Современные подходы к диагностике инфекций, передаваемых половым путем

3517
Современные подходы к диагностике инфекций, передаваемых половым путем

Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП), составляют значительную долю в структуре общей инфекционной патологии человека. Точная диагностика этих инфекций чрезвычайно важна для обеспечения здоровья будущих поколений.

Традиционные методы лабораторной диагностики имеют свои ограничения. Изменения антигенной структуры возбудителей, переход микроорганизмов в некультивируемое состояние и изменение их тропности могут приводить к недостоверности результатов традиционных лабораторных тестов. Поэтому особое значение сейчас приобретает внедрение в практическое здравоохранение новых молекулярно-биологических методов исследования, таких как метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который сейчас все более широко применяется на практике [2].

Традиционные методы диагностики инфекций, передаваемых половым путем

Традиционным методом диагностики ИППП является микроскопия. Это прямой метод диагностики, основанный на исследовании нативных или окрашенных препаратов в микроскопе. Достоинствами метода являются быстрота его исполнения, а также невысокая стоимость исследования. К микроскопическим методам диагностики некоторых ИППП относится также люминесцентный метод исследования прямая и непрямая иммунофлуоресценция. Недостатком метода является субъективизм оценки его результата, который зависит от уровня профессиональной подготовки врача-исследователя, выполнения протокола анализа, и, в значительной степени, от техники взятия клинического материала [3]. Микроскопический метод имеет самую низкую чувствительность (30%) относительно других методов лабораторной диагностики трихомониаза и N. gonorhoeae [1].

Серологические исследования являются непрямыми тестами, в ходе которых выявляют специфические антитела. Вместе с тем следует учитывать низкую иммуногенность возбудителей ИППП, возможность присутствия антител после ранее перенесенной инфекции, а также индивидуальные особенности иммунной системы пациента [3].

Культуральные методы диагностики бактериальных инфекций основаны на выделении возбудителя в культуре клеток. Эти методы часто называют “золотым стандартом”. Их используют для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, а также для выявления жизнеспособных микроорганизмов. Недостатками данных методов являются высокая стоимость, трудоемкость, длительность проведения анализа, высокие требования к квалификации персонала и организации помещений, а также наличие у некоторых микроорганизмов труднокультивируемых или некультивируемых форм [1, 3].

Роль молекулярно-биологических методов

Сегодня в широкую практику лабораторной диагностики внедряются молекулярно-биологические методы, основанные на выявлении генетического материала возбудителя инфекции. ПЦР позволяет непосредственно выявлять уникальный фрагмент нуклеиновой кислоты возбудителя инфекционного заболевания и обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Присущая ПЦР высокая специфичность анализа обусловлена использованием для ее проведения уникального фрагмента генома возбудителя инфекционного заболевания, не встречающегося у других организмов.

В настоящее время ПЦР-технология занимает первое место в клинической лабораторной диагностике, например трихомониаза, наравне с культуральным методом. Данные по сравнительным исследованиям биопроб методами микроскопии, культурального посева и ПЦР на наличие T. vaginalis показали, что метод имеет чувствительность 97% в сравнении с 70% культурального и 36% микроскопического методов [1].

Принцип ПЦР основан на многократном увеличении (амплификации) числа копий целевого специфического фрагмента ДНК (мишени) ферментом ДНК-полимеразой. Для синтеза новых комплементарных цепей ДНК-полимераза использует синтетические одноцепочечные олигонуклеотиды (праймеры), ограничивающие амплифицируемый фрагмент с двух сторон.

Олигонуклеотидный зонд гибридизуется с участком мишени между праймерами. Зонд несет флуорофор (F) и гаситель (Q). В ходе синтеза полимераза расщепляет зонд, в результате чего возникает флуоресценция.

ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени

В начале 1990-х гг. был создан новый метод детекции ампликонов в режиме реального времени. Преимуществом данного подхода является возможность осуществления детекции накопления ампликонов без открывания пробирки, что минимизирует риск получения ложноположительных результатов из-за контаминации проб и реагентов продуктами амплификации. Существенное уменьшение количества манипуляций с исследуемым образцом сокращает затраты времени, упрощает анализ и позволяет снизить вероятность ошибок. Применение, наряду с праймерами, гибридизационных зондов обеспечивает повышение специфичности анализа. Независимая одновременная регистрация флуоресцентного сигнала от нескольких ДНК-зондов делает возможным мултиплексирование, т. е. выявление в одном исследовании нескольких ДНК-мишеней разных возбудителей. Главная особенность ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени, позволившая этой методике занять особое место среди методов лабораторной диагностики, – возможность определения исходного количества копий специфической ДНК-мишени в клинической пробе.

Таким образом, основными преимуществами ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени, по сравнению с другими методами диагностики ИППП, являются:

~ возможность быстрого получения результатов;

~ одновременное выявление в биопробе нескольких возбудителей;

~ высокая чувствительность;

~ высокая специфичность;

~ возможность диагностики латентного, асимптомного течения заболевания;

~ выявление ДНК конкретного возбудителя на фоне микст-инфекций;

~ возможность проведения скрининговых исследований.

Наборы серии “РеалБест” – современный подход

к диагностике инфекций, передаваемых половым путем

Наборы реагентов серии “РеалБест” производства ЗАО “Вектор-Бест” предназначены для диагностики инфекционных заболеваний методом ПЦР в режиме реального времени.

Одним из основных достоинств диагностических наборов серии “РеалБест” является использование готовой для применения, лиофильно высушенной реакционной смеси. Готовая реакционная смесь содержит все необходимые для проведения анализа компоненты, включая ферменты, праймеры и флуорогенные зонды; для постановки реакции необходимо только добавить пробу выделенной нуклеиновой кислоты. Таким образом, упрощается процедура и увеличивается скорость исполнения анализа, снижается риск контаминации. Кроме того, за счет минимизации влияния “человеческого фактора” достигается высокая воспроизводимость и стабильность качества исследований. Стабильно высокая эффективность амплификации (100 ± 10% в течение всего срока годности) возможна благодаря стабильности лиофильно высушенных компонентов реакционной смеси.

К отличительным особенностям наборов серии “РеалБест” следует отнести также высокие аналитические характеристики и применение единого двухстадийного протокола для амплификации ДНК/РНК всех возбудителей ИППП, TORCH- и герпесвирусных инфекций. Такой оптимизированный протокол позволяет увеличить производительность лаборатории и скорость выдачи результатов анализа, уменьшает износ амплификатора.

ЗАО “Вектор-Бест” стремится к постоянному расширению линейки наборов для диагностики инфекций, ориентируясь не только на актуальность выявления инфекционных агентов среди населения, но и на разнообразие оборудования, доступного для детекции с помощью ПЦР в режиме реального времени. Наборы серии “РеалБест” адаптированы к приборам: MiniOpticon, iQ iCycler, iQ5 iCycler, CFX96 (BioRad, США), ДТ-96 (“ДНК-технология”, Россия) и Rotor-Gene 3000/6000 (Corbett Research, Австралия).

Кроме того, ЗАО ”Вектор-Бест“ предлагает комплекты реагентов для выделения нуклеиновых кислот. Для подготовки образцов к амплификации используются два варианта пробоподготовки – осаждение нуклеиновых кислот на магнитные частицы и экспресс-метод выделения ДНК.

Экспресс-методика специально разработана для выделения ДНК из осадка эпителиальных клеток (соскобов, мазков, слюны) для последующей ПЦР-диагностики ИППП, TORCH- и герпесвирусных инфекций. Метод основан на термическом лизисе компонентов биопробы. Простая и быстрая методика позволяет максимально сократить время, необходимое для выделения ДНК, проба готова к постановке ПЦР всего за 20 мин. Входящие в состав набора пробирки с транспортной средой позволяют исключить необходимость повторного забора биологического материала для дополнительных исследований.

Использование магнитных частиц позволяет наиболее эффективно очищать нуклеиновые кислоты от примесей, вследствие чего становится возможным выделение нуклеотидного материала инфекционных агентов из очень широкого спектра биоматериалов (соскобы, мазки, моча, слюна, сперма, сыворотка/плазма крови, биоптаты). Магнитные частицы способствуют упрощению работы с осадком нуклеиновых кислот благодаря его визуализации и фиксации на стенке пробирки (при использовании магнитного штатива).

Специально для анализа клинических образцов для амплификаторов MiniOpticon, iQ5 iCycler, CFX96 (BioRad, США) разработана сервисная программа “РеалБест Диагностика”. Программа имеет русскоязычный интерфейс, учет результатов происходит автоматически. Это обеспечивает минимальное участие оператора в процессе обработки результатов анализа и надежность их интерпретации.

Список использованной литературы

1. Бочкарев Е.Г., Сергеев Ю.В., Рюмин Д.В. Место ПЦР в диагностике урогенитальных инфекций: взгляд клиницистов // Вестник последипломного медицинского образования: научно-практический и информационный журнал. 2001. № 2. С. 1216.

2. Дмитриев Г.А. Урогенитальная хламидийная инфекция. Подходы к диагностике и терапии // Инфекции, передаваемые половым путем. 2002. № 2. С. 2124.

3. Молочков В.А., Иванов О.Л., Чеботарев В.В. Инфекции, передаваемые половым путем. Клиника, диагностика, лечение. М.: “Медицина”. 2006. 632 с. 

Перейти к другим публикациям

Узнать о подписке на журнал

*Статья приведена с сокращениями



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

Обновить руководящий состав медорганизаций

Есть задача – обновить руководящий состав медорганизаций

Федот ТУМУСОВ: журналу «Здравоохранение». «Есть задача – обновить руководящий состав медорганизаций»





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль