Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа

9467
Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа

Внутрилабораторный контроль качества (ВКК) – система процедур, проводимых с применением контрольных материалов или на основе статистического анализа результатов исследований проб пациентов для оценки характеристик аналитического качества используемых методик исследования с целью удовлетворения требований по качеству и повседневного мониторинга стабильности результатов [3].

Подробный порядок проведения ВКК количественных клинических лабораторных исследований приводится в Правилах внутрилабораторного контроля качества количественных лабораторных исследований, утвержденных приказом Минздрава России от 07.02.2000 № 45 [4] и в Отраслевом стандарте ОСТ 91500.13.0001-2003 “Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов” [5].

Что касается контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа (ИФА), то первая попытка описания порядка ВКК была предпринята в методических рекомендациях “Применение контрольных образцов для внутрилабораторного контроля качества скринингового ИФА на наличие антител к ВИЧ” [1]. В методических рекомендациях отмечено, что “в контроле качественных лабораторных исследований производится оценка только одного показателя – воспроизводимости, при этом в роли измеряемой величины при проведении ВКК качественного ИФА выступает отношение оптической плотности (ОП) контрольного образца для ВКК (ВКО) к ОП критического значения (ОПвко/ОПкрит), которое является постоянным для каждого контрольного образца”. Аналог другого показателя ВКК количественного ИФА – оценки правильности – в указанных рекомендациях отсутствует; в данной статье авторы излагают свои предложения по решению этой задачи.

Основными параметрами набора реагентов, обеспечивающими достоверность получаемых результатов, являются чувствительность и специфичность. Авторы предлагают для оценки соответствия анализа заданным изготовителем параметрам набора реагентов применять при проведении ВКК специальные контрольные материалы: с минимальным содержанием серологического маркера – для контроля чувствительности анализа и не содержащий серологического маркера – для контроля специфичности анализа.

Критерием, позволяющим дифференцировать контрольные материалы, является ОПкрит. Ошибки, приводящие к неправильной оценке отрицательного контроля Кили положительного контроля К+ (если вычисление ОПкрит связано с К+), приводят к неправильному вычислению ОПкрит, а значит, к ошибкам в интерпретации результатов, полученных при исследовании проб пациентов.

Для оценки вариации результатов измерений контрольного материала для ВКК неколичественного ИФА (внутрии межсерийной сходимости) могут быть применимы те же параметры вариационной статистики, что и для оценки разброса результатов, получаемых количественными методами, т. е. среднее значение, среднеквадратическое отклонение и коэффициент вариации CV. Использование этих параметров правомочно для того контрольного материала, значения ОП которого находятся в области пропорциональной зависимости ОП от концентрации серологического маркера.

Для оценки сходимости результатов, построения контрольной карты и текущего оперативного контроля использовался контрольный образец КО1* с истинно положительным результатом (т. е. с известной положительной реакцией на серологический маркер и точно классифицируемый набором реагентов как положительный), при этом значение его ОП находится в области линейной зависимости от концентрации маркера, примерно от 0,5 до 1,5 оптических единиц.

Для оценки чувствительности анализа в лаборатории применялся контрольный образец КО2** с истинно положительным результатом, значение которого превышает ОПкрит, но при этом является достаточно низким (от одного до двух ОПкрит).

Для оценки специфичности анализа в лаборатории применялся контрольный образец КО3*** с истинно отрицательным результатом (с известной отрицательной реакцией на серологический маркер и точно классифицированный набором реагентов как отрицательный), значение ОП которого должно быть ниже ОПкрит. Характеристики КО2 и КО3 в виде коэффициентов позитивности Кпоз = ОПобр/ ОПкрит, установленных при их аттестации с использованием разных наборов реагентов, должны приводиться в приложении к инструкции по применению контрольных материалов.

Контрольные материалы, изготовленные на основе сыворотки или плазмы крови человека, являются потенциально инфекционными. При обращении с ними необходимо соблюдать меры предосторожности, предусмотренные правилами безопасности инструкции по применению контрольных материалов, использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99 и МУ-287-113.

Количество закупаемых контрольных материалов одной партии (серии), а также наборов реагентов одной серии должно быть достаточным для проведения оперативного контроля качества в течение не менее 3 месяцев (рекомендуется закупка контрольных материалов в расчете на 1 год).

Подготовка контрольного материала к исследованию проводится в соответствии с инструкцией по применению контрольного материала. Контрольные материалы должны исследоваться так же, как и пробы пациентов, т. е. в тех же аналитических сериях и условиях.

Хранение контрольных материалов осуществляется в соответствии с инструкцией изготовителя.

Если контрольные материалы не определяются правильно, например КО2 не определяется как положительный, а КО3 не определяется как отрицательный в наборе реагентов, то они не могут быть использованы для проведения ВКК. Рекомендуется применять контрольные материалы в тех наборах реагентов, в которых они исследованы (информация об этом должна содержаться в приложении к инструкции по применению контрольного материала). Возможно применение контрольных материалов и наборов реагентов одного изготовителя.

Порядок проведения внутрилабораторного контроля качества

Порядок проведения ВКК включал три последовательные стадии:

1) оценку внутрисерийной сходимости результатов измерений;

2) оценку чувствительности и специфичности анализа в лаборатории, ОПкрит, межсерийной сходимости результатов измерений, построение контрольных карт;

3) проведение оперативного контроля качества результатов лабораторных исследований в каждой аналитической серии.

На первой стадии в аналитической серии проводилось 10 измерений КО1, на второй стадии в установочной серии – 20 измерений КО1, КО2 и КО3 в 20 аналитических сериях, на третьей стадии осуществлялся оперативный контроль с применением КО1, КО2 и КО3.

Стадия 1. Оценка внутрисерийной сходимости результатов измерений Проводилось 10 измерений КО1 в одной аналитической серии (на одном планшете). На основе полученных 10 значений рассчитывали коэффициент внутрисерийной вариации методики CV10 и сравнивали со значениями таблицы.

Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа

Вычисленное значение CV10 в лаборатории должно быть меньше полученного в рамках ПВОК предельно допустимого значения CVсход. Если вычисленный CV10 для данного серологического маркера превышает табличное значение, следует провести работу по снижению внутрисерийной вариации данного вида анализа.

Если внутрисерийная вариация метода соответствует описанным выше нормам, переходим к следующей стадии.

Стадия 2. Оценка чувствительности и специфичности анализа в лаборатории, ОПкрит , межсерийной сходимости результатов измерений, построение контрольной карты

На этой стадии проводили 20 измерений контрольных материалов КО1, КО2 и КО3 в 20 аналитических сериях в течение 20 дней. Для сокращения продолжительности построения контрольной карты, а также для экономии контрольных материалов возможно проведение измерений дважды в день в течение 10 дней.

С помощью контрольного материала КО2 проводилась оценка чувствительности соответствующих исследований. Основное требование к КО2 заключается в том, что во всех 20 аналитических сериях должен быть получен положительный результат, т. е. значения ОП КО2 должны превышать ОПкрит. В остальных случаях необходимо найти причины ошибок, устранить их и повторить анализ.

С помощью контрольного материала КО3 проводится оценка специфичности соответствующих исследований. Основное требование к КО3 заключается в том, что во всех 20 аналитических сериях должен быть получен отрицательный результат, т. е. значения ОП КО3 должны быть ниже ОПкрит. В остальных случаях необходимо найти причины ошибок, устранить их и повторить анализ.

Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа

Для ОПкрит. ср. рассчитывают контрольные пределы ± 3S.

После получения ожидаемых показателей КО1, КО2 и КО3 переходят к этапу построения контрольной карты по значениям КО1. Из 20 полученных результатов вычисляют среднюю арифметическую величину Х ср, среднеквадратическое отклонение S и контрольные пределы ±1S, ±2S, ±3S. Наносят полученные значения на карту в виде горизонтальных линий (рисунок). После построения контрольных карт переходят к следующей стадии.

Стадия 3. Проведение оперативного контроля качества результатов лабораторных исследований в каждой аналитической серии с помощью КО1, КО2 и КО3

Построенную контрольную карту КО1 используют для осуществления оперативного (текущего) контроля качества результатов определения исследуемого показателя. С этой целью в каждой аналитической серии измеряются показатели ОП КО1, КО2 и КО3.

Вычисленное при оценке результатов значение ОПкрит должно находиться в ранее рассчитанном интервале ОПкрит. ср. ± 3S. Если значение ОПкрит находится вне указанных пределов, необходимо найти ошибки, устранить их и провести анализ заново.

Если ОПкрит находится в установленном интервале ОПкрит. ср. ± 3S, переходят к оценке КО2 и КО3. Если КО2 не определяется как положительный и/или КО3 не определяется как отрицательный, то значение КО1 не засчитывается; необходимо найти ошибки, устранить их и провести анализ заново.

Если КО2 определяется как положительный, а КО3 определяется как отрицательный, то значение КО1 засчитывается и наносится на карту КО1.

Оценку результатов исследования контрольного материала КО1 проводят с использованием контрольных правил Вестгарда.

Проведение внутрилабораторного контроля качества неколичественных методов иммуноферментного анализа

Замена контрольного материала

В соответствии с правилами ВКК количественных лабораторных исследований для поддержания непрерывности внутрилабораторного контроля в период, когда используемого КО1 остается только на 20 аналитических серий, рекомендуется переходить на новый контрольный материал путем “перекрывания”. Для этого новый КО1 исследуют в течение 20 рабочих дней в каждом опыте параллельно с используемыми КО1, после чего для нового контрольного материала КО1 рассчитывают контрольные пределы и строят новую контрольную карту. В период получения данных 20 аналитических серий возможно вычисление среднего значения ОП КО1 из 3 первых полученных значений, при этом возможно использование среднеквадратического отклонения S из предыдущих расчетов для построения временных контрольных пределов вокруг нового среднего. Переход к новым значениям среднеквадратического отклонения S осуществляется после накопления 20 новых значений КО1. Что касается КО2 и КО3, то после окончания одной серии любого из этих контрольных материалов вводится другая, необходимости в параллельных постановках нет.

Замена серии набора реагентов

В случае перехода на новую серию набора реагентов исследуют все контрольные материалы КО1, КО2 и КО3 в 20 аналитических сериях, как на стадии 2. По полученным 20 значениям КО1 рассчитывают контрольные пределы и строят новую контрольную карту. В период получения данных 20 аналитических серий возможно вычисление среднего значения ОП КО1 из 3 первых полученных значений, при этом возможно использование среднеквадратического отклонения S из предыдущей карты для построения временных контрольных пределов вокруг нового среднего. Переход к новым значениям среднеквадратического отклонения S осуществляется после накопления 20 новых значений КО1.

На основе имеющейся нормативной правовой базы авторами разработан метод ВКК неколичественных методов ИФА с применением новых контрольных образцов, который может быть использован в работе клинико-диагностических лабораторий.

Список использованной литературы

1. Бобкова М.Р., Буравцова Е.В., Калашникова Т.В. и др. Применение контрольных образцов для внутрилабораторного контроля качества скринингового ИФА на наличие антител к ВИЧ. М., 2004.

2. Нетесова И.Г., Ярославцева О.А., Цой Л.В. и др. Результаты участия 360 лабораторий России в Программе Внешней Оценки Качества исследований HBsAg // Клиническая лабораторная диагностика. 2007. № 3. С. 47–50.

3. ГОСТ Р 53133.3-2008 “Контроль качества клинических лабораторных исследований”.

4. Приказ Минздрава России от 07.02.2000 № 45 “О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации”.

5. Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабо раторных исследований с использованием контрольных материалов. ОСТ 91500.13.0001-2003.  

Читайте в ближайших номерах журнала «Справочник заведующего КДЛ»
    Читать >>


    Ваша персональная подборка

      Подписка на статьи

      Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

      Рекомендации по теме

      Мероприятия

      Мероприятия

      Повышаем квалификацию

      Посмотреть

      Самое выгодное предложение

      Самое выгодное предложение

      Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

      Живое общение с редакцией

      А еще...








      Наши продукты






















      © МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

      Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

      Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
      Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ № ФС77-64203 от 31.12.2015.

      Политика обработки персональных данных

      
      • Мы в соцсетях
      Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×
      Сайт предназначен для медицинских работников!

      Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
      Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

      — 9400 статей
      — 4000 ответов на вопросы
      — 80 видеосеминаров
      — множество форм и образцов документов
      — бесплатная правовая база
      — полезные калькуляторы

      Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

      У меня есть пароль
      напомнить
      Пароль отправлен на почту
      Ввести
      Я тут впервые
      И получить доступ на сайт Займет минуту!
      Введите эл. почту или логин
      Неверный логин или пароль
      Неверный пароль
      Введите пароль
      ×