text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Диагностика инфекционных заболеваний урогенитального тракта методом ПЦР в режиме реального времени.

  • 25 сентября 2012
  • 4851
Диагностика инфекционных заболеваний урогенитального тракта методом  ПЦР в режиме реального времени.

В настоящее время инфекционно-воспалительные заболевания урогенитального тракта у женщин занимают в структуре акушерско-гинекологической заболеваемости первое место в мире. Их частота в различных популяциях колеблется от 30 до 80%.

Заболевания, вызванные условно-патогенной микрофлорой, могут протекать как с клинически выраженной симптоматикой, так и бессимптомно. Бессимптомное течение заболевания в ряде случаев приводит к развитию серьезных осложнений. Установлено, что урогенитальные заболевания, вызванные условно-патогенными микроорганизмами, являются причиной увеличения риска заболевания инфекциями, передающимися половым путем (сифилис, трихомониаз, гонорея, хламидиоз), и ВИЧ.

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

Несвоевременная диагностика инфекционных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой, может стать причиной:

– нарушения репродуктивной функции;

– спонтанных абортов, преждевременных родов;

– внутриутробного инфицирования и задержки внутриутробного развития плода;

– осложнений после хирургических вмешательств на органах малого таза и постнатальных осложнений матери и ребенка.

Учитывая важность и актуальность решения проблемы объективной лабораторной диагностики урогенитальных инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой, для репродуктивного здоровья женщин, возникла потребность в разработке и внедрении в практическое здравоохранение новых диагностических подходов, позволяющих своевременно (до развития осложнений) диагностировать такие заболевания. Также необходимо определение объема медикаментозной терапии и осуществление контроля эффективности лечения.

Результаты клинической диагностики дают возможность только лишь предположить наличие заболевания, т. к. инфекции, передающиеся половым путем (трихомониаз, гонорея, сифилис и хламидиоз) и вызванные условно-патогенной микрофлорой, в подавляющем большинстве случаев не имеют специфических клинических симптомов. Наиболее частым заболеванием, ассоциированным с нарушением микрофлоры урогенитального тракта, является бактериальный вагиноз (БВ). БВ встречается у 24% женщин в структуре общей гинекологической заболеваемости и у 87,7% больных, обращающихся по поводу обильных длительных выделений.

Под БВ понимают полимикробный клинический синдром, характеризующийся специфическими аномалиями вагинальных выделений и нарушением вагинальной микрофлоры, при котором нормальная флора замещается факультативными и строго анаэробными микроорганизмами. При этом наблюдается пролиферация условно-патогенной флоры.

Для упрощения диагностики БВ и повышения ее достоверности разработано несколько критериев.

Критерии Амсела – наиболее быстрый и распространенный способ диагностики БВ (R. Amsel at al., 1983). Наличие трех из четырех признаков: рН отделяемого влагалища более 4,5; белые гомогенные выделения, покрывающие слизистую влагалища; положительный аминный тест с КОН и наличие ”ключевых клеток“. Существующие бессимптомные формы БВ (50% случаев), а также недостаточно высокая чувствительность критериев Амсела привели к поиску более чувствительных методов.

Широкое распространение получила балловая диагностическая система Ньюджента (Nugent criteria) (Nugent RP, Krohn MA, Hillier SL, 1991). Эта система основана на подсчете бактерий в мазке, окрашенном по Граму, определенной морфологии и характере окрашивания, соответствующих лактобактериям, гарднереллам, бактероидам и мобилункусу. При наборе от 7 до 10 баллов ставится диагноз “бактериальный вагиноз”. Система Ньюджента применяется на Западе наравне с критериями Амсела, тем не менее в одном многоцентровом исследовании было показано, что в 11–30% случаев диагнозы, поставленные с помощью этих методов, не совпадают. Это может быть связано с тем, что при микроскопии можно выявить только те микроорганизмы, которые обладают размерами, достаточными для визуализации. Многие виды и роды условно-патогенных микроорганизмов морфологически похожи, тогда как их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут значительно отличаться. Некоторые бактерии, например Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis и т. д., о которых известно, что они ассоциированы с развитием БВ, не визуализируются при микроскопии.

Недостатком микроскопического исследования мазков, окрашенных по Граму, является качественная оценка, ограниченная определением морфологии без возможности видовой характеристики микроорганизмов и приблизительная количественная оценка состава микроорганизмов. Микроскопия не позволяет идентифицировать ряд этиологически значимых для развития патологических процессов условно-патогенных возбудителей. Имеют место субъективизм и зависимость результата исследования от профессиональной квалификации специалиста лаборатории.

Более информативным является способ диагностики урогенитальных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой, путем микробиологического (культурального) исследования (Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985 № 535 “Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений)”. Этот способ позволяет установить видовой состав аэробных, факультативно-анаэробных и некоторых облигатно-анаэробных бактерий и тем самым подтвердить вид микроорганизмов, обнаруженных при микроскопии мазков, окрашенных по Граму.

Количественная оценка роста микроорганизмов на питательных средах характеризует их значимость у конкретного пациента. Так, например, установлены критерии нормальной микрофлоры урогенитального тракта у женщин при использовании культуральной диагностики:

– общая микробная обсемененность не превышает 106–108 КОЕ/мл;

– абсолютно преобладают лактобациллы;

– условно-патогенные микроорганизмы определяются в низком титре (104 КОЕ/мл) или отсутствуют.

До настоящего времени культуральный метод остается ”золотым стандартом“ этиологической лабораторной диагностики любого инфекционного процесса, в т. ч. вызванного условно-патогенной микрофлорой.

Однако и культуральный способ диагностики не лишен ряда серьезных недостатков. Условно-патогенная микрофлора, являющаяся наиболее частой причиной урогенитальных заболеваний у женщин, представлена, главным образом, анаэробными микроорганизмами. Для обеспечения анаэробных условий культивирования таких микроорганизмов требуется микробиологическая лаборатория с соответствующим оснащением и персоналом. Подавляющее большинство лечебных учреждений практического здравоохранения в настоящее время не имеют подобных условий.

Кроме того, в последние годы молекулярно-биологическими методами был обнаружен целый ряд новых условно-патогенных микроорганизмов (Atopobium vaginae, Mycoplasma genitalium и др.), которые либо не поддаются культивированию, либо являются трудно культивируемыми стандартной техникой (Ferris MJ, Masztal A, Aldridge KE. et al., 2004).

Существенными недостатками культурального метода также являются длительные сроки (в среднем 5 дней) и необходимость сохранения высокой жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию, что накладывает дополнительные ограничения на его хранение и транспортировку. В случае использования сухого тампона для взятия биоматериала, срок транспортировки образца в лабораторию ограничен часами. При использовании транспортных сред продолжается размножение микроорганизмов до поступления в лабораторию и возможно изменение их количественного соотношения. Культуральный метод не дает точной количественной оценки и используется только для ориентировочной оценки соотношения микроорганизмов между собой (Приказ МЗ СССР № 535 от 22.04.1985).

Объективные и субъективные ограничения методов лабораторной диагностики, применяемые сегодня в мировой медицинской практике, приводят к большому количеству диагностических ошибок: при манифестированном БВ – более чем в 60%, при кандидозном вульвовагините – до 77%; при микст-инфекции – до 87% (Schwiertz A. et al. 2006). Все это побуждает к поиску новых подходов к оценке микрофлоры урогенитального тракта.

Достижения молекулярной биологии, связанные с разработкой метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), предоставили новые возможности в изучении микробного состава у человека. В последние годы ПЦР широко используется для качественной идентификации инфекций, передающихся половым путем, таких как трихомониаз, гонорея, ВИЧ-инфекция и т. д. Также этот метод применяют и для идентификации условно-патогенной микрофлоры урогенитального тракта – Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealiticum, Ureaplasma parvum и тд.

В норме микрофлора урогенитального тракта характеризуется большим количеством разнообразных микроорганизмов. К патогенным микроорганизмам, при выявлении которых обязательно назначается этиотропная терапия, относят: Treponema pallidum, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus ducrei, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis. Существует большая группа условно патогенных микроорганизмов, которые могут вызывать заболевание при определенных условиях – это микоплазмы (Mycoplasma hominis, Mycoplasma fermentans), уреаплазмы (Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum), энтерококки, энтеробактерии, стафилококки, стрептококки, гарднереллы (Gardnerella vaginalis), дрожжеподобные грибы (Candida spp.).

Патологические процессы характеризуются нарушением количественных соотношений нормо- и условно-патогенной микрофлоры при большом видовом разнообразии последней, поэтому количественное определение микроорганизмов имеет высокое значение.

Компания ”НПО ДНК-Технология“ предлагает новый подход к исследованию условно-патогенной флоры, основанный на комплексной оценке основных групп микроорганизмов, формирующих урогенитальную микрофлору, методом ПЦР в режиме реального времени. Предлагаемый подход дает возможность определить количество и соотношение условно-патогенной и нормальной флоры, что позволяет в случае необходимости выбрать правильную терапию и контролировать эффективность ее проведения.

Для этого разработаны и предлагаются клинико-диагностическим лабораториям наборы реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта у женщин методом ПЦР в режиме реального времени Фемофлор 16, Фемофлор 8 и Фемофлор 4 (см. таблицу).  

Состав комплектов реагентов Фемофлор

Диагностика инфекционных заболеваний урогенитального тракта методом  ПЦР в режиме реального времени.  

Из одной биопробы методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени выполняется количественная оценка общей бактериальной массы, урогенитальной микрофлоры (лактобациллы) и комплекса аэробных и анаэробных микроорганизмов, микоплазм, грибов рода Candida, участвующих в развитии патологических процессов:

– сравнение количества лактобацилл с общей бактериальной массой позволяет исследовать состояние нормальной микрофлоры;

– сравнение количества представителей условно-патогенной микрофлоры с количеством лактобацилл позволяет предположить значение тех или иных микроорганизмов в развитии дисбактериоза и степень его выраженности;

– количественное определение ДНК эпителиальных клеток человека, попадающих в биопробу при правильном взятии материала, обеспечивает контроль качества преаналитического этапа, исключает получение ложноотрицательных результатов исследования;

– использование предлагаемого способа диагностики дает возможность выбора этиологического лечения;

– впервые можно оценить эффективности лечения;

– программное обеспечение, разработанное для амплификатора ДТ-96, позволяет настроить параметры анализа результатов согласно критериям, принятым в каждой конкретной лаборатории.

Для получения корректных результатов большое значение имеет качество взятия образца биоматериала для исследования, его хранение, транспортировка и предварительная обработка. Для этого в системе предусмотрена возможность анализа контроля взятия материала.

Диагностика инфекционных заболеваний урогенитального тракта методом  ПЦР в режиме реального времени.   

Определение структуры дисбаланса необходимо для решения вопросов, связанных с терапией.

Предлагаемый подход к исследованию состояния урогенитальной микрофлоры у женщин показан для:

– оценки качественного и количественного состава микроорганизмов урогенитального тракта;

– определения этиологической причины инфекционного процесса, что делает возможным осуществление направленной терапии;

– определения степени выраженности нарушений, в результате чего возможен индивидуальный подбор терапии;

– осуществления мониторинга эффективности проводимой терапии и оценки результатов лечения;

– восстановления нормальной микрофлоры;

– контроля проведения гормонозаместительной терапии при менопаузе.

Таким образом, впервые предложено объективное исследование, позволяющее наиболее полно и точно охарактеризовать качественный и количественный состав микрофлоры урогенитального тракта у женщин. В рамках данного исследования возможно выявление 23 групп микроорганизмов (факультативных и облигатных анаэробов, микроаэрофилов, микоплазм и грибов). Для проведения этого анализа разработано русскоязычное программное обеспечение для детектирующего амплификатора ДТ-96, позволяющее автоматически анализировать полученные данные и выдавать заключение в удобном для интерпретации виде. Данный метод пригоден как для повседневной лабораторной диагностики, так и в качестве чувствительного и высокоспецифичного инструмента для научных исследований.

В дополнение к настоящему методу, который позволяет определить этиологическую причину инфекционного процесса, вызванного условно-патогенной микрофлорой, рекомендуется:

– использование метода световой микроскопии для лабораторного подтверждения местной воспалительной реакции;

– качественное ПЦР исследование возбудителей урогенитальных инфекций, передаваемых половым путем, - Chlamidia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis и др.

Список использованной литературы

1. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Опыт микробиологической диагностики оппортунистических инфекций влагалища // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерпия. 2001. т. 3. № 2. С. 190–194.

2. Савичева А.М. Лабораторная диагностика и терапия репродуктивно значимых инфекций // Лечащий врач. 2008. № 3. 

3. Brotman RM, Erbelding EJ, Jamshidi RM et al. Findings associated with recurrence of bacterial vaginosis among adolescents attending sexually transmitted diseases clinics // J. Pediatr Adolesc Gynecol. 2007 Aug. 20(4). Р. 225–31.

4. Ferris MJ, Masztal A, Aldridge KE. et al. Association of Atopobium vaginae, a recently described metronidazole resistant anaerobe, with bacterial vaginosis // BMC Infect Dis. 2004. Feb. 13. Р. 4–5.

5. Nugent RP, Krohn MA, Hillier SL. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation // J. Clin Microbiol. 1991. Feb. 29(2). Р. 297–301.

6. Spiegel CA, Amsel R, Holmes KK. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct gram stain of vaginal fluid // J Clin Microbiol. 1983. № 18. Р. 170–7.

7. Zhou X, Bent SJ, Schneider MG et al. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent methods // Microbiology. 2004. Aug. 150(Pt 8). Р. 2565–73. 

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.