Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

2809
Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

Поиск источников ошибок при проведении иммуноферментного анализа (ИФА) – основная цель программы внешней оценки качества (ПВОК) ЗАО «Вектор-Бест».

В комплекс материалов ПВОК входят: обращение к участнику ПВОК с описанием алгоритма поиска ошибок; тестовые задания с вопросами по выявлению серологических маркеров различных инфекций методом ИФА в лаборатории; панели сывороток, содержащих и не содержащих маркеры инфекций ВИЧ, гепатитов В и С, сифилиса, хламидиоза; контрольные наборы, позволяющие сравнить результаты анализов, выполненных разными лабораториями-участницами согласно алгоритму ПВОК [1, 2, 3].

В работе представлены результаты 13 лабораторий станций переливания крови из 11 городов России, участвовавших в ПВОК ЗАО «ВекторБест» в 2008–2009 гг. Каждая лаборатория получала «Панель сывороток ПВОК – HBsAg» 10-го цикла (далее – Панель), контрольный набор реагентов для выявления HBsAg «Вектогеп ВHBs-антиген» (комплект 3) разных серий, тестовое задание и обращение к участнику ПВОК.

Алгоритм поиска ошибок описан в обращении и включал в себя проведение анализа: на вскрытом наборе (протокол № 2); разными операторами (протокол № 4); на разных процедурах проведения ИФА, предусмотренных инструкцией по применению (протокол № 5); с использованием одноразовых емкостей или наконечников многоразово (если такое практикуется (протоколы № 7, 8)); с промывкой планшетов вручную в сравнении с промывкой на автоматическом вошере, на случай неисправности вошера (протокол № 9); проверку дистиллированной воды (протокол № 6); проведение подтверждающего теста на HBsAg (протокол № 10).

Результаты исследований Панели с использованием контрольного набора оформлялись в протоколе № 1. Панель состояла из 11 образцов: 8 образцов, содержащих HBsAg, в т. ч. 4 образца контрольного материала для внутрилабораторного контроля качества анализа на HBsAg (ВЛК-HBsAg) с одинаковой концентрацией HBsAg (1,00 МЕ/мл) и 4 образца с разной концентрацией HBsAg (от 0,05 до 0,10 МЕ/мл); 3 образца, не содержащих HBsAg. Аттестацию Панели проводили в 2008 г. с использованием наборов реагентов разных изготовителей (Bio-Rad, «MonoLisa Ag HBs PLUS»; DiaSorin, «ETI-MAK-4»; Murex Biotech Ltd, «Murex HBsAg Version 3»; НПО Диагностические системы, «ДС-ИФА – HBsAg», ЗАО «Вектор-Бест», «Вектогеп В-HBs-антиген») с помощью отраслевого стандартного образца ОСО-HBsAg, серия 03, НПО «Диагностические системы». Объем каждого образца Панели – 1 мл. Анализ ошибок проводили на основании ответов на вопросы тестового задания [4].

Всего из 13 лабораторий поступили 54 протокола – 13 протоколов № 1 и 41 протокол № 2–10. Помимо исследований образцов Панели с использованием присланного набора реагентов, лаборатории – участницы ПВОК провели параллельные исследования образцов Панели с применением ранее использованного (вскрытого) набора другой серии или другого изготовителя (8 протоколов № 2), нового (невскрытого) набора другой серии или другого изготовителя (9 протоколов № 3), на разных процедурах анализа (8 протоколов № 5), в подтверждающем тесте (8 протоколов № 10).

Кроме того, четыре лаборатории проверили работу разных операторов (протокол № 4), одна лаборатория использовала повторно наконечники (протокол № 7), две – повторно ванночки (протокол № 8), одна лаборатория сопоставила промывку вручную с автоматизированной (протокол № 9). Не было прислано ни одного протокола № 6 (проверка дистиллированной воды).

Результаты выявления образцов Панели по данным 13 протоколов № 1 представлены в табл. 1. Правильно выявили все образцы Панели 11 (85,0%) из 13 лабораторий. В двух лабораториях неправильно определены два положительных образца (№ 6 и 7) с содержанием HBsAg 0,10–0,05 МЕ/мл и один отрицательный образец (№ 3) Панели. Для сравнения: из 109 протоколов № 1, полученных от 109 лабораторий из пяти регионов России – участниц ПСВОК 10-го цикла, не было ошибок в 87 протоколах (80,0%) [7].

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

Результаты выявления образцов Панели по данным всех 54 протоколов № 1–10 приведены в табл. 2. Правильность выявления образцов по данным каждого протокола выражали с помощью частоты ошибки (ЧО). ЧО – число ошибочно выявленных образцов, отнесенное к общему числу образцов в контрольной панели, выраженное в процентах. Средняя частота ошибки (СЧО) вычислена как арифметическое среднее всех ЧОi по n протоколам:

СЧО = ΣЧОi /n.

В норме ЧО = 0,0%. ЧО зависит от числа образцов в панели, а также от числа присланных протоколов. Частота одной ошибки при исследовании 11 образцов Панели равна 9,0%. Правильно выявили все образцы Панели 6 (46,0%) из 13 лабораторий в 20 протоколах. В остальных 7 лабораториях (54,0%), по данным 34 протоколов, допущены ошибки при определении 8 положительных образцов № 4–11, в т. ч. 4 образцов ВЛКHBsAg, и 2 отрицательных образцов № 1 и 3.

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

По данным всех протоколов, полученных от 113 лабораторий из 5 регионов России – участниц ПВОК 10-го цикла, не было ошибок в протоколах из 50 лабораторий (44,0%) [7]. По данным каждого протокола определяли сходимость в виде коэффициента вариации (СV):

CV = S/ОП ВЛКср × 100%,

где S – стандартное отклонение,

ОП ВЛКср – вычисляется по значениям оптической плотности для 4 образцов ВЛК-HBsAg (сыворотки для внутрилабораторного контроля качества), входящих в состав Панели.

Воспроизводимость вычисляли как среднее сходимостей CVi по результатам n аналитических серий, когда в каждой аналитической серии меняется хотя бы один параметр, в виде:

CVср = ΣCVi /n.

Ранее были установлены границы 95,0% доверительного интервала для индивидуальных значений CV в лабораториях: от 0,0 до 11,3% – при оценке сходимости, и от 0,0 до 14,2% – при оценке воспроизводимости [5]. В таблице 3 приведены значения CVср для 11 лабораторий, приславших более одного протокола. Самые высокие значения CVср – 17,1 и 30,1% – отмечены у лабораторий, совершивших наибольшее число ошибок: СЧО 18,2 и 45,5% соответственно.

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

Анализ ошибок проводили на основании ответов на вопросы тестового задания, позволяющие оценить качество исследования [6]. В одной лаборатории вместо пластиковых одноразовых наконечников для отбора раствора для разведения конъюгата (вопрос 25) и субстратного буферного раствора (вопрос 27) использовали стеклянный мерный цилиндр. В этой же лаборатории раствор конъюгата в рабочем разведении, раствор тетраметилбензидина в рабочем разведении наливали в стеклянные флаконы (вопросы 28, 29).

Всю посуду обрабатывали 6,0% раствором перекиси водорода, промывали проточной и дистиллированной водой, использовали многократно (вопрос 30). Известно, что хлори перекисьсодержащие дезинфицирующие средства при попадании в рабочие реагенты компонентов диагностических наборов негативно влияют на качество исследований, выполняемых методом ИФА [6].

Еще в одной лаборатории раствор тетраметилбензидина в рабочем разведении также наливали в стеклянный флакон (вопрос 29). Мерный цилиндр для приготовления фосфатно-солевого буферного раствора с твином, емкости для хранения дистиллированной воды, раствора фосфатно-солевого буферного раствора с твином, прилагаемые к вошеру, в четырех лабораториях мыли с применением синтетических моющих средств или моющим раствором с пергидролем (вопрос 38). Две лаборатории не контролировали параметры дистиллированной воды (вопрос 7). Закрытая емкость с раствором 6,0% перекиси водорода на столе отмечена в четырех лабораториях (вопрос 39).

Таким образом, результаты обработки 54 протоколов, полученных из 13 лабораторий, показали, что правильно выявили образцы Панели 6 (46,0%) из 13 лабораторий. Установлены причины неправильного выявления образцов Панели при проведении анализов в 7 (54,0%) из 13 лабораторий – они связаны с многократным применением одноразовой (ванночки, наконечники для автоматических дозаторов) или стеклянной посуды, мытье которой осуществлялось с использованием синтетических моющих средств или раствора с пергидролем; применением дезинфицирующего раствора (6,0% перекись водорода), негативно влияющего на качество выполнения ИФА; отсутствием контроля параметров дистиллированной воды. 

*Статья приведена с сокращениями

Перейти к другим публикациям

Узнать о подписке на журнал



Подписка на статьи

Чтобы не пропустить ни одной важной или интересной статьи, подпишитесь на рассылку. Это бесплатно.

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Живое общение с редакцией

А еще...

Критерии качества 2017: готовимся к оценке по-новому

Интервью

ФФОМС Наталья Стадченко

Председатель ФФОМС Наталья Стадченко в интервью журналу «Здравоохранение»:

Для медработника страховой представитель – это и контролер, и юридический консультант, и помощник одновременно





Наши продукты




















© МЦФЭР, 2006 – 2017. Все права защищены.

Портал zdrav.ru - медицинский портал для медицинских работников. Новости и статьи для главных врачей, медицинских сестер, заместителей главного врача, специалистов по качеству медицинской помощи, заведующих КДЛ, медицинских юристов, экономистов ЛПУ, провизоров и руководителей аптек.

Информация на данном сайте предназначена только для медицинских работников. Ознакомьтесь с соглашением об использовании.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации Эл № ФС77-38302 от 30.11.2009


  • Мы в соцсетях
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — журнал в формате pdf

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы продолжить чтение статей на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
×
Сайт предназначен для медицинских работников!

Чтобы скачать файл на портале ZDRAV.RU, пожалуйста, зарегистрируйтесь.
Это займет всего 57 секунд. Для вас будут доступны:

— 9400 статей
— 4000 ответов на вопросы
— 80 видеосеминаров
— множество форм и образцов документов
— бесплатная правовая база
— полезные калькуляторы

Вы также получите подарок — pdf- журнал «Здравоохранение»

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Я тут впервые
И получить доступ на сайт
Займет минуту!
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль