Стандартизация преаналитики исследования гомоцистеина

103

Свойства аналитаОбзор посвящен методическим аспектам преаналитического этапа определения концентрации гомоцистеина, особенности которого обусловлены свойствами аналита.

Приведены сведения о физиологическом и клиническом значении гомоцистеина, основных заболеваниях, фактором риска которого он является.

Сопоставление данных литературы позволяет авторам обозначить компоненты преаналитического этапа исследования уровня гомоцистеина, критические в отношении достоверности результатов анализа.

Гомоцистеин — аминокислота, образующаяся в ходе превращения незаменимой кислоты метионина в цистеин при участии фолиевой кислоты, витаминов В12 и В6.


Метионин поступает в организм с пищей (красное мясо, треска, соя, горох, фасоль, гречневая крупа и др.), необходим для синтеза белков и коротких пептидов, принимает участие в процессах инактивации метаболитов гормонов и лекарственных препаратов.

Функция гомоцистеина заключается в резервном обеспечении организма метионином и цистеином, поскольку он может либо снова быть восстановлен до метионина, либо подвергаться дальнейшему превращению в цистеин (рис. 1).

Рис. 1. Схема метаболизма метионина

Молекулярная масса

Молекулярная масса гомоцистеина — 135,18 г/моль. Наличие в химической формуле гомоцистеина двойной связи обусловливает его нестабильность (рис. 2).

Причины высокого уровня

Рис. 2. 2-амино-4-меркаптобутановая кислота (гомоцистеин)

Причины повышения уровня гомоцистеина в крови

В плазме крови только 1–2% гомоцистеина находится в свободном восстановленном состоянии, примерно 20% — в окисленном, в виде дисульфидов, и около 80% связано с белками плазмы крови. Комбинацию всех возможных форм гомоцистеина объединяет термин «общий гомоцистеин».

Циркулирующее в крови количество общего гомоцистеина в норме составляет до 15 мкмоль/л. Внутрииндивидуальная вариация уровня гомоцистеина составляет, по данным «Клинического руководства Тица по лабораторным тестам», 8% за год (при анализе утром натощак после легкого ужина), хотя у пациентов с гипергомоцистеинемией может достигать 25–34%.

Гомоцистеин слабо фильтруется почками, между тем обладает выраженным токсическим действием на клетку. По данным разных авторов, распространенность гипергомоцистеинемии в общей популяции — 5%, а среди больных с симптомами атеросклеротического поражения артерий — 13–47%.

В связи с особенностями метаболизма к наиболее частым причинам повышения уровня гомоцистеина в крови относятся витаминодефицитные состояния, в частности недостаток фолиевой кислоты и витаминов B6, B12 и B1.

Витаминодефицитные состоянияВ некоторых случаях гипергомоцистеинемию можно рассматривать лишь в качестве признака нездорового образа жизни. К числу заболеваний, сопровождающихся гипергомоцистеинемией, относят язвенный колит, болезнь Крона, целиакию, энтерит, гастрит, язвенную болезнь и другие патологические состояния, сопровождающиеся снижением всасывания витаминов В6, В12, фолиевой кислоты.

В различных исследованиях выявлена высокая корреляция между уровнем гомоцистеина плазмы крови и количеством потребляемого кофе. Кроме того, среди факторов, располагающих к гипергомоцистеинемии, присутствуют малоподвижный образ жизни, употребление наркотиков, психоэмоциональные нагрузки и курение.

У лиц, страдающих хроническим алкоголизмом, содержание гомоцистеина в плазме крови почти вдвое выше, чем у непьющих, что также может быть связано со снижением количества витамина В6 в плазме крови и фолатов в эритроцитах.

На метаболизм гомоцистеина могут также оказывать значимое влияние нарушения функции почек, что, возможно, связано со снижением экскреции креатинина и гомоцистеина, нарушением окисления гомоцистеина до СО2 и сульфатов и увеличением экскреции фолатов.

Пролиферативные заболевания, такие как псориаз, системная красная волчанка, лимфобластный лейкоз, рак молочной железы, яичников, поджелудочной железы, также сопровождаются повышением концентрации гомоцистеина в крови вследствие увеличения числа делящихся клеток.

К транзиторному повышению уровня гомоцистеина приводит применение некоторых лекарственных препаратов:

  1. Закись азота при анестезии ингибирует метионинсинтетазу.
  2. Метилпреднизолон снижает концентрацию витамина В6.
  3. Эстраген-содержащие контрацептивы, противосудорожные препараты нарушают обмен фолиевой кислоты в печени.
  4. Теофиллины — конкурентные ингибиторы фосфодиэстеразы — вызывают снижение метаболизма витамина В6.

Референтные интервалы уровня гомоцистеина в крови

До полового созревания содержание гомоцистеина в крови мальчиков и девочек примерно одинаково — около 5 мкмоль/л; позднее уровень гомоцистеина возрастает на 3–5 мкмоль/л, причем у мальчиков сильнее, чем у девочек и соответственно возрасту укладывается в следующие референтные интервалы.

Интервалы уровня гомоцистеина в крови, мкмоль/л

Интервалы уровня гомоцистеина в крови, мкмоль/л
посмотреть/скачать>>

При повышении уровня гомоцистеина более 15 мкмоль/л диагностируют умеренную, более 30 мкмоль/л — среднюю, более 100 мкмоль/л — тяжелую гипергомоцистеинемию.

В зависимости от популяции до 10% населения имеет умеренную, приблизительно 1% — среднюю и 0,02% — тяжелую гипергомоцистеинемию.

Считается, что повышение уровня гомоцистеина крови на 5 мкМ приводит к увеличению риска атеросклеротического поражения сосудов на 80% у женщин и на 60% у мужчин.

Повышенное внимание к проблеме гипергомоцистеинемии создало потребность в составлении рекомендаций для врачей общего профиля и кардиологов. Так, Нидерландская ассоциация сердца в 2001 году опубликовала рекомендации по диагностике, лечению и профилактике гипергомоцистеинемии.

Пациентам с выявленной гипергомоцистеинемией (более 15 мкмоль/л) рекомендуется ежедневный прием 500 мкг фолиевой кислоты. Наблюдение за пациентами включает ежемесячный мониторинг концентрации гомоцистеина в крови.


Влияние преаналитического этапа на клиническую достоверность анализа

Достоверность анализаТаким образом, критическим в отношении выявления порогового значения и назначения терапии оказывается вопрос, с какой точностью может быть измерен уровень гомоцистеина в лаборатории и какой процент изменения его концентрации у конкретного пациента можно достоверно считать динамикой.

Известно, что особенности проведения преаналитического и аналитического этапов исследования вносят свои погрешности в результат анализа, в связи с чем любой диагностической либо научно-практической работе должна предшествовать оценка клинической и аналитической точности определения аналита.

Неслучайно оценка качества и стандартизация лабораторных исследований — одни из наиболее актуальных направлений развития лабораторной диагностики во всем мире.

Многие авторы в научных публикациях отмечают, что для корректного и клинически достоверного определения уровня гомоцистеина в крови необходимо пользоваться высокочувствительным и, что чрезвычайно важно, воспроизводимым и стандартизированным методом детекции.

Взятие крови для исследования гомоцистеина рекомендуется проводить после 12-часового голодания, либо ужин накануне должен быть ограничен в белках. Известно, что после приема содержащей метионин белковой пищи уровень гомоцистеина в крови достигает максимума через 6–8 ч, затем медленно снижается с периодом полувыведения 3–4 ч.

Отмечены колебания в сторону снижения уровня гомоцистеина в крови на 5–10% спустя 30 мин после принятия горизонтального положения.

При определении концентрации гомоцистеина, как и многих других аналитов, вопрос выбора биоматериала окончательно не решен. Согласно данным, представленным в «Клиническом руководстве Тица по лабораторным тестам», уровень гомоцистеина при определении в цитратной плазме на 10–25% ниже, чем в сыворотке крови.

Однако в инструкции к набору реагентов «Гомоцистеин» для анализатора «Иммулайт XPi» указывается, что в качестве образца для исследования предпочтительнее плазма крови, полученная при применении ЭДТА или гепарина, однако использование сыворотки тоже допускается.

Важное условие пробоподготовки — быстрое отделение сыворотки или плазмы от форменных элементов крови, поскольку после взятия крови продолжается высвобождение гомоцистеина в плазму за счет разрушения S-аденозил-гомоцистеина.

В связи с этим, с момента взятия крови и до центрифугирования образцы необходимо хранить во льду. В инструкции к набору реагентов «Гомоцистеин» для анализатора «Иммулайт XPi» представлены результаты исследования уровня гомоцистеина в сыворотке и плазме крови 5 здоровых доноров, свидетельствующие, что хранение проб при комнатной температуре до отделения клеточной фракции приводит к завышению результатов на 10–30%.

Однако в ГОСТ Р 53079.4–2008 содержится информация о том, что стабильность гомоцистеина в крови удовлетворительна в течение 1 ч при комнатной температуре (соответствует данным «Клинического руководства Тица по лабораторным тестам») и 6 ч в условиях холодильника.

В соответствии с инструкцией хранение образцов может осуществляться при температуре 2–8 оС 14 дней, а по рекомендациям ГОСТ Р 53079.4–2008 — 4 нед. В «Клиническом руководстве Тица по лабораторным тестам» указано, что пробы после отделения эритроцитов стабильны также и при комнатной температуре в течение 4 ч.

Производитель набора реагентов «Гомоцистеин» для анализатора «Иммулайт XPi» также обращает особое внимание на то, что на результаты анализа может влиять использование для взятия образца пробирок некоторых производителей в связи с различиями в материале, из которого они изготовлены, а также в гелевых или других барьерах, активаторах формирования фибринового сгустка и антикоагулянтах.

Вызывает интерес возможность применения вакуумных пробирок VACUETTE, содержащих забуференный раствор натрия цитрата/лимонной кислоты (рН = 4,2) для стабилизации гомоцистеина в образце крови.

В соответствии с инструкцией, благодаря стабилизатору, уровень гомоцистеина не изменяется в течение 6 ч при комнатной температуре и 72 ч при температуре 4 оС (при корректном заполнении пробирки до линии наполнения на этикетке).

Производитель гарантирует отсутствие необходимости центрифугирования пробирок сразу после взятия крови и возможность транспортирования при комнатной температуре без охлаждения. В прилагаемой инструкции указано, что пробирки с пробами следует центрифугировать непосредственно перед исследованием проб в лаборатории!

Полученный результат определения концентрации гомоцистеина в плазме необходимо умножить на фактор разведения цитратом1,11. Производитель тем не менее предостерегает, что совместимость вакуумных пробирок VACUETTE для определения гомоцистеина с ферментативными методами исследования не гарантирована.

Таким образом, использование вакуумных пробирок VACUETTE для определения гомоцистеина позволяет за счет повышения стабильности гомоцистеина в образце крови стандартизировать наиболее критический компонент преаналитического этапа исследования: взятие крови и ее хранение до момента центрифугирования.

Однако существует необходимость оценить влияние такого подхода на аналитические характеристики метода, в том числе правильность и прецизионность.

С точки зрения влияния на достоверность результатов представляются неоднозначными некоторые компоненты преаналитического этапа исследования гомоцистеина, а именно: выбор пробирки для взятия крови и способ ее хранения до и после отделения клеточной фракции.

Между тем необходимо учитывать, что диагностика гипергомоцистеинемии проводится при многих патологических состояниях и контингент пациентов, нуждающихся в исследовании уровня гомоцистеина, крайне неоднороден. Взятие крови пациентов проводят на базе поликлиник, женских консультаций, стационаров, в том числе отделений реанимации и интенсивной терапии.

В большинстве случаев исследование гомоцистеина проводят в динамике с целью оценки эффективности проводимой терапии, зачастую при этом сравнивают результаты проб, полученных в разных условиях.

Следует отметить, что определение гомоцистеина, несмотря на его доказанную клиническую значимость и востребованность, выполняют только в централизованной лаборатории. Перечисленные факторы с трудом поддаются стандартизации, что влияет на точность полученных результатов.

Таким образом, в настоящее время отсутствуют согласованные, достаточные по количеству и валидные с точки зрения метода и условий их получения данные об индивидуальной и биологической вариации, а также стабильности гомоцистеина, что крайне необходимо для успешной стандартизации и обеспечения клинической точности лабораторного исследования.

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка
      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...







      Наши продукты






















      © 2006–2018 ООО «МЦФЭР», медиагруппа «Актион-МЦФЭР»

      Журнал «Здравоохранение» –
      практический журнал для главного врача.

      Все права защищены. Полное или частичное копирование любых материалов сайта возможно только с письменного разрешения редакции журнала «Здравоохранение».
      Нарушение авторских прав влечет за собой ответственность в соответствии с законодательством РФ.

      Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор)
      Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать документ на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 12 000 статей
      — 8 000 ответов на вопросы
      — 200 видеосеминаров
      — готовые формы и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные сервисы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!


      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Скачать файл может только медицинский работник!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Изображение предназначено для медицинских работников!


      Чтобы подтвердить ваш статус, зарегистрируйтесь, и:

      Читайте экспертные
      материалы

      Скачивайте готовые
      формы и СОПы

      Смотрите
      бесплатные вебинары

      13 000 статей

      1 500 инструкций

      200 записей

      Абонемент в электронную медицинскую библиотеку в подарок!

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×