей

1 500 инструкций

200 записей

Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
×

×

×

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.