Сравнение набора реагентов “АллергоИФА-специфический IgE” и биотинилированных аллергенов компании “Алкор Био”с MAST-CLA Hitachi Chemical Diagnostics при определении специфических IgE у больных атопическими заболеваниями

1288
Сравнение набора реагентов “АллергоИФА-специфический IgE” и биотинилированных аллергенов компании “Алкор Био”с MAST-CLA Hitachi Chemical Diagnostics при определении специфических IgE у больных атопическими заболеваниями

По данным разных авторов, как в России, так и за рубежом до 40% населения в той или иной форме страдают аллергическими заболеваниями, такими как аллергический ринит, бронхиальная астма, атопический дерматит, крапивница, ангиоотек, которые в большой степени обусловлены иммунными механизмами с участием специфических к тому или иному аллергену иммуноглобулинов Е (sIgE). По результатам аллергообследования больных в клинике нашего института 50–80% (в зависимости от нозологии) обследованных являются атопиками.

Распространенность атопии диктует необходимость создания и совершенствования систем и средств определения уровня или, в последнее время, концентрации sIgE. Не вдаваясь в историю вопроса, можно заметить, что в настоящее время за рубежом наибольшее распространение получили диагностические системы ImmunoCAP (Phadia), Immulite (Siemens), MASTCLA (Hitachi). Эти системы, прошедшие мультицентровые испытания в сравнении с тестами in vivo, часто используются как референтные разработчиками новых методов анализа.

Созданный в 1976 г. MAST-CLA метод [1] прошел испытания в сравнении с кожными пробами, провокационными тестами и методами in vitro диагностики, включая ImmunoCAP [2, 3, 4]. В MAST-CLA тесте использован иммунохемилюминесцентный метод анализа. В качестве твердой фазы применяются целлюлозные нити, на которые ковалентно присоединен аллерген. Нити заключены в плоский проточный элемент, что упрощает и ускоряет промывку. На первой стадии анализа происходит сорбция сывороточных sIgE. После промывки и удаления несвязавшихся компонентов сыворотки иммобилизованные sIgE проявляются конъюгатом поликлональных анти-IgE антител с пероксидазой хрена. На завершающей стадии ферментативной реакции в качестве субстрата используется люминол. Интенсивность хемилюминесценции регистрируется фотоумножителем. Результаты анализа выражаются в классах от 0 до 4.

В 1990-е гг. в Европе появляются разработки нового метода для количественного определения sIgE, в которых используются твердая фаза с сорбированными специфичными к IgE антителами и биотинилированные аллергены. Так, компания Radim Diagnostics в 1993 г. предложила вариант анализа, отличавшийся улавливанием твердой фазой преформированных в растворе иммунных комплексов “sIgE-биотинилированный аллерген”, что сокращало время исследования [5]. Дальнейшее развитие этот метод, названный реверсивным аллергосорбентным тестом, получил в компании “Алкор Био” (г. Санкт-Петербург) и был реализован в наборе “АллергоИФА-специфиче- ский IgE” с биотинилированными аллергенами [6] (рис. 1). Исследование выполняется на полистироловых планшетах в стандартной технике иммуноферментного анализа и не требует специального оборудования. Анализ удобен для выполнения независимо от производительности клинической лаборатории. Достигается это использованием единого для всех аллергенов иммуносорбента – планшета, в лунках которого иммобилизованы антиIgE антитела. Создание иммуносорбента на основе антител, а не препарата аллергена обеспечивает анализу гибкость, возможность формирования произвольного перечня аллергенов по показаниям врача, а также снижает неспецифические реакции. Аллерген же несет на себе биотиновую метку и проявляетcя на твердой фазе в составе иммунных комплексов с sIgE конъюгатом специфичного к биотину белка с пероксидазой хрена. Окончание анализа фотометрическое. Результаты регистрируются на любом вертикальном планшетном фотометре.

В представленной работе была поставлена задача сравнения наборов “АллергоИФА-специфический IgE” и биотинилированных аллергенов (“Алкор Био”) с MASTCLA наборами “Российская панель IV” (Hitachi Chemical Diagnostics).

Для испытаний были взяты 6 отечественных биотинилированных аллергенов: береза бородавчатая (t3), полынь обыкновенная (w6), эпителий кошки (e1), домашняя пыль (h1), клещи Dermatophagoides pteronissinus (d1) и Dermatophagoides farina (d2). Каждый аллерген испытывали на 20 контрольных и 20 положительных (по данным MAST-CLA) больных, госпитализированных в клинику института с диагнозами бронхиальная астма, атопический дерматит, аллергический ринит. Средний возраст пациентов составил 28,23 ± 16,5 лет, из них 54% – мужчины, 46% – женщины.

Скарификационные тесты, за исключением единичных случаев, не проводились вследствие госпитализации больных в стадии обострения основного заболевания, невозможности отмены антигистаминных и кортикостероидных препаратов. Аллергию на тот или иной аллерген подтверждали совпадением результатов лабораторных тестов с анамнезом заболевания, а также результатами элиминационных мероприятий. Результаты обрабатывали с помощью программы StatSoft Statistica 8.0.

Сравнение набора реагентов “АллергоИФА-специфический IgE” и биотинилированных аллергенов компании “Алкор Био”с MAST-CLA Hitachi Chemical Diagnostics при определении специфических IgE у больных атопическими заболеваниями

Полученные данные (рис.) показывают, что больные, страдающие заболеваниями, вызванными или отягощенными атопией, проходящие лечение в условиях стационара, имеют ярко выраженную сенсибилизацию к причинным аллергенам, во всяком случае при оценке в классах MAST. При рассмотрении результатов следует помнить, что 4-й класс MAST не имеет верхней границы, – это обстоятельство могло сказаться на силе корреляции результатов. В целом полученные коэффициенты корреляции (таблица) следует принять хорошими для аллергенов t3, w6, e1, h1 и удовлетворительными при параметрической оценке для аллергенов d1 и d2.

Значения У-интерсепта близки к нулю для аллергена пыльцы березы (t3) и невелики для аллергенов пыльцы полыни (w6), домашней пыли (h1) и эпителия кошки (e1). Отрицательные интерсепты для клещевых аллергенов (d1, d2), очевидно, требуют уточнения в дальнейших исследованиях с накоплением данных в области первых классов MAST.

Сравнение набора реагентов “АллергоИФА-специфический IgE” и биотинилированных аллергенов компании “Алкор Био”с MAST-CLA Hitachi Chemical Diagnostics при определении специфических IgE у больных атопическими заболеваниями

Значения специфичности, полученные для набора “АллергоИФА-специфический IgE” и биотинилированных аллергенов производства “Алкор Био”, в среднем выше, чем в опубликованных сравнительных исследованиях других методов. Это уменьшает риск гипердиагностики. Клиническая же чувствительность для всех аллергенов, кроме домашней пыли, ниже, чем у MAST-панелей.

Основываясь на имеющемся опыте работы с биотинилированными аллергенами, следует добавить, что метод устойчив к таким факторам неспецифических реакций, как присутствие в сыворотке гемоглобина, повышенное содержание общего IgE, и не идентифицированным в настоящее время индивидуальным сывороточным факторам неспецифического связывания твердой фазой.

Проведенное исследование показало высокую специфичность и хорошую чувствительность реверсивного аллергосорбентного теста. Биотинилированные аллергены и наборы “АллергоИФА-специфический IgE” компании “Алкор Био” могут быть рекомендованы к использованию в практике клинико-диагностических лабораторий. В случае обследования на стадии дебюта аллергического заболевания, если требуется высокая чувствительность, предпочтительнее использовать MAST-CLA метод. Набор “АллергоИФА-специфический IgE” показал хорошую корреляцию с MAST-CLA дляаллергенов t3 (береза бородавчатая), w6 (полынь обыкновенная), e1 (эпителий кошки) и h1 (домашняя пыль).

Список использованной литературы
1. Соболев А.В., Аак О.В. Современная аллергодиагностика: опыт работы // Hi + Med. Высокие технологии в медицине. 2011. № 2. С. 8–10.
2. Nepper-Christensen S., Backer V., DuBuske L.M., Nolte H. In vitro diagnostic evaluation of patients with inhalant allergies: summary of probability outcomes comparing results of CLA- and CAP-specific immunoglobulin E test systems // Allergy Asthma Proc. 2003. Vol. 24, N 4. P. 253–258.
3. Miller S.P., Marinkovich V.A., Riege D.H. et al. Application of the MAST™Immunodiagnostic system to the determination of allergen-specific IgE //Clin. Chem. 1984. Vol. 30, N 9. P. 1467–1472.
4. Ruzzenente O., Lippi G., Dima F.A. et al. AP 1800HCD: towards automation of the CLA assay // Giorn. It. Allergol. Immunol. Clin. 2004. Vol. 14. P. 165–171.
5. Plebani M., Bernardi D., Basso D. et al. Measurement of specific immunoglobulin E: intermethod comparison and standardization // Clin. Chem. 1998. Vol. 44, N 9. P. 1974–1979.
6. Кочиш Л.Т. Диагностические наборы компании “Алкор Био” // Справочник заведующего КДЛ. 2011. № 4. С. 33–36.

На правах рекламы

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×