Организация работы молекулярно-генетической лаборатории в крупных клинических и диагностических центрах

2510

Сегодня молекулярно-генетические методы используются для диагностики раз­личных заболеваний и выявления их причин. Уже стало рутинным тестирова­ние крови для выявления ДНК/РНК различных вирусов, исследование генома пациента для поиска маркеров наследственных и онкологических заболеваний, а также аллельных вариантов различных генов. Как правило, большинство та­ких исследований выполняются в разных лабораториях клиники, а зачастую даже в различных диагностических центрах. Для сбора необходимого материа­ла пациенты подвергаются многократной процедуре взятия крови из вены, биопсиям или пункциям. Получение и обработка результатов также представ­ляют собой длительный процесс.

Задача молекулярно-генетических исследований в том, чтобы в крови или другом биологическом материале пациента выявить и охарактеризовать после­довательности ДНК - чужеродные (вирусные, бактериальные или грибковые) или собственную ДНК пациента. Метод, позволяющий выполнять все эти ис­следования, - полимеразная цепная реакция. Для ее проведения требуется не­сколько десятков нанограммов ДНК/РНК. Обычно для исследований берется от одного до десяти миллилитров крови, при этом выделяются десятки тысяч нанограммов ДНК. Следовательно, количества любой ДНК - геномной, вирусной или бактериальной, выделенной из этого объема крови, хватит на десятки или даже сотни молекулярно-генетических определений. Таким образом, большин­ство исследований можно проводить на материале, полученном в результате одного взятия крови, пункции или биопсии. Если архивировать образцы ДНК больных, то с ними можно проводить исследования, необходимость в которых возникла в процессе лечения, не делая новых заборов крови. Таким образом, минимизируется травмирование пациента, количество реактивов для выделе­ния генетического материала и соответствующие трудозатраты, а значит, стоимость анализа, время исследования и вместе с тем возрастает его информатив­ность.

Кроме того, наличие архивных материалов позволяет сравнивать препара­ты в динамике заболевания и оценивать эффективность лечения. По-видимому, такой архив или банк должен стать обязательной частью современной молекулярно-генетической лаборатории крупного центра или клиники.

Для клинических центров наличие банка генетического материала больных может иметь большое значение, поскольку по мере обследования и лечения па­циентов может возникнуть необходимость выполнения последующих молекулярно-генетических исследований, которые можно провести на матери­але, хранящемся в банке. Кроме того, компоненты крови, взятые в начале ис­следования и замороженные (например, в случае выявления вируса), позволяют оценить эффективность применения противовирусных препаратов по измене­нию концентрации вируса. То же можно сказать и об эффективности лечения онкологических заболеваний и гемобластозов, которую можно контролировать, отслеживая поведение опухолевых клонов.

Как уже было сказано выше, разные молекулярно-генетические исследова­ния часто бывают разнесены по различным лабораториям. Наличие вирусов в крови выявляют в бактериологической лаборатории, аллельные варианты анти­генов (HLA, HPA) - в иммунологической, полиморфизмы - в соответствующих профильных лабораториях, изучающих заболевание, вызванное данным поли­морфизмом, и т. д. Материалом для всех этих исследований может служить кровь одного и того же больного, причем каждая из этих лабораторий будет вы­делять из нее ДНК или РНК. Основной применяемый метод во всех случаях -полимеразная цепная реакция, т. е. приборная база для выполнения исследова­ний требуется одна и та же. Разница только в наборах реактивов, выявляющих определенную последовательность ДНК. Поэтому, на наш взгляд, нецелесо­образно дублировать приборы, реактивы, трудовые ресурсы и тратить время для параллельной работы в различных подразделениях. Правильнее было бы сосредоточить хорошо оснащенную приборную базу для молекулярно-генетических исследований в рамках одной соответствующей лаборатории, которая смогла бы легко расширять арсенал своих исследований.

В настоящий момент в ГНЦ РАМН разрабатывается такой комплексный подход к молекулярно-генетическим исследованиям пациентов, находящихся на лечении в клинике Центра.

Алгоритм проведения молекулярно-генетических исследований в нашей лаборатории следующий:

1. Кровь пациентов поступает обычно в вакуумных пробирках (вакутейнерах) объемом 4-10 мл. Для предотвращения свертывания при взятии крови ис­пользуются вакутейнеры, содержащие ЭДТА. Биоптаты и пунктаты поступают также в пробирках, содержащих раствор ЭДТА.

2. Пробирки с кровью подвергают мягкому центрифугированию для раз­деления крови на две фазы - плазму и клетки.

3. Плазму отделяют и помещают в специальные контейнеры для дальней­шего хранения и замораживают.

4. По мере необходимости плазму размораживают (наш опыт показывает, что замороженная плазма выдерживает до 10 размораживаний-замораживаний без изменения количества определяемых в ней вирусов). Из аликвоты плазмы выделяют пул ДНК/РНК для выявления чужеродных геномов, присутствующих в крови пациента (вирусов, бактерий, грибов), который тоже хранят в заморо­женном виде для дальнейших исследований.

5. После отбора плазмы из оставшегося материала выделяют клетки, осаж­дают их и замораживают осадок клеток для последующих исследований.

6. Аликвоты осадка клеток используют для выделения ДНК или РНК. Неис­пользованный остаток выделенной ДНК/РНК замораживают и хранят для дальнейших исследований.

Таким образом, кровь больного, поступившая в лабораторию, обрабатыва­ется и хранится в банке в виде трех образцов - плазмы, клеток и выделенных ДНК/РНК. Сегодня каждый образец архивной крови можно проанализировать одновременно на наличие шести вирусов: HIV-1, HBV, HCV, EBV, СМУи PV B19, определить их концентрацию в крови, выявить генотипы вирусов HBV и HCV, провести генетическое типирование факторов предрасположенности к раз­личным заболеваниям (тромбофилии, гемохроматозу, болезням Вильсона - Ко­новалова и Гоше, инфекционным заболеваниям и т. д.), изучить клональные перестройки при лимфопролиферативных заболеваниях, выявить и дать коли­чественную характеристику соматическим мутациям при миелопролиферативных заболеваниях, причем все эти исследования можно сделать в течение одно­го рабочего дня.

Таким образом, наш опыт показывает, что для эффективной работы молекулярно-генетической лаборатории необходимо создание архива или бан­ка генетического материала пациентов, проходящих лечение в клинике. Нали­чие в крупных клиниках молекулярно-генетической лаборатории, имеющей в своем составе банк ДНК больных и подразделение, осуществляющее широкий спектр анализов материала, хранящегося в банке, позволит проводить основ­ную массу молекулярно-генетических исследований на выделенном один раз препарате ДНК/РНК в течение всего времени пребывания пациента в клинике. Следовательно, как уже говорилось, отпадает необходимость лишний раз под­вергать больных не слишком приятным процедурам, высвобождаются время, материалы и реактивы, необходимые для забора, обработки крови и выделения ДНК. Кроме того, такой банк может иметь громадное значение для медицин­ских центров в случае проведения ими новых научных изысканий - не надо тра­тить годы на подбор больных, подходящих для исследований, и наблюдение за ними в динамике, поскольку можно работать с уже имеющимся в архиве банка материалом и сопоставлять результаты с историей болезни пациента.

И.С. Февралева,ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной гематологии;А.Б. Судариков,руководитель лаборатории молекулярной гематологии Гематологический научный центр РАМН, Москва



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль