• Главная страница
  • » Статьи
  • » Заведующему КДЛ
  • » Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства

Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства

4492
Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства

С момента открытия B. Blumberg в 1964 г. [4] поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) определение этого вирусного белка в сыворотке крови является определяющим лабораторным критерием в диагностике гепатита В (ГВ) [2]. Еще в 1980-х гг. была отмечена корреляционная связь между титром HBsAg, обнаружением в сыворотке крови HBeAg – антигена вируса ГВ, ассоциирующегося с вирусной репродукцией, и выраженностью патологических изменений в ткани печени [1]. Поэтому уже в то время уделялось внимание определению титра HBsAg в клинической практике.

Инновацией в области определения маркеров ГВ явилась разработка в начале 2000-х гг. компанией Abbott Laboratories (США) стандартизованного хемилюминесцентного теста, позволяющего измерять количество поверхностного антигена ГВ в международных единицах [8]. Несколько позже подобный тест разработала и швейцарская компания Roche Diagnostics [14]. Исследования, проведенные в различных странах, показали широкое варьирование количественных характеристик HBsAg у пациентов с хронической ГВ-инфекцией в процессе естественного развития и достаточно сильную корреляцию между уровнями поверхностного антигена, обнаружением HBeAg и уровнем ДНК вируса ГВ в крови [7, 9, 10, 12, 15, 16].

Современная практика исследований маркеров ГВ показала, что предпочтительным маркером при мониторинге течения хронического ГВ и его терапии является количественное определение HBsAg. Установлено значительное снижение уровней поверхностного антигена при сероконверсии HBeAg в anti-HBe, что является одним из критериев успешности терапии [3, 5, 6, 13].

Таким образом, широкое использование количественного определения HBsAg у пациентов с ГВ является весьма полезным для прогноза естественного течения инфекции и оценки эффективности лечения. Стоит отметить, что наряду с зарубежными тестами для количественного определения HBsAg теперь на российском рынке есть новый продукт, который, несомненно, будет способствовать решению указанных задач, – набор реагентов “ГепатитИФА-HBsAg”, разработанный компанией “Алкор Био” (Санкт-Петербург). Особенность данной тест-системы состоит в возможности ее использования не только для качественного, но, что уникально, и для количественного определения HBsAg в сыворотке и плазме крови человека методом иммуноферментного анализа (ИФА).

На базе НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (Санкт-Петербург) были проведены клинические испытания новой тест-системы “ГепатитИФА-HBsAg” (Алкор Био), в рамках которых проводилась оценка чувствительности и специфичности набора.

В наборе “ГепатитИФА-HBsAg” реализован сэндвич-вариант твердофазного ИФА. Для этого использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к HBsAg. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-HBsAg-пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация HBsAg, содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении содержимого из лунок и промывке удаляется избыток конъюгата анти-HBsAg-пероксидаза, не связавшегося с иммобилизованным в ходе инкубации HBsAg. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству HBsAg в исследуемом образце.

Во время инкубации с раствором тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация HBsAg в исследуемых образцах.

Коммерческая тест-система для количественного определения HBsAg методом хемилюминисцентного анализа (ХЛА) ARCHITECT HBsAg производства Abbott Laboratories (США) использовалась в качестве референтной. Исследование сывороток проводили согласно инструкциям фирм-изготовителей по применению наборов ARCHITECT HBsAg и “ГепатитИФА-HBsAg” (Алкор Био). Измерение концентрации HBsAg в пробах осуществлялось параллельно на двух тест-системах.

Оценка результатов количественного определения HBsAg проводилась на панели сывороток, состоящей из 80 положительных (содержащих HBsAg) и 80 отрицательных (не содержащих HBsAg) образцов. Все сыворотки этой панели были отобраны из числа предварительно исследованных на содержание HBsAg в ИФА с использованием тест-систем HBsAg-ИФА-Бест (Вектор Бест, Новосибирская область) и ImmunoComb II HBsAg 90 (Orgenics, Израиль) при обследовании пациентов с различными формами ГВ. До настоящего тестирования образцы хранились в условиях глубокого холода при -85 °С и размораживались непосредственно перед исследованием.

Регистрация результатов ИФА проводилось на спектрофотометре вертикального сканирования BioRad 680 (BioRad, США), а ХЛА – на хемилюминисцентном автоматическом анализаторе ARCHITECT I-1000SR (Abbott Laboratories, США). При анализе полученных данных оценивалось соответствие результатов, полученных с помощью наборов “ГепатитИФА-HBsAg” (Алкор Био) и ARCHITECT HBsAg.

В результате проведенных исследований, все 80 HBsAg-позитивных образцов исследуемой панели оказались позитивными в ХЛА (ARCHITECT HBsAg). Из 80 тестированных положительных образцов, в которых обнаружение HBsAg подтверждено в ХЛА референтной тест-системой, сравниваемая тест-система “ГепатитИФА-HBsAg” производства компании “Алкор Био” обнаружила HBsAg во всех 80 образцах. Из 80 тестированных HBsAg-отрицательных образцов, в которых также не обнаружен HBsAg с помощью референтного набора ARCHITECT HBsAg, испытуемая тест-система “ГепатитИФА-HBsAg” не обнаружила HBsAg ни в одном образце.

Таким образом, в настоящем исследовании установлено:
~~ число “истинно положительных” результатов – 80;
~~ число “ложноотрицательных” результатов – 0;
~~ число “истинно отрицательных” результатов – 80;
~~ число “ложноположительных” результатов – 0.

Чувствительность тест-системы, рассчитанная по формуле (1), составила 100%.

Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства

Специфичность тест-системы также составила 100% и рассчитывалась по формуле (2):

Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства

При сравнении данных о количественном уровне HBsAg в исследуемых образцах отмечена сопоставимость показателей, полученных в обеих тест-системах, при коэффициенте корреляции r = 0,99. В качестве примера в таблице суммированы результаты измерения количества HBsAg в низкотитражных образцах испытуемой панели.

Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что разработанная тест-система “ГепатитИФА-HBsAg” для качественного и количественного определения HBsAg обладает высокой чувствительностью и специфичностью; показатели количественного содержания HBsAg в исследованных образцах совпали при тестировании в испытуемой и референтной тест-системах и продемонстрировали высокую корреляцию данных (r = 0,99).

Таким образом, тест-система “ГепатитИФА-HBsAg” производства компании “Алкор Био” может широко применяться в клинической практике – как для проведения скрининговых исследований, так и для мониторинга лечения и глубокого изучения естественного течения гепатита В.Список использованной литературы
1. Мукомолов С.Л. Эпидемиологическая и клинико-лабораторная характеристика хронических носителей HBsAg в зависимости от выраженности патологического процесса: автореф. дис. … канд. мед. наук. Л., 1984. 24 с.
2. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика). М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2003. 384 с.
3. Andersson K.L., Chung R.T. Monitoring during and after antiviral therapy for hepatitis B // Hepatology. 2009. Vol. 49. P. 166–173.
4. Blumberg B.S., Alter H.J., Visnich S.A. A “New” antigen in leukemia sera // JAMA. 1984. Vol. 252, № 2. P. 352–257.
5. Brunetto M.R., Moriconi F., Bonino F. et al. Hepatitis B virus surface antigen levels: a guide to sustained response to peginterferon alfa-2a in HBeAg-negative chronic hepatitis B // Hepatology. 2009. Vol. 49, № 4. P. 1141–1150.
6. Chan H.L., Wong V.W., Tse A.M. et al. Serum hepatitis B surface antigen quantification can reflect hepatitis B virus in the liver and predict treatment response // Clin. Gastroenterol. Hepatol. 2007. Vol. 5, № 12. P. 1462–1468.
7. Chan H.L., Wong V.W., Wong G.L. et al. A longitudinal study on the natural history of serum hepatitis B surface antigen changes in chronic hepatitis B // Hepatology. 2010. Vol. 52, № 4. P. 1232–1241.
8. Deguchi M., Yamashita N., Kagita M. et al. Quantitation of hepatitis B surface antigen by an automated chemiluminiscent microparticle immunoassay // J. Virol. Methods. 2004. Vol. 115. P. 217–222.
9. Jaroszewicz J., Calle Serrano B., Wursthorn K. et al. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels in the natural history of hepatitis B virus (HBV) – infection: a European perspective // J. Hepatol. 2010. Vol. 52, № 4. P. 514–522.
10. Kim Y.J., Cho H.C., Choi M.S. et al. The change of the quantitative HbsAg level during the natural course of chronic hepatitis B // Liver Int. 2011. Vol. 31, № 6. P. 819–825.
11. Lee J.M., Ahn S.H. Quantification of HBsAg: Basic virology for clinical practice // World J. Gastroenterol. 2011. Vol. 17, № 3. P. 283–289.
12. Lee J.H., Kim S.J., Ahn S.H. et al. Correlation between quantitative serum HBsAg and HBV DNA test in Korean patients who showed high level of HBsAg // J. Clin. Pathol. 2010. Vol. 63, № 11. P. 1027–1031.
13. Lee M.H., Lee da M., Kim S.S. et al. Correlation of serum hepatitis B surface antigen level with response to entecavir in naive patients with chronic hepatitis B // J. Med. Virol. 2011. Vol. 83, № 7. P. 1178–1186.
14. Muhlbacher A., Weber B., Burgisser P. et al. Multicenter study of a new fully automated HBsAg screening assay with enhanced sensitivity for the detection of HBV mutants // Med. Microbiol. Immunol. 2008. Vol. 197. P. 55–64.
15. Nguyen T., Thompson A.J., Bowden S. et al. Hepatitis B surface antigen levels during the natural history of chronic hepatitis B: a perspective on Asia // J. Hepatol. 2010. Vol. 52, № 4. P. 508–513.
16. Su T.H., Hsu C.S., Chen C.L. et al. Serum hepatitis B surface antigen concentration correlates with HBV DNA level in patients with chronic hepatitis B // Antivir. Ther. 2010. Vol. 15, № 8. P. 1133–1139.

На правах рекламы



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль