text

🍁 Осенний ценопад: скидка 20%! УСПЕТЬ ➤➤➤

Портал для медицинских работников

Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

  • 16 августа 2018
  • 54

Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекцийВ статье описаны особенности бактериологической диагностики стафилококковых инфекций, рассказано о различных питательных средах, используемых для выявления стафилококковой инфекции в целях своевременного и эффективного назначения антибактериальной терапии, определения бактерионосителей, установления факторов передачи инфекции.

Стафилококки сохраняют существенное значение в этиологической структуре гнойно-воспалительных заболеваний.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,


Главное в статье:


Диагностика стафилококковых инфекций

Помимо золотистого стафилококка, важную роль в качестве возбудителей этих инфекций играют S. epidermidis и другие виды коагулазоотрицательных стафилококков.

На коже здорового человека эпидермальный стафилококк обосновывается довольно часто, но никак себя не выдает.

Причина заключается в его низком инфекционном потенциале. В отличие от своего «собрата», золотистого стафилококка, который отличается высокой агрессивностью и способен вызывать тяжелые гнойные патологии (в том числе поражение костей — остеомиелит и головного мозга — менингит), эпидермальная разновидность вызывает такие заболевания, как эндокардит, конъюнктивит, инфекция ран и мочевыводящих путей.

Специфическая симптоматика эпидермального стафилококка характеризуется триадой признаков: проявление общей интоксикации, развитие местных кожных очаговых поражений, изменения в работе различных органов и систем (почки, печень, сердце).

Золотистый стафилококк (МRSA) обладает необыкновенным разнообразием факторов вирулентности, что позволяет ему выживать в экстремальных условиях в организме-хозяине.


За последние 10 лет появились новые клоны МRSA, которые быстро распространились по континентам, что привело к разгулу некоторых необычно тяжелых заболеваний.

Изучение бактериальных факторов должно быть расширено до анализа, выходящего за рамки традиционного тестирования на вирулентность, включая колонизацию, устойчивость к условиям окружающей среды, в соответствии с эпидемиологическими данными.

Стафилококки хорошо растут как на простых, так и на селективных и неселективных питательных средах отечественного и зарубежного производства; образуют неодинаковые пигментированные и непигментированные колонии, иногда в зависимости от состава среды.

Для выделения стафилококков обычно используют агаризованные среды: агар Частовича, агар Петровича, элективно-солевой агар, стафилококкагар, среду Чемпена, маннит-солевой агар, маннит-солевой агар с добавлением желтка, молока, колумбийский агар с добавками колистина и налидиксовой кислоты (SNA), агар Фогеля — Джонсона (Vogel — Johnson Agar Medium) с добавлением теллурита калия, агар Baird — Parker с добавлением яичного желтка и теллурита калия и др.

Эти среды ингибируют рост грамотрицательных, а также многих грамположительных бактерий и разработаны для дифференциации S. aureus и других представителей рода.

Выделение чистой культуры возбудителя на основных средах осуществляется с учетом его культуральных особенностей галофильности (хорошее развитие в присутствии избыточного содержания поваренной соли при одновременном угнетении прочей микрофлоры).



Методики определения

При использовании методики определения количества S. aureus с предварительным обогащением  применяют селективные бульоны: солевой, Жиолитти — Кантони с добавлением теллурита калия, лактозо-солевой с фенолротом и др.

Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на бульонах, к S. aureus, проводят пересев петлей на агаризованные среды для получения изолированных колоний.

Однако открытие других видов стафилококков, по своим культуральным и биохимическим свойствам схожих с S. aureus, делают такую идентификацию лишь ориентировочной.

Продолжительность инкубации на селективных средах составляет 24–48 ч при температуре 35–37 ºС. Колонии всех описанных видов и подвидов могут быть различимы на триптиказо-соевом агаре, особенно при использовании для сравнения контрольных штаммов соответствующих таксонов.

Пигментированные колонии S. aureus обычно имеют кремово-желтую, желтую, лимонно-желтую, желто-оранжевую или оранжевую окраску.

У некоторых штаммов S. epidermidis, S. intermedius, S. lentus колонии могут иметь слабо-фиолетовый, розоватый или коричневатый оттенок.

Представители анаэробного вида S. saccharolyticus и подвида S. aureus subsp. anaerobius хорошо растут на триптиказо-соевом агаре в анаэробных и плохо — в аэробных условиях.


Культуральный метод с использованием различных питательных сред можно применять для лабораторной диагностики стафилококковых инфекций различного происхождения, а также при эпидемиологическом анализе различных эпидемических ситуаций, обусловленных этим возбудителем.

Этот метод включают в себя использование накопительных и элективных питательных сред и создание условий культивирования для преимущественного накопления в культуре нужных форм микробов, способы получения чистых культур из отдельных колоний или клеток микроорганизмов.

При росте в жидких неселективных питательных средах стафилококки дают равномерное помутнение с последующим выпадением рыхлого осадка (рис. 1).
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

Рис. 1. Рост S. aureus в питательном бульоне: помутнение (А), выпадение осадка (Б)

Для выращивания стафилококков при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств и других объектов, а также при проведении исследований в санитарной и клинической микробиологии используют питательную среду № 8 ГРМ.

Сбалансированный состав среды обеспечивает питательные потребности для характерного роста S. aureus в виде диффузного помутнения среды через 21 ± 3 ч при температуре культивирования 33 ± 2 ºС.

Питательная среда высокочувствительна и обеспечивает рост стафилококков при посеве из разведения 10-8 (рис. 2).
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

Рис. 2. Рост S. aureus АТСС 6538-Р на среде № 8 ГРМ (А), контроль (незасеянная среда) (Б)

Для выделения возбудителя стафилококковой инфекции исследуемый материал засевают на различные питательные среды: кровяной агар (для определения гемолиза), молочно-солевой, желточно-солевой агар (для выявления пигмента и лецитиназы), маннит-солевой агар (для определения ферментации маннита).

Выделенную с агаризованных питательных сред культуру, характерную для стафилококков, идентифицируют по видовым признакам.

После инкубации у изолятов проверяют основные признаки: (морфологию, тинкториальные свойства, пигмент, ферментацию маннита), факторы патогенности (наличие гемолиза, плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции) с обязательным определением чувствительности к антибиотикам; в случае необходимости проводят фаготипирование. S. aureus отличается от других видов стафилококка по наличию золотистой пигментации колоний и положительных результатов тестов на коагулазу, сбраживание маннита и наличие дезоксирибонуклеазы.

Ассортимент дифференциальных, элективных и накопительных сред, предложенных для выявления стафилококков, весьма значителен и продолжает расширяться.

Рост S. aureus на питательной среде для выделения стафилококков (стафилококкагар) представлен на рис. 3.

Стафилококкагар полностью подавляет рост эшерихий через 48 ± 2 ч инкубации при температуре 37 ± 1 °С и синегнойной палочки, не влияя на рост стафилококков.
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

Рис. 3. Рост S. aureus на стафилококкагаре

Для выделения стафилококков используют высокоселективную питательную среду — агар Фогель — Джонсона.

Приготовление агара Фогель — Джонсона предусматривает внесение 2%-ного раствора теллурита калия, который используют для подавления сопутствующей микрофлоры.

Ферментирующие маннит стафилококки образуют на среде черные колонии (реакция восстановления теллурита до металлического теллура), окруженные желтой зоной (рис. 4), не ферментирующие маннит — черные колонии без пожелтения среды вокруг.

Рис. 4. Рост S. аureus на агаре Фогель — Джонсона
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

Золотисто-желтые колонии, окруженные желтыми зонами, на питательной среде № 10 ГРМ свидетельствуют о наличии S. aureus (рис. 5).

Питательную среду используют для идентификации стафилококков при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств по признаку ферментации маннита, а также при проведении исследований в санитарной и клинической микробиологии.

В питательную среду возможно внесение желточной эмульсии для выявления лецитовителлазной реакции (образование радужного венчика) (рис. 5).

Рис. 5. Рост S. аureus на питательной среде № 10-ГРМ (А); на питательной среде № 10-ГРМ с добавлением желтка (Б).
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

Одним из основных дифференциальных признаков стафилококков, имеющих медицинское значение, является способность к росту в анаэробных условиях на тиогликолевой среде. Эта среда может применяться и для исследования материала, мало контаминированного стафилококками.

В тиогликолевой среде при росте тест-штамма S. aureus наблюдают образование отдельных колоний (тяжей) через 24 ч инкубации с выраженной прозрачной зоной в верхней части столбика (рис. 6).

Рис. 6. Рост S. aureus Wood-46 в тиогликолевой среде (А); S. aureus Виотко в тиогликолевой среде (Б).
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций

Изучение стафилококков показало, что основной признак патогенности (коагулазная реакция) может подвергаться изменчивости при воздействии различных факторов, поэтому были проведены исследования по ГОСТ Р 54674–2011 некоторых объектов на наличие золотистого стафилококка.

Для этого в качестве образца изучали пищевой продукт.

Использовали метод с предварительным обогащением  с применением солевого бульона, обеспечивающего рост стафилококков и ингибицию микробов-ассоциантов.

В солевом бульоне стафилококки растут со стабильным равномерным помутнением среды (рис. 7).

Рис. 7. Рост стафилококка в cолевом бульонеРис. 8. Маннит-солевой агар (питательная среда № 10-ГРМ с яичной эмульсией) (А), cтафилококкагар (Б).
Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекцийЧерез 24 ч инкубации при температуре 37 ºС петлей проводили высев на поверхность агара Байрд — Паркера, маннит-солевого агара (питательная среда № 10-ГРМ с яичной эмульсией) и стафилококкагара.

В мазке, окрашенном по Граму, обнаружены тетрады грамположительных кокков. Проба с каталазой положительная. Эти признаки позволяют отнести культуру к роду стафилококка.

Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекцийПосевы на агаризированных средах просматривали через 24 и 48 ч инкубации при температуре 37 ºС. На рисунке 8 представлен высев после накопления в солевом бульоне на питательные среды для выявления стафилококка.

По предварительному анализу можно предположить, что в данном образце присутствует стафилококк, относящийся к группе коагулазоотрицательных, так как на среде № 10-ГРМ с желточной эмульсией отсутствует лецитиназный тест.

Для ускорения выдачи ответа белые колонии с желтоватым ореолом и розовые колонии с маннит-солевого агара пересевали на питательный агар для дальнейшей идентификации микроорганизма при помощи масс-спектрометра Bruker Daltonik MALDI Biotyper.

В процессе измерений по спектру константных белков микроорганизмов, в дальнейшем сравниваемому с базой данных, выделенные изоляты идентифицировали как Staphylococcus saprophyticus ssp saprophyticus DSM 20229T DSM и Staphylococcus saprophyticus ssp saprophyticus DSM 20038 DSM.

Таким образом, полный ассортимент питательных сред позволяет успешно решать задачи выявления стафилококковой инфекции для своевременного и эффективного назначения антибактериальной терапии, обнаружения бактерионосителей, установления факторов передачи инфекции.

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в
подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в
подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
×

×

×

×

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.