Серотипирование сальмонелл реагентами компании SIFIN (Германия)

4469
Серотипирование сальмонелл реагентами компании SIFIN (Германия)

Подвид сальмонелл Enterica весьма изменчив по соматическому (липополисахаридному, О) и жгутиковому (Н) антигенам. В настоящее время идентифицировано 2557 антигенных вариантов этой группы сальмонелл. Их выявляют в реакции агглютинации (РА) на предметном стекле по схеме Кауффмана-Уайта. РА проста в постановке, не требует специальной аппаратуры и дорогостоящих реагентов, позволяет получить результат в течение нескольких секунд. До начала 80-х годов сальмонелл типировали в РА с помощью гипериммунных сывороток, очищенных сорбцией гетерогенными антигенами сальмонелл. Такие реагенты не всегда достаточно специфичны вследствие нестандартности своего иммуноглобулинового состава и наличия сходных антигенов у сальмонелл и многих других бактерий. Кроме того, к ряду антигенов сальмонелл (в первую очередь жгутиковым) не удается получить специфические антисыворотки, что не позволяет типировать от 2 до 7% изолятов (по данным разных референс-центров) и диагностических ошибок.

В июле 2010 г. Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития России зарегистрировала набор реагентов для типирования сальмонелл, производимых Институтом иммунопрепаратов и питательных сред (SIFIN, Германия). Набор включает 4 группы реагентов (в т.ч. 72 моноклональных антитела, называемых энтероклонами):
- Омнивалентный энтероклон А-67;
- Поливалентные энтероклоны I — (A-E), II (F-67), Поли-Н для обеих фаз жгутикового антигена;
- Группоспецифические энтероклоны — В, D, E;
- Моноспецифические энтероклоны и гипериммунные сыворотки к 53 соматическим (О: 2-22, 25, 27, 28, 30, 34, 35, 38-48, 50-58) антигенам, антигену Vi и 44 жгутиковым антигенам (Н: 1, 2, 5, 6, 7, a-n, gm, p-z, z4, z23, z6, z10, z13, z15, z23, z24, z28, z29, z32, z35, z38, z41).

Тестирование омнивалентным энтероклоном Анти-Salmonella (A – 67), представляющим собой смесь 48 моноклональных антител, позволяет определить, относится ли изолят бактерии к роду Salmonella (положительная реакция). Такую проверку проводят при отсутствии возможности оценки его биохимической активности. Отрицательная реакция с этим реагентом свидетельствует о том, что изолят бактерии не относится к роду Salmonella или является S. Typhi, S. Dublin или S. Paratyphi C, у которых реактивность О-антигенов маскирует антиген Vi. Для инактивации последнего культуру кипятят на водяной бане в течение 30 мин и повторно проверяют энтероклоном Анти-Salmonella (A – 67). Повторное получение отрицательной реакции свидетельствует о том, что изолят не является сальмонеллой, а положительная реакция — о том, что он относится к одному из 3 упомянутых выше сероваров сальмонелл. В качестве альтернативы применяют моноспецифический энтероклон к данному антигену.

С помощью поливалентных энтероклонов Anti-Salmonella I (A – E) и Anti-Salmonella I (F-67) дифференцируют редко встречающуюся серогруппу F от остальных серогрупп сальмонелл. Поскольку 98% изолятов сальмонелл, выделяемых от людей, относятся к серогруппам А, В, С, D и Е, то в большинстве случаев можно обойтись без омнивалентного энтероклона, сразу же использовав для серотипирования изолятов поливалентный энтероклон Anti-Salmonella I.

Проверка группоспецифическими энтероклонами определяют к какой серогруппе относится изолят, на основании чего выбирают оптимальную схему определения их антигенной формулы. Реагенты применяют в следующей последовательности, соответствующей частоте распространения серогрупп сальмонелл: D, В, С, Е и А.

Тестирование моноспецифическими энтероклонами к антигенам О необходимо для составления антигенной формулы сальмонелл. Выбор необходимых для этого реагентов определяется результатами предыдущего этапа серотипирования на основании данных о возможных комбинациях антигенов у разных сероваров сальмонелл, приведенных в Таблице 1.
 Серотипирование сальмонелл реагентами компании SIFIN (Германия)

Серотипирование сальмонелл завершается анализом наличия у них жгутиковых (Н) антигенов обеих фаз. Типировать Н-антигены первой фазы можно у колоний, полученных с низкоселективной агаровой среды. Вторую фазу этих антигенов индуцируют методом ингибирования роения по Свену-Гарду в следующей модификации. В центр чашки Петри (диаметром 6 см) с 10 мл полужидкой (0,8-1%) агаровой среды наносят 0,1 мл энтероклона или поликлональных антител, соответствующих выделенной фазе антигена Н (перечень реагентов панели, которыми пользуются для этого приведены в Таблице 2). Энтероклоны Анти-Salmonella H E, H g, H L и H 1 пригодны для фазовой индукции всех возможных комбинаций антигенов Н. Энтероклон Anti-Salmonella H 1 способен ингибировать антигены H 1,2; 1,5; 1,6 и 1,7. Выбранный реагент распределяют стерильным шпателем по поверхности среды. В центр чашки Петри после подсыхания реагента сеют культуру тестируемого изолята. Посев инкубируют при 37 ºС в течение 16-20 ч. Если изолят распространился по поверхности среды, то проводят идентификацию реагентами второй фазы антигена Н. В противном случае считают, что изолят сальмонелл имеет только 1 фазу антигена Н.Заключение

Применяемая на протяжении 80 лет схема Кауффмана-Уайта остается самой надежной, дешевой, нетрудоемкой и дающей быстрый результат схемой типирования сальмонелл. Применение моноклональных антител вместо гипериммунных сорбированных сывороток повышает ее эффективность .

Серотипирование сальмонелл реагентами компании SIFIN (Германия)
 

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×