text

🎁 УЛЁТНЫЕ СКИДКИ 30%! Поймать »

Здравоохранение

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

  • 2 октября 2013
  • 2876
Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

Поиск источников ошибок при проведении иммуноферментного анализа (ИФА) – основная цель программы внешней оценки качества (ПВОК) ЗАО «Вектор-Бест».

В комплекс материалов ПВОК входят: обращение к участнику ПВОК с описанием алгоритма поиска ошибок; тестовые задания с вопросами по выявлению серологических маркеров различных инфекций методом ИФА в лаборатории; панели сывороток, содержащих и не содержащих маркеры инфекций ВИЧ, гепатитов В и С, сифилиса, хламидиоза; контрольные наборы, позволяющие сравнить результаты анализов, выполненных разными лабораториями-участницами согласно алгоритму ПВОК [1, 2, 3].

Внимание! Для скачивания доступна новая книга:  «Молекулярно-биологические исследования» ,

В работе представлены результаты 13 лабораторий станций переливания крови из 11 городов России, участвовавших в ПВОК ЗАО «ВекторБест» в 2008–2009 гг. Каждая лаборатория получала «Панель сывороток ПВОК – HBsAg» 10-го цикла (далее – Панель), контрольный набор реагентов для выявления HBsAg «Вектогеп ВHBs-антиген» (комплект 3) разных серий, тестовое задание и обращение к участнику ПВОК.

Алгоритм поиска ошибок описан в обращении и включал в себя проведение анализа: на вскрытом наборе (протокол № 2); разными операторами (протокол № 4); на разных процедурах проведения ИФА, предусмотренных инструкцией по применению (протокол № 5); с использованием одноразовых емкостей или наконечников многоразово (если такое практикуется (протоколы № 7, 8)); с промывкой планшетов вручную в сравнении с промывкой на автоматическом вошере, на случай неисправности вошера (протокол № 9); проверку дистиллированной воды (протокол № 6); проведение подтверждающего теста на HBsAg (протокол № 10).

Результаты исследований Панели с использованием контрольного набора оформлялись в протоколе № 1. Панель состояла из 11 образцов: 8 образцов, содержащих HBsAg, в т. ч. 4 образца контрольного материала для внутрилабораторного контроля качества анализа на HBsAg (ВЛК-HBsAg) с одинаковой концентрацией HBsAg (1,00 МЕ/мл) и 4 образца с разной концентрацией HBsAg (от 0,05 до 0,10 МЕ/мл); 3 образца, не содержащих HBsAg. Аттестацию Панели проводили в 2008 г. с использованием наборов реагентов разных изготовителей (Bio-Rad, «MonoLisa Ag HBs PLUS»; DiaSorin, «ETI-MAK-4»; Murex Biotech Ltd, «Murex HBsAg Version 3»; НПО Диагностические системы, «ДС-ИФА – HBsAg», ЗАО «Вектор-Бест», «Вектогеп В-HBs-антиген») с помощью отраслевого стандартного образца ОСО-HBsAg, серия 03, НПО «Диагностические системы». Объем каждого образца Панели – 1 мл. Анализ ошибок проводили на основании ответов на вопросы тестового задания [4].

Всего из 13 лабораторий поступили 54 протокола – 13 протоколов № 1 и 41 протокол № 2–10. Помимо исследований образцов Панели с использованием присланного набора реагентов, лаборатории – участницы ПВОК провели параллельные исследования образцов Панели с применением ранее использованного (вскрытого) набора другой серии или другого изготовителя (8 протоколов № 2), нового (невскрытого) набора другой серии или другого изготовителя (9 протоколов № 3), на разных процедурах анализа (8 протоколов № 5), в подтверждающем тесте (8 протоколов № 10).

Кроме того, четыре лаборатории проверили работу разных операторов (протокол № 4), одна лаборатория использовала повторно наконечники (протокол № 7), две – повторно ванночки (протокол № 8), одна лаборатория сопоставила промывку вручную с автоматизированной (протокол № 9). Не было прислано ни одного протокола № 6 (проверка дистиллированной воды).

Результаты выявления образцов Панели по данным 13 протоколов № 1 представлены в табл. 1. Правильно выявили все образцы Панели 11 (85,0%) из 13 лабораторий. В двух лабораториях неправильно определены два положительных образца (№ 6 и 7) с содержанием HBsAg 0,10–0,05 МЕ/мл и один отрицательный образец (№ 3) Панели. Для сравнения: из 109 протоколов № 1, полученных от 109 лабораторий из пяти регионов России – участниц ПСВОК 10-го цикла, не было ошибок в 87 протоколах (80,0%) [7].

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

Результаты выявления образцов Панели по данным всех 54 протоколов № 1–10 приведены в табл. 2. Правильность выявления образцов по данным каждого протокола выражали с помощью частоты ошибки (ЧО). ЧО – число ошибочно выявленных образцов, отнесенное к общему числу образцов в контрольной панели, выраженное в процентах. Средняя частота ошибки (СЧО) вычислена как арифметическое среднее всех ЧОi по n протоколам:

СЧО = ΣЧОi /n.

В норме ЧО = 0,0%. ЧО зависит от числа образцов в панели, а также от числа присланных протоколов. Частота одной ошибки при исследовании 11 образцов Панели равна 9,0%. Правильно выявили все образцы Панели 6 (46,0%) из 13 лабораторий в 20 протоколах. В остальных 7 лабораториях (54,0%), по данным 34 протоколов, допущены ошибки при определении 8 положительных образцов № 4–11, в т. ч. 4 образцов ВЛКHBsAg, и 2 отрицательных образцов № 1 и 3.

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

По данным всех протоколов, полученных от 113 лабораторий из 5 регионов России – участниц ПВОК 10-го цикла, не было ошибок в протоколах из 50 лабораторий (44,0%) [7]. По данным каждого протокола определяли сходимость в виде коэффициента вариации (СV):

CV = S/ОП ВЛКср × 100%,

где S – стандартное отклонение,

ОП ВЛКср – вычисляется по значениям оптической плотности для 4 образцов ВЛК-HBsAg (сыворотки для внутрилабораторного контроля качества), входящих в состав Панели.

Воспроизводимость вычисляли как среднее сходимостей CVi по результатам n аналитических серий, когда в каждой аналитической серии меняется хотя бы один параметр, в виде:

CVср = ΣCVi /n.

Ранее были установлены границы 95,0% доверительного интервала для индивидуальных значений CV в лабораториях: от 0,0 до 11,3% – при оценке сходимости, и от 0,0 до 14,2% – при оценке воспроизводимости [5]. В таблице 3 приведены значения CVср для 11 лабораторий, приславших более одного протокола. Самые высокие значения CVср – 17,1 и 30,1% – отмечены у лабораторий, совершивших наибольшее число ошибок: СЧО 18,2 и 45,5% соответственно.

Поиск ошибок при выявлении HBsAg методом иммуноферментного анализа

Анализ ошибок проводили на основании ответов на вопросы тестового задания, позволяющие оценить качество исследования [6]. В одной лаборатории вместо пластиковых одноразовых наконечников для отбора раствора для разведения конъюгата (вопрос 25) и субстратного буферного раствора (вопрос 27) использовали стеклянный мерный цилиндр. В этой же лаборатории раствор конъюгата в рабочем разведении, раствор тетраметилбензидина в рабочем разведении наливали в стеклянные флаконы (вопросы 28, 29).

Всю посуду обрабатывали 6,0% раствором перекиси водорода, промывали проточной и дистиллированной водой, использовали многократно (вопрос 30). Известно, что хлори перекисьсодержащие дезинфицирующие средства при попадании в рабочие реагенты компонентов диагностических наборов негативно влияют на качество исследований, выполняемых методом ИФА [6].

Еще в одной лаборатории раствор тетраметилбензидина в рабочем разведении также наливали в стеклянный флакон (вопрос 29). Мерный цилиндр для приготовления фосфатно-солевого буферного раствора с твином, емкости для хранения дистиллированной воды, раствора фосфатно-солевого буферного раствора с твином, прилагаемые к вошеру, в четырех лабораториях мыли с применением синтетических моющих средств или моющим раствором с пергидролем (вопрос 38). Две лаборатории не контролировали параметры дистиллированной воды (вопрос 7). Закрытая емкость с раствором 6,0% перекиси водорода на столе отмечена в четырех лабораториях (вопрос 39).

Таким образом, результаты обработки 54 протоколов, полученных из 13 лабораторий, показали, что правильно выявили образцы Панели 6 (46,0%) из 13 лабораторий. Установлены причины неправильного выявления образцов Панели при проведении анализов в 7 (54,0%) из 13 лабораторий – они связаны с многократным применением одноразовой (ванночки, наконечники для автоматических дозаторов) или стеклянной посуды, мытье которой осуществлялось с использованием синтетических моющих средств или раствора с пергидролем; применением дезинфицирующего раствора (6,0% перекись водорода), негативно влияющего на качество выполнения ИФА; отсутствием контроля параметров дистиллированной воды. 

*Статья приведена с сокращениями

Перейти к другим публикациям

Узнать о подписке на журнал

Рекомендации по теме

Мероприятия

Мероприятия

Повышаем квалификацию

Посмотреть

Самое выгодное предложение

Самое выгодное предложение

Воспользуйтесь самым выгодным предложением на подписку и станьте читателем уже сейчас

Мы в соцсетях
А еще:
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
Сайт предназначен для медицинских работников!


Материалы для zdrav.ru готовят лучшие эксперты в сфере здравоохранения. Чтобы защитить их авторские права, многие статьи на нашем сайте закрыты

Подтвердите ваш статус медработника - регистрация займет одну минуту.

Пакет готовых инструкций, чтобы пройти проверку Росздравнадзора в подарок!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
И получить доступ на сайт Займет минуту!
Зарегистрироваться
×
Журнал
Гость, Ваш бесплатный доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ» сгорает через

Гость, вам предоставлен VIP-доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»:
возможность скачивать шаблоны • доступ к видеотренингам • книги для КДЛ
Активировать доступ  
Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.